بیان، تخلیص و بررسی عملکرد ناحیه‏ کینازی گیرنده‏ نوترکیب عامل رشد فیبروبلاستی 2bانسانی

 زمینه: گیرنده‏ عامل رشد فیبروبلاستی 2b ( FGFR2b ) در مسیر پیام‏رسانی سلولی و تنظیم فرایندهای مهم زیستی از جمله تمایز و تکثیر سلولی نقش اساسی دارد. تغییرات ژنتیکی نظیر جهش نقطه‏ای در ناحیه­ تیروزین کینازی FGFR2b با سرطان پستان، تخمدان و رحم در ارتباط است.   هدف: مطالعه به منظور بیان و خالص‏سازی مقدار مناسبی از ناحیه کینازی FGFR2b انسانی انجام شد.   مواد و روش‏ها: این مطالعه تجربی در سال 1392 در دانشگاه علوم پزشکی قزوین انجام شد. پلاسمید pLEICS-01 که حاوی ژن ناحیه‏ تیروزین کینازی پروتئین نوترکیب FGFR2b بود به باکتری مستعد اشرشیاکلی BL21 جهت بیان ژن مورد نظر انتقال داده شد. بیا ن پروتئین نوترکیب با استفاده از IPTG یک میلی‏مولار القا و با استفاده از الکتروفورز روی ژل پلی‏آکریل آمید در حضور SDS ( SDS-PAGE ) ارزیابی شد. پروتئین بیان شده با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی توسط ستون حاوی Ni2+-NTA خالص شد. فعال بودن نمونه پروتئین بعد از دیالیز توسط تعامل با ناحیه­ SH2 فسفولیپاز C (PLC) طبیعی و موتان توسط روش PAGE بررسی شد. داده­ها با آزمون­های آماری واریانس یک طرفه و توکی تحلیل شدند.   یافته‏ها: بررسی SDS-PAGE قبل و بعد از القا شدن نشان داد که پروتئین بیان شده در دمای 20 درجه سانتی­گراد محلول بود. همچنین بررسی SDS-PAGE تأیید کرد که پروتئین خالص شده عاری از آلودگی بود و پروتئین­های باکتریایی نداشت. نتایج PAGE فعال بودن پروتئین خالص شده را تأیید کرد.   نتیجه‏گیری: باتوجه به یافته­ها، ناحیه‏ کینازی گیرنده‏ نوترکیب عامل رشد فیبروبلاستی 2b که یک پروتئین 38 کیلودالتونی است، تولید و خالص شد که به صورت محلول و فعال بود.