استفاده از ویروس های نوترکیب مشتق از HIV-1 برای ترانسداکشن سلول های HT1080 با هدف ژن درمانی بیماران بتا - تالاسمی

سابقه و هدف: یکی از روش های درمانی موثر برای بیماری بتاتالاسمی، ژن درمانی توسط ویرال وکتورها می باشد. هدف از این مطالعه ساخت لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن بتاگلوبین و mini LCR جهت انتقال سازه ژنی مورد نظر به سلول های هدف به منظور ژن درمانی بتاتالاسمی ماژور می باشد. روش بررسی: در این مطالعه بنیادی - کاربردی، هر یک از قطعات ژن بتاگلوبین و mini LCR در یک لنتی وکتور به نام pLenti-Destکلون شدند. طی ترانسفکشن هم زمان وکتور نهایی به همراه سه وکتور کمکی با لیپوفکتامین 2000 به درون رده سلولی 293T، لنتی ویروسهای نوترکیب حاوی سازه ژنی مورد نظر تولید و با RT PCR تایید شدند.یافته ها: تیتر این لنتی ویروس های نوترکیب در رده سلولی HT1080 تعیین شد. ترانسداکشن سلول های هدف در حضور پلی برن 2 برابر شد. سلول های HT1080 ترانسدیوس شده پس از دو هفته انتخاب آنتی بیوتیکی باقی ماندند. DNA این کلونی های باقی مانده استخراج و با روش PCR اینتگره شدن سازه ژنی ساخته شده تایید شد. MOI اپتیمم این ویروس ها برای سلول HT1080 بدست آمد. نتیجه گیری: می توان از لنتی ویرال وکتورها سبب انتقال موثر، کارآمد و پایدار ژن به سلول های پستانداران مانند سلول های بنیادی با هدف ژن درمانی بسیاری از بیماری های ژنتیکی از جمله بتاتالاسمی و سرطان استفاده کرد.