طراحی واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تشخیص مولکولی سالمونلا تیفی

سابقه و هدف: سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید میباشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روشهای کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقتگیر میباشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارائهی نوعی روش مولکولی واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR: Polymerase Chain Reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدامهای درمانی- بهداشتی مناسب و به موقع است. مواد و روشها: در این مقاله تحقیقاتی ژن اختصاصی viaB مربوط به باکتری سالمونلا تیفی، هدفگذاری و از نرمافزار Generunner، برای طراحی پرایمرهای اختصاصی استفاده شد. واکنش PCR ژن فوق با استفاده از ژنوم باکتری استاندارد (PTCC 1609) انجام و ویژگی روش نیز با استفاده از ژنوم انواعی از نمونه های کنترل منفی تعیین گردید. به منظور ساخت کنترل مثبت، تعیین حساسیت و حد تشخیص، کلونینگ محصولات PCR در وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T انجام گرفت. یافته ها: الکتروفورز محصولات PCR، باندی به طول 441 جفتباز را برای ژن viaB نشان داد. نمونه های کنترل منفی مورد استفاده هیچ باندی ایجاد نکردند. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف تأیید گردید. بحث و نتیجه گیری: پرایمرهای طراحی شده برای ژن viaB در این روش میتواند با حساسیتی حدود 19 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم بهکار رود و با ردیابی سریع و دقیق باکتری، از ایجاد عوارض پایدار و ناخواسته جلوگیری نماید.