جداسازی و کلونینگ ژن فولیکول استیمولایتینگ هورمون انسانی hFSH با سیگنال سکانس طبیعی ژن در شاتل وکتورpPIC9 مخمر متیلوتروف Pichia pastoris

سابقه و هدف: فولیکول استیمولاتینگ هورمون (FSH) از خانواده هورمون‌های گلیکوپروتئینی هیپوفیز و متشکل از دو زیرواحد آلفا و بتا می‌باشد که فعالیت بیولوژیک این هورمون مربوط به زیرواحد بتای آن است. این مطالعه به منظورجداسازی ناحیه کدکننده ژن انسانی FSHβ با سیگنال سکانس طبیعی ژن و کلونینگ آن در شاتل وکتورpPIC9 تحت پروموتر AOX1 و سیگنال سکانس آلفا فاکتور انجام شد. مواد و روش‌ها: طی دو مرحله امپلیفیکاسیون و کلونینگ از روی ژنوم یک زن سالم، این ژن به صورت یک قطعه kb2 با بازسازی ناحیه 5´ قبل از کدون شروع جدا و اکسپرشن وکتور pPIC9-F1 ساخته شد. یافته‌ها: هضم آنزیمی و سکانسینک ساختار و ترادف صحیح ژن FSHβ با حفظ نواحی اسپلایسینگ را درpTV-2019 نشان داد. Restriction analysis و PCR با پرایمرهای AOX1 نشان داد، pPIC9F1 دارای ساختار صحیح می‌باشد. نتیجه‌گیری: وکتور نوترکیب pPIC9F1 ساخته شده در این مطالعه شامل ناحیه کدکننده ژن و سیگنال طبیعی آن +sig E2-IVS2-E3)) FSHβ بوده که قادر است این ژن را در ژنوم مخمر تحت پروموتر AOX1 وارد کند، که در این حالت فیوژن پروتئینی شامل سیگنال پپتید آلفا فاکتور- سیگنال پپتید FSH به‌ وجود می‌آید. FSH به نحوی بیان خواهد شد که سیستم مخمری قادر به جدا سازی آلفا فاکتور باشد. به نظر می‌رسد این نخستین تلاش برای کلونینگ ژن انسانی βFSH در سیستم مخمری باشد.