هدف:بافت پوششی رنگدانه دار شبکیه (rpe ) به صورت تک لایه بین فوتورسپتور ها و رگ های خونی قرار گرفته است. سلول های rpe نقش مهمی را در حفظ و نگهداری عملکرد نرمال شبکیه به عهده دارد. polyhema یک پلیمر هیدروفوب است که مانع از اتصال سلول های پستانداران بر سطح خود می شود. این پلیمر نرم و انعطاف پذیر جزء اصلی ساختار لنز های تماسی است. در مطالعه حاضر اثرپلیمر polyhema به عنوان بستر کشت سلولی بر روی رشد و تمایز سلول های پو ششی رنگدانه دار شبکه انسان بررسی شد. روش ها : سلول های rpe جداشده از کره های چشم اجساد انسانی در سنین جنینی تا نوزادی زیر سه سال (که بیش از 24 ساعت از زمان مرگ آن ها نگذشته بود ) از بانک چشم جمهوری اسلامی ایران تهیه شد و در محیط dmem/f12 غنی شده با 10% سرم جنین گوساله (fbs ) کشت داده شدند .پلیمر polyhema در اتانل 95% تهیه شد (mg/ml 12)، اجازه داده شد تا در زیر هود بیولوژیک خشک شود بعد از استریل شدن با uv ، سطح پلیمر با pbs شسته شد . سلول های rpe در پاساژ 2-5 بر روی سطوح کشت کوت شده با پلیمر و سطوح کشت پلی استیرن ( به عنوان کنترل )در ظروف کشت 24 خانه تحت سه محیط dmem/f12, dmem/f12+10%fbs , dmem/f12+30%afکشت شدند. مورفولوژی سلول های rpe کشت شده بر روی پلیمر در یک دوره زمانی مشخص بررسی شد . سرعت تکثیر و مرگ سلولی توسط الیزا بررسی شد . از تست mtt برای بررسی تعداد سلول های زنده استفاده شد .بررسی مارکر های سلول های rpe و مارکر های سلول های پروژنیتور – عصبی به وسیله تکنیک ایمونوسیتوشیمی انجام شد . استخراج rna از نمونه های کشت شده بر روی پلیمر و پلی استیرن انجام شد و به دنبال ساخت cdna بررسی مارکر های سلول های rpe ، مارکر های سلول های شبکیه و مارکر های سلول های پروژنیتوری –عصبی توسط تکنیک real time pcr بررسی شد. نتایج :نتایج نشان می دهند که سلول های کشت شده بر روی پلیمر تشکیل تعداد زیادی کلنی می دهند که با گذشت زمان کلنی ها به یکدیگر متصل شده و تشکیل کلنی واحد بزرگی را می دهد.کلنی های پیگمانته توانای بازیابی در محیط پلی استیرن را دارند.تعداد سلول های زنده بر روی سطح پلیمر و پلی استیرن مشابه و مرگ سلولی بر روی پلیمر وپلی استیرن قابل چشم پوشی است اما تکثیر سلولی در نمونه های پلیمر خیلی کمتر از پلی استیرن است.بیان مارکر های سلول های rpe و سلول های پروژنیتوری – عصبی توسط icc شناسای شد وبیان مارکر های سلول های rpe ، سلول های شبکیه و سلول های پروژنیتوری – عصبی توسط real time pcr محاسبه گردید. بحث و نتیجه گیری : polyhema یک پلیمر هیدروفوب غیر چسبنده است . وقتی سلول های rpe بر روی پلیمر کشت می شوند قادر به چسبیدن به سطح پلیت سلولی نیستند بنابر این به یکدیگر متصل می شوند و تشکیل تعداد زیادی کلنی می دهند .بعد از دو روز ، کلنی ها به شدت بزرگ و پیگمانته می شوند . بازبابی کلنی ها در سطح پلی استیرن، کشت تک لایه ای را حاصل می کند . پلیمر، القا کننده مرگ سلولی در سلول های rpe نبوده است و تکثیر نیز صورت نمی گیردبه نظر می رسد کشت سلول ها بر روی پلیمر، سلول ها را در فاز g0 قرار می دهد . بنابراین تکثیر سلولی کمتر از کنترل است . داده های ارائه شده در این تحقیق نشان دادند که، بیان مارکرهای سلول rpe در نمونه های سلول های کشت شده برروی پلیمر حفظ ماهیت rpe توسط پلیمررا نشان می دهد و نیز بیان مارکر های سلول های پروژنیتوری در سلول های کشت شده بر روی پلیمر نشان می دهد که پلیمر polyhema به منظور حفظ و گسترش سلول های پروژنیتوری – عصبی مفید است.

مقدمه: شبکه آندوپلاسمی به واسطه وجود چاپرون هایی نظیر grp78 نقش مهمی در بلوغ و تاخوردگی پروتئینها بازی میکند. تجمع پروتئین های تا نخورده در شبکه آندوپلاسمی منجر به فرایند استرس شبکه آندوپلاسمی میشود که پاسخ به این فرایند با کاهش کلی سنتز پروتئین و افزایش بیان چاپرون هایی نظیر grp78 همراه میباشد. در سلولهای رنگدانه دار شبکیه چشم افراد بالغ طولانی شدن فرایند er stress باعث مرگ برنامه ریزی شده این سلولهاو آسیب های شبکیه و بنابراین بیماری های شبکیه نظیر amdو rp میشود. هدف از این مطالعه بررسی کاهش بیان grp78 در سلولهای rpe و اثر آن برروی برخی از فاکتورهای مهم التهابی ونیز اثر آن برروی آپوپتوز و تکثیر سلولی بود. متد سلولهای rpe از کره های چشم افراد بالغ جدا شد وسلول های rpe جدا شده در محیط dmem/f12 حاوی 20 درصد fbs کشت داده شد و سپس در محیط dmem/f12 حاوی 10 درصد fbs زیرکشت های سلولی بعدی انجام شد. هویت آنها به وسیله ی مارکرهای اختصاصی rpe65 و سیتوکراتین 18/8 اثبات شد. در آزمایشات بعدی کشت های سلولی بین پاساژهای 2-7 توسط sirna مخصوص grp78 مورد تیمار قرار گرفتند. سلولهای تیمار شده با sc sirna ، transfection reagent و سلولهای rpe بدون تیمار به عنوان کنترل های آزمایش مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج real time pcr کاهش قابل ملاحظه ای دربیان grp78 نشان داد. بیان caspase4 کاهش یافته و بیان crp افزایش یافته بود. مقدار رونوشت های mcp1، cfh، c5، c3، cd59و cd55بدون تغییر باقی مانده بود. تیمارهای rnai هیچ اثر ناخواسته ایی برروی مرگ برنامه ریزی شده و تکثیر سلولی در سلولهای ترانسفکت شده در مقایسه با کنترلها نداشت. بحث براساس مشاهدات به نظر میرسد که مقدار رونوشت caspase4 در ارتباط نزدیک با بیان grp78 میباشد و از آنجایی که caspase4 به عنوان یکی از عوامل مهم در آپوپتوز شناخته شده است میتوان نتیجه گرفت که کاهش grp78 میتواند مانع از آپوپتوزدر سلول های تیمار شده گردد.از طرف دیگر مقدار افزایش یافته ی crp پاسخ های ضد التهابی را تقویت میکند. نتایج این تحقیق نشان داد از آنجا که در بیماری amdعلت اصلی آسیب به سلول های فتورسپتوری التهاب و تخریب سلولهای rpe می باشد کنترل بیان grp78می تواند اثرات مطلوبی در کنترل پیشرفت و توسعه ی بیماری داشته باشد. واژه های کلیدی : سلولهای rpe، استرس شبکه آندوپلاسمی، grp78، sirna، فاکتورهای التهابی، آپوپتوز،تکثیر سلولی

هموفیلی b یا کریسمس از بیماریهای مسیر انعقادی است که درنتیجه اختلال یا کمبود فاکتور9 حاصل میشود. درمان این بیماری مانند بسیاری از بیماری های سیستمیک دیگر به روش جایگزین درمانی انجام می گیرد. فاکتور 9 در طی مراحل بلوغ خود متحمل برخی تغییرات پس از ترجمه می شود. از جمله این تغییرات کربوکسیله شدن 12 اسید آمینه گلوتامیک اسید است. کربوکسیلاسیون توسط آنزیم گاما کربوکسیلاز در شبکه آندوپلاسمیک انجام می شود. عموما فاکتور 9 انسانی نوترکیب بیان شده در رده های سلولی پستاندار بطور مناسب گاماکربوکسیله نمی شوند. تحقیقات نشان داده است که پروتئین چپرونی بنام کالومنین مهار کننده گاماکربوکسیلاز است. به نظر میرسد که با کاهش بیان کالومنین بتوان بیان فاکتور 9 نوترکیب را در سلول های پستاندار از نظر کیفی و کمی اصلاح نمود. rnai یک راهبرد شناخته شده برای خاموش سازی ژن هاست. در این راستا میکروrna ها (mirna)، به عنوان rna های کوچک غیر کد کننده از جمله مرکزی ترین عوامل تنظیم کننده بیان بسیاری از ژن ها محسوب می شوند. این عمل تنظیمی بر پایه جفت شدن توالی های 2-8 نوکلئوتیدی (ناحیه seed) mirna بالغ با mrna هدف است که موجب سرکوب ترجمه و یا تخریب mrna و در نتیجه کاهش بیان می شود. لذا به نظر میرسد که برای کاهش اختصاصی و دائمی بیان یک ژن ، استفاده ازmirna مصنوعی روش مفیدی باشد. با توجه به نقش باز دارندگی کالومنین بر روی گاماکربوکسیلاز، در این تحقیق یک اینترون نوترکیب دارای mirna مصنوعی (ضد کالومنین) را در پایین دست cdnaی فاکتور 9 قرار داده و تاثیر آن بر بیان ژن کالومنین و همچنین فاکتور 9 نوترکیب در سلول های پستانداران مورد مطالعه قرار گرفت. در این تحقیق اثر دو sirna ضد کالومنین انسانی که در جایگاه mirna ی بالغ در چارچوب یک mirna ی طبیعی در داخل اینترون 1کوتاه شده فاکتور 9 در موقعیت 3’utr در یک وکتور بیانی جاسازی شده بودند، بر بیان کالومنین و همینطور بیان فاکتور 9 انسانی نوترکیب در یک رده سلولی پستاندار مورد مطالعه قرار گرفت. به این منظور پس از انتقال پلاسمید های نوترکیب به سلول های hek293t ، میزان بیان ژن های کالومنین و فاکتور 9 انسانی با روش real-time pcr و میزان فاکتور 9 نوترکیب بیان شده با الایزا مورد بررسی قرار گرفت. نتایج بدست آمده از سلول های ترانسفکت شده با سازه های حاوی mirna ها کاهش بیان کالومنین (ناک دان بیش از 99 درصد) را نشان داد. با بهره گیری از روش pcr با استفاده از پرایمر های stem-loop وجود mirna های بالغ طراحی شده بر ضد کالومنین نشان داده شد. این نتایج نشان داد که mirnaهای مصنوعی از متن اینترون خارج شده و پس از طی مراحل بلوغ عمل مهاری خود بر روی ژن هدف بطور موفق انجام داده اند. بیش بیان فاکتور ? درسلول های دارای سازه اینترون دار در مقایسه با سلول های کنترل مشاهده نشد.

اپیتلیوم رنگدانه¬دار شبکیه چشم(rpe) یک تک لایه شامل سلول¬هایی است که نورون¬های شبکیه را محافظت می¬کنند. در طول تکوین، rpe و نورون¬های شبکیه از یک پیش¬ساز مشترک به¬نام حباب بینایی منشا می-گیرند. sox2 یک فاکتور رونویسی است که حاوی جعبه hmg است و از ژن¬های مهم در تکوین چشم می¬باشد که دیده شده در شرایط مناسب، تمایززدایی سلول¬های rpe را القا می¬کند. هدف از این مطالعه سنجش توانایی sox2 انتقال¬یافته توسط ویروس وابسته به¬آدنو(aav) در ایجاد تغییرات تمایزی سلول¬های rpe انسان بالغ می¬باشد. مواد و روش¬ها: توالی کدکننده ژن sox2 در وکتور paav-mcs همسانه¬سازی و توسط روش¬های colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی، تایید شد. جهت رهگیری بیان ژن در سلول¬های جانوری، قطعه ires-egfp نیز در وکتور بیانی همسانه¬سازی شد. محصول واکنش اتصال به باکتری e.coli منتقل و باکتری¬های تراریخت توسط آزمون استخراج quick check مشخص و با روش¬های هضم آنزیمی، واکنش زنجیره¬ای پلیمراز و تعیین توالی وکتور بیانی نهایی تایید شد. با استفاده از وکتور گزارشگر paav-lacz ترنسفکشن سلول¬های hek293t به روش کلسیم فسفات بهینه شد و این سلول¬ها توسط وکتور نوترکیب حاوی sox2-ires-egfp، paav-rc و phelper ترنسفکت همزمان شدند. ویروس¬های نوترکیب پس از 72 ساعت جمع¬آوری شدند. از سه روش رنگ¬آمیزی x-gal، فلوسایتومتری و absolute quantification real-time pcr جهت تعیین تیتر ویروس¬های مختلف تولیدشده استفاده شد. کره¬های چشم انسان بالغ از بانک چشم جمهوری اسلامی ایران فراهم و سلول¬های rpe جداسازی و کشت داده¬شدند. این سلول¬ها توسط ویروس-های نوترکیب به روش¬های مختلفی آلوده¬شدند. جهت بررسی تغییرات بیان sox2 و پیامدهای حاصل از آن، آزمون¬های real-time pcr و ایمنوسیتوشیمی استفاده شدند. نتایج: داده¬های حاصل از تعیین تیتر ویروس نشان داد استوک اولیه ویروس¬های aav-sox2 جمع¬آوری شده دارای106×8/1 ویروس با توانایی آلوده¬سازی بود. روش آلوده¬سازی سلول¬های شناور به عنوان بهترین روش آلوده¬سازی سلول¬های rpe انتخاب شد. تجزیه تحلیل داده¬های حاصل از real-time pcr نشان داد پس از مهار تکثیر سلولی، به¬دنبال افزایش بیان sox2، نستین به عنوان نشانگر سلول¬های پیش¬ساز عصبی، در سلول¬های آلوده¬شده با ویروس نوترکیب حاوی sox2 افزایش بیان پیدا می¬کند. همچنین ژن pax6 نیز تغییرات بیان معنادار باسطح اطمینان 99% نشان داد. در آزمون ایمنوسیتوشیمی بروز سلول¬های مثبت برای نشانگرهای تمایزی مانند thy1 که نشانگر سلول¬های گانگلیونی است مشاهده شد. همچنین برای اولین بار نتایج ایمنوسیتوشیمی این تحقیق تغییرات rpe به سمت سلول گیرنده نور استوانه¬ای را تحت تاثیر sox2 نشان داد. در نهایت نتایج این تحقیق نشان داد که افزایش بیان sox2 سبب القا تغییرات تمایزی سلول¬های rpe انسان بالغ می¬شود.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

عفونت ویروس هپاتیت ‏‎b‎‏ یکی از مهمترین مشکلات جهانی در زمینه سلامت و بهداشت است.تخمین زده می شود که بیش از 350میلیون نفر در کل جهان و بین 2-1 میلیون نفر در کشورما بوسیله این ویروس آلوده شده باشند . دامنه بیماریهای حاصل از این ویروس از هپاتیت ‏‎b‎‏ حاد، ناقلین ویروس بدون علامت ، هپاتیت مزمن ، ندرتا هپاتیت برق آسا متغیر است.

ژنهای مجموعه سازگار بافتی اصلی یا ‏‎mhc‎‏ در انسان، آنتی ژنهای لکوسیتی ، ‏‎hla‎‏ بسیار پلی مورفی را کد می کند. که مسئول ارائه آنتی ژن به لنفوسیت‏‎t‎‏ می باشند. آنتی ژن های کلاس یک و دو ‏‎hla‎‏ ، کنترل ژنتیکی پاسخهای ایمنی را به عهده دارند. شناسایی آلل های ‏‎hla‎‏ یا ‏‎hla-typing‎‏ بطور وسیعی در پیوند، مطالعات مردمشناسی ، بیماری مرتبط با ‏‎hla‎‏ و ردابوت مورد استفاده قرار می گیرد. بدنبال پیشرفت روشهای مولکولی در دهه پیش ، مشخص شد که روشهای متداول سرولوژیک قادر به تفکیک تمامی آلل های پلی مورف ‏‎hla‎‏ نمی باشند، لذا تعیین دقیق آلل های ‏‎hla‎‏ بویژه آلل های کلاس دو ‏‎hla‎‏، امکان پذیر شده است.