بهینه سازی بیان، استخراج و تخلیص ناحیه N- ترمینال ژن IpaD شیگلا دیسانتری با استفاده از آنالیز پروتئومیکسی

نویسندگان

  • هنری, حسین 1مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، ایران
  • اولاد, غلامرضا 1مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، ایران
  • حصارکی, مهدی 1مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، ایران
  • زارع, مختار 1مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، ایران
  • سعادتی, مجتبی 1مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، ایران
  • هیئت, محمد مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی
چکیده مقاله:

زمینه و هدف: باکتری شیگلا دیسانتری یکی از عوامل پاتوژن مهم است که علی‌رغم تلاش‌های چندین ساله برای تهیه واکسن علیه آن هنوز مطالعات گسترده پیرامون آن ادامه دارد. محصولات پلاسمید تهاجمی شیگلا (Ipa) نقش مهمی در تهاجم باکتری ایفا می‌کنند. پروتئین IpaD یکی از اعضای این خانواده است که به عنوان کاندید واکسن شیگلا مطرح می‌باشد. مطالعات متعدد بر روی این پروتئین نشان داده که ناحیه N- ترمینال آن نقش مهمی در فرآیند تهاجمی باکتری دارد. این مطالعه با هدف بهینه سازی بیان N- ترمینال ژن IpaD به منظور افزایش تولید پروتئین نو ترکیب انجام شد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی-آزمایشگاهی باکتری E. coli BL21(DE3) حامل پلاسمید pET-28a که ژن ناحیه N- ترمینال IpaD در آن همسانه سازی شده بود جهت مطالعات مورد استفاده قرار گرفت. پس از کشت باکتری، تاثیر سه فاکتور زمان القا، دما و غلظت ماده القا کننده ایزو-پروپیل-تایوبتا دی گالاکتوپیرانوزید (IPTG) بر میزان بیان، با استفاده از ژل سدیم دو دسیل سولفات-پلی آکریل آمید (SDS-PAGE) به صورت کیفی بررسی گردید. با استفاده از تصاویر دو بعدی تهیه شده از ژل‌ها با کمک نرم افزار آنالیز ژل‌های دو بعدی بررسی کمی بیان پروتئین صورت پذیرفت. مراحل استخراج و تخلیص پروتئین نوترکیب با کمک روش شیب اوره آغاز و با عبور نمونه‌ها از ستون کروماتوگرافی پایان یافت. یافته‌ها: نتایج بر روی ژل‌های SDS-PAGE نشان داد که میزان تقریبا مشابهی از تولید پروتئین نوترکیب در زمان‌ القا، دما و غلظت های مختلف IPTG بیان وجود دارد، اما یافته‌های نرم افزاری نشان داد بهترین شرایط بیان ناحیه N- ترمینال پروتئین IpaD در وکتور pET-28a دمای 37 درجه سانتی‌گراد، غلظت 7/0 میلی مولار IPTG و زمان 3 ساعت بعد از القا می‌باشد. نتیجه‌گیری: بر اساس نتایج این مطالعـــه هر پروتئین بعد از فرآیند همسانه سازی شرایط بیان مخصوص به خود را دارا می‌باشد که شرایط دمایی و طول زمان القا سلول‌ها در مقدار تولید پروتئین موثرتر می‌باشند.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

بهینه سازی بیان، استخراج و تخلیص ناحیه n- ترمینال ژن ipad شیگلا دیسانتری با استفاده از آنالیز پروتئومیکسی

زمینه و هدف: باکتری شیگلا دیسانتری یکی از عوامل پاتوژن مهم است که علی رغم تلاش های چندین ساله برای تهیه واکسن علیه آن هنوز مطالعات گسترده پیرامون آن ادامه دارد. محصولات پلاسمید تهاجمی شیگلا (ipa) نقش مهمی در تهاجم باکتری ایفا می کنند. پروتئین ipad یکی از اعضای این خانواده است که به عنوان کاندید واکسن شیگلا مطرح می باشد. مطالعات متعدد بر روی این پروتئین نشان داده که ناحیه n- ترمینال آن نقش مهمی ...

متن کامل

بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxA واجد سه جهش هدفمند (E167Q-A231D-G234E) شیگلا دیسانتری و تخلیص آن

چکیده: هدف: شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد AوB) یکی از مهمترین باکتریهای بیماریزا‌ی روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن ، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دستیابی به پروتئین نوترکیب از نوع stxA وجود دارد.هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxA موتانت و تولید پروتئین بیانی آن بعنوان کاند...

متن کامل

طراحی ژن stxA موتانت (G234E- R170L -A231D) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن

زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا‌ی روده‌ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع A (stxA) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد ...

متن کامل

جداسازی، همسانه سازی و امتزاج ناحیه n-ترمینال ژن ipad شیگلا دیسانتریه و زیرواحد b سم ریسین

شیگلا دیسانتریه پاتوژن مهمی است که باعث ایجاد عفونت در روده انسان می شود. آنتی ژنipad نقش مهمی در بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلا دارد. چالش استفاده از پروتئین ipad در طراحی واکسن مخاطی، قدرت پایین و عدم انتقال آن به بافتهای مخاطی روده می باشد. با اتصال ناقل و ادجوانت گیاهی rtb به آنتی ژن ipad، می توان به رفع چالش تولید واکسن مخاطی علیه شیگلوزیس پرداخت. این تحقیق با هدف ساخت یک کاست ژنی شا...

متن کامل

همسانه‌سازی، امتزاج و بررسی بیان دومن -a1 آنتی‌ژن حفاظتی (PA20) باسیلوس آنتراسیس و N- ترمینال ipaD شیگلا در اشرشیا کلی

زمینه و هدف: جنس شیگلا یکی از عوامل اصلی بیماری اسهال در انسان و باسیلوس آنتراسیس عامل سیاه‌زخم (یک بیماری مشترک بین انسان و دام) می‌باشد. یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماریزایی شیگلا، پروتئین IpaD است. همسانه‌سازی N ترمینال ژن ipaD به همراه ژن pa20 که دارای نقش ایمنی‌زایی است، به‌عنوان کاندید واکسن نوترکیب می‌تواند مطرح باشد. در این مطالعه بیان ژن ممزوجی دومن -a1 آنتی‌ژن حفاظتی (PA20) باسیلوس آن...

متن کامل

طراحی ژن stxa موتانت (g۲۳۴e- r۱۷۰l -a۲۳۱d) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن

زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا ی روده ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع a (stxa) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 14  شماره 2

صفحات  64- 73

تاریخ انتشار 2012-06

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023