راه های ایجاد آلودگی با باکتری سودوموناس فلورسنس در خط تولید شیر پاستوریزه ی یک کارخانه بزرگ شیر در جنوب ایران مورد بررسی قرار گرفت. نمونه های شیر خام و پاستوریزه از شش نقطه در طول خط تولید اخذ می گردید و تمام نمونه ها تا رسیدن شمارش باکتری های هوازی به cfu/ml107-106 در دمایc?7 نگهداری می شدند. برای تشخیص باکتری، کلنی ها بصورت تصادفی از روی محیط کشت انتخاب می گردیدند. در نمونه های شیرِ برداشته شده بلافاصله پس از دستگاه پاستوریزه کننده هیچ گونه باکتری گرم منفی سرماگرائی جدا نگردید. آلودگی با این باکتری ها اغلب در مرحله پر کردن بسته های شیر رخ داد. از 1/34% نمونه های کیسه های شیر پاستوریزه باکتریهای گرم منفی سرما گرا و از 9/4% باکتری سودوموناس فلورسنس جدا گردید. جدایه های سودوموناس فلورسنس از نظر ویژگیهای فنوتیپی و16s-23s pcr-ribotyping مورد بررسی قرار گرفتند و تحلیل فیلوژنتیکی بر اساس ویژگیهای فنوتیپی و ژنوتیپی انجام شد. این جدایه ها در شش بیوتایپ (b1-b6) قرار گرفتند. در اغلب موارد یک ریبوتیپ مشخص برای هر بیوتیپ یافت شد، هر چند برای هر کدام از بیوتیپ های b2 و b3 دو ریبوتیپ مشخص گردید. روش 16s-23s pcr-ribotyping امکان تفکیک جدایه ها را فراهم می آورد و می تواند در ردیابی نقاط ایجاد آلودگی در خط پاستوریزاسیون شیر مفید باشد. در این تحقیق و بر اساس این روش جدایه ها در 5 ریبوتیپ مختلف قرار گرفتند

چکیده در میان جمعیت طبیعی جدایه های استافیلوکوکوس آرئوس ، هتروژنیتی قابل توجهی وجود دارد. ژن کوآگولاز در استافیلوکوکوس آرئوس یک فاکتور حدت مهم می باشد که تایپ کردن این ژن برای شناسایی ژنوتایپ های استافیلوکوکوس آرئوس بکار می رود. هدف از تحقیق حاضر ارزیابی ژن کوآگولاز در جدایه های ورم پستان گاو، عفونت انسانی و مواد غذایی می باشد. نمونه های جمع آوری شده توسط تست های بیوشیمیایی رایج تعیین هویت شدند و سپس با استفاده از pcr اختصاصی گونه تایید شدند. تکثیر ژن کوآگولاز منجر به ایجاد تک باند هایی با سایز 500 تا 900 جفت باز گردید. در نمونه های ورم پستان گاوی یافتن ژن کوآگولاز تک باندی نشان می دهد که ممکن است سویه ها منشا گاوی داشته باشند و انسان نقشی در آلودگی پستان یا شیر گاو ندارد. در نمونه های انسانی تک باند بودن ژن کوآگولاز می تواند نشان از منشا گاوی داشتن جدایه ها داشته باشد که این امر احتمال انتقال باکتری از گاو به انسان را مطرح می کند .یافتن ژن کوآگولاز تک باندی در نمونه های مواد غذایی بیانگر منشا گاوی نمونه است و آلودگی مواد غذایی ممکن است از حیوان منشا گرفته باشد نه افرادی که در ارتباط با پروسه کردن مواد غذایی هستند. هضم ژن کوآگولاز با آنزیم های محدود کننده alui و hin61 منجر به تولید پروفایل های متفاوت شد که نشان دهنده هتروژنیتی دراین ژن می باشد. تعداد الگوهای rflp بدست آمده پس از برش با دو آنزیم تفاوت قابل ملاحظه ای نداشت که نشان می دهد قدرت تفریق کنندگی دو آنزیم alui و hin61 تفاوت چندانی ندارد. آنالیز سکانس ژن کوآگولاز در نمونه های انتخاب شده نشان دهنده شباهت بالا با سایر گزارش ها میباشد و تفاوت محدود بین سکانس این ژن با سایر گزارش ها قابل قبول و به دلیل جهش نقطه ای است .

استفاده از هدف های اسید نوکلئیک یک تکنیک جایگزین برای شناسایی دقیق گونه های استافیلوکوک تامین می کند. ژن groel توالی اسید نوکلئیکی حفاظت شده با میزان کافی تفاوت است که شناسایی در سطح گونه ای را امکان پذیر می سازد. ژن gap به عنوان یک ژن ساختمانی خانه ای است که یک پروتئین 42 کیلو دالتون موجود در دیواره سلولی را کد می کند. هدف این مطالعه مقایسه روش شناسایی فنوتیپی و ژنوتیپی در شناسایی گونه های استافیلوکوکوس های جدا شده با منشا گاوی و انسانی است. pcr-rflp دو ژن groel و gap برای شناسایی سویه هایی که قابل شناسایی در سطح گونه ای در آزمایشگاه های معمول میکروب شناسایی نمی باشد، در آزمایشگاه های مرجع قابل استفاده خواهد بود. این رهیافت از طریق تعیین توالی مورد تایید قرار گرفت.

باکتری استافیلوکوکوس آرئوس از مهمترین عوامل عفونت های بیمارستانی و اکتسابی می باشد. این باکتری قدرت بیماری زایی بالایی دارد و بدلیل افزایش روز افزون مقاومت در برابر داروهای ضد میکروبی، این باکتری به یکی از مهم ترین مشکلات در سرتاسر جهان تبدیل شده است. به علت بالا بودن میزان مرگ و میر ناشی از عفونت های بیمارستانی سویه های استافیلوکوکوس آرئوس مقاوم به متی سیلین ، تعیین و آگاهی از الگوی منطقه ای مقاومت آنتی بیوتیکی به منظور راهنمایی مناسب جهت درمان عفونت های ایجاد شده به وسیله این ارگانیسم حائز اهمیت می باشد. از طرفی بررسی ژنوتیپی سویه های این باکتری به دلیل نقشی که در تمایز ایزوله ها دارد در ردیابی منشاء عفونت و کنترل آلودگی های ناشی از آن می تواند کاربرد فراوانی داشته باشد. روشهای مولکولی زیادی به منظور تعیین الگوی ژنی سویه های استافیلوکوکوس آرئوس ابداع شده اند. یکی از روش های پیشنهادی، بررسی ناحیه پلی مورفیسم ژن spa با روش pcr است. نواحی پلی مورفیسم x ژنspa یکی از عوامل متمایز کننده است و در مطالعات مختلف الگوهای متنوعی از این ژن شناسایی شده اند. بنابراین تعیین تیپ ایزوله های استافیلوکوکوس آرئوس با استفاده از ژن spaمی تواند روش مناسبی برای مطالعات اپیدمیولوژیکی باشد.

باکتری یرسینیاانتروکولیتیکا توانایی ایجاد بیماری مشترک در انسان و حیوانات را داشته و از طریق مواد غذایی مختلف از جمله شیر و سایر فرآورده های آن منتقل می گردد. به منظور بررسی میزان آلودگی شیر و مدفوع گاوهای اطراف شیراز به یرسینیاانتروکولیتیکا، شیر و مدفوع 100 راس گاو مورد آزمایش قرار گرفت ، ضمنا" 100 نمونه شیر پاستوریزه به طور تصادفی آزمایش شد. در این تحقیق از روش : 1 - غنی سازی نمونه ها در سرما. 2 - استفاده از تکنیک قلیایی نمودن محیط غنی ساز قبل از کشت بر روی محیط اختصاصی . 3 - محیط اختصاصی سف سولودین - ایرگازان - نووبیوسین آگار(cin) برای جداسازی این ارگانیسم استفاده گردید. در این مطالعه یک مورد یرسینیاانتروکولیتیکا از صد نمونه شیر پاستوریزه جدا گردید(1 درصد). نمونه های شیرخام و مدفوع همگی از نظر آلودگی به این ارگانیسم منفی بودند.