بهینه سازی بیان اگزوتوکسین A (دومین I,II)نوترکیب سودوموناس آئروژینوزا، تخلیص و ارزیابی آن در آزمایشگاه
نویسندگان
چکیده مقاله:
زمینه و هدف: اگزوتوکسین A فاکتور مهم در بیماریزایی سودوموناس آئروژینوزا بوده و خنثی سازی آن در مبارزه با عفونتهای ناشی از آن کمک کننده خواهد بود. بنابراین در این مطالعه بهینه سازی تولید و تخلیص اگزوتوکسین A (دومین I,II) و ارزیابی اولیه آن بعنوان کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفنه است. مواد و روش کار: بعد از استخراج DNA از سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO1 و تکثیر با PCR، قطعه ژنی مورد نظر با اتصال به ناقل Pet22b به Escherichia coli BL21 (E.coli) منتقل و بیان آن با روش SDS-Page بررسی گردید و پروتئین نوترکیب با روش افینیتی کروماتوگرافی تخلیص شد. واکنش آنتی ژنیک آن با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس آئروژینوزا با روش وسترن بلاتینگ بررسی گردید. یافته ها: بر اساس نتایج این مطالعه قطعه ژنی اگزوتوکسین A (دومین I,II) سودوموناس آئروژینوزا با اندازه bp 1212 در ژل الکتروفورزمحصول PCR مشاهده گردید که مقایسه توالی ژن کلون شده با توالی ژن اگزوتوکسین سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO1، صحت توالی را تایید کرد. بیان در E. coli BL21 باعث تولید پروتئین مورد نظر با اندازه تقریبی KD45 گردید. بیان در شرایط مختلف نشان داد القای 4 ساعت با نیم میلی مولارIPTG در دمایC˚ 28 بهترین شرایط تولید پروتئین با غلظت بالا بود. نتایج نشان داد این پروتئین در وسترن بلاتینگ با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزای و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس بخوبی واکنش نشان داد. نتیجه گیری: سیستم استفاده شده سیستم مناسبی برای تولید اگزوتوکسین A (دومین I,II) نوترکیب است و می تواند برای تولید این پروتئین در مقیاس بالا مورد استفاده قرار گیرد. واژه های کلیدی: سودوموناس آئروژینوزا، کاندید واکسن، اگزوتوکسین A، واکسن نوترکیب
منابع مشابه
بهینه سازی بیان اگزوتوکسین a (دومین i,ii)نوترکیب سودوموناس آئروژینوزا، تخلیص و ارزیابی آن در آزمایشگاه
زمینه و هدف: اگزوتوکسین a فاکتور مهم در بیماریزایی سودوموناس آئروژینوزا بوده و خنثی سازی آن در مبارزه با عفونتهای ناشی از آن کمک کننده خواهد بود. بنابراین در این مطالعه بهینه سازی تولید و تخلیص اگزوتوکسین a (دومین i,ii) و ارزیابی اولیه آن بعنوان کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفنه است. مواد و روش کار: بعد از استخراج dna از سودوموناس آئروژینوزای سویه pao1 و تکثیر با pcr، قطعه ژنی مورد نظر با اتص...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....
متن کاملهمسانه سازی جایگاه کاتالیتیک اگزوتوکسین A سودوموناس آیروژینوزا
Background and Objective: Antibody against Pseudomonas aeruginosa exotoxin A can be used in immunotherapy together with antibiotics to treat acute burn patients. Exotoxin A is one of the virulence factors in Pseudomonas aeruginosa that comprises of three domains, binding domain, translocation and catalytic domain. The purpose of this study was to produce recombinant domain of the catalytic part...
متن کاملبررسی اثر عصاره آبی و الکلی سیر بر میزان بیان ژن‌های الاستاز و اگزوتوکسین A در سودوموناس آئروژینوزا سویه استاندارد PAO1
Background: Multidrug-resistant bacteria make many problems in clinical therapy, design and manufacture of synthetic drugs. Pseudomonas aeruginosa is one of the most important multidrug-resistance bacteria leads to variety infections in human especially in immunocompromised, patients with severe burns, and nosocomial infections. It Recent years, this organism makes a big challenge in clinical t...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pila) از سویه pao1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله pcr جدا گردید و در وکتور بیانی pet-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت. و...
متن کاملکلونینگ و بیان دومین انتهای آمینی فلاژلین پسودوموناس آئروژینوزا و ارزیابی آنتی‌بادی‌های تولید شده بر علیه آن در مهار حرکت پسودوموناس آئروژینوزا
Background and Objective: Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen that causes severe and lethal infections in immunocompromised individuals. This bacterium possesses a single polar flagellum. Flagellum and its subunit Flagellin play important roles in the pathogenesis of P. aeruginosa. Flagellin induces immune responses by interaction of its N-terminal domain with TLR-5. Our main ai...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 7 شماره 3
صفحات 495- 507
تاریخ انتشار 2016-01
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023