هدف از انجام مطالعه حاضر بررسی اثر مرحله تکوینی، سلول های کومولوس، زمان های تعادلی مختلف و نسبت های متفاوت ازfcs در محلول انجمادی، روی توانایی تکاملی تخمک های نابالغ (gv) و بالغ (mii، همراه با سلول های کومولوس و بدون سلول های کومولوس) گوسفندی با استفاده از روش استرای تغییر یافته بود. علاوه بر آن اثر پیش تیمار تخمک ها با سیتوشالازینb (cb) نیز روی تکامل جنینی تخمک های منجمد- ذوب شده، بررسی شد. تخمدان های جمع آوری شده از کشتارگاه در نرمال سالین حاوی آنتی بیوتیک با دمای 35-30 درجه سانتی گراد طی 3-1 ساعت پس از جمع آوری به آزمایشگاه منتقل شدند. تخمک ها از فولیکول های با قطر mm6-2 به روش آسپیراسیون استحصال شده و در محیط تغییر یافتهhepes- tcm199 از پیش انکوبه شده (c60/38، 5% co2 و رطوبت 100%) جمع آوری گردیدند. تخمک های با سیتوپلاسم کاملاً گرانوله که حداقل سه لایه سلول کومولوس اطرافی داشتند (تخمک های با کیفیت خوب) انتخاب شدند. محیط پایه برای آماده سازی محلول های انجمادی، محیط بافری hepes- tcm199 دارای fcs بود. تخمک های انتخاب شده برای مدت زمان 5، 7 و یا10 دقیقه در محلول تعادلی حاوی 5/7% اتیلن گلیکول و 5/7% دی متیل سولفوکسید قرار گرفته و سپس به محلول انجمادی حاوی 15% اتیلن گلیکول، 15% دی متیل سولفوکسید و نیم مول ساکارز برای مدت زمان 30 ثانیه منتقل شدند. پس از آن تخمک ها روی نوک استرای تغییر یافته بارگیری شدند و محیط باقی مانده اطراف تخمک ها با استفاده از یک پیپت پاستور ظریف برداشته شد به طوری که حجم محیط باقی مانده کمتر از 1 میکرولیتر باشد. استرای بارگیری شده سریعاً به داخل نیترو‍ژن مایع فرو برده شد. بعد از ذوب در محلول حاوی 5/. مول ساکارزز، بقای تخمک، قابلیت تلقیح و تکامل بعدی جنینی ارزیابی شد. بعد از لقاح، تفاوتی در میزان بقا بین سه گروه مورد آزمایش (gv, miid, miicoc) مشاهده نشد و بیش از 66/. تخمک ها فرآیند انجماد- ذوب را تحمل کردند. تخمک هایmiicoc میزان بالاتری از تسهیم را در مقایسه با دو گروهgv وmiid (به ترتیب 04/0±53%، 03/0±37% و 05/0±41% ؛05/0p<) نشان دادند. اثر cb روی بقای تخمک های منجمد- ذوب شده معنی دار نبود، در حالی پیش تیمار تخمک ها باcb سبب اعمال تأثیرات منفی روی میزان تسهیم در تخمک های هر سه گروه (به ترتیب 04/0±20%، 05/0±13% و 09/0±17% در سه گروهgv، miid وmiicoc) در مقایسه با میزان آن در گروه کنترل (02/0±35%، 03/0±47% و 05/0±41% ؛ به ترتیب برای گروه هایgv، miid وmiicoc) شد. اثر زمان های تعادلی مختلف روی میزان بقا و تسهیم تخمک های منجمد- ذوب شده به جزء در میزان تسهیم تخمک های گروهmiid در زمان تعادلی 7 دقیقه (55%) در مقایسه با زمان تعادلی 5 دقیقه (34%)، معنی دار نبود. میزان تسهیم در تخمک های گروهmiicoc تحت تأثیر نسبت fcs در محلول انجمادی قرار گرفت (به ترتیب 53% و 40% ، در حضور 20% و 10%fcs ؛ 05/0p<). در نتیجه، توانایی تکاملی بعد ازانجماد تخمک های گوسفندی توسط حضور سلول های کومولوس و مرحله تکوینی تخمک و نسبتfcs در محلول انجمادی تحت تأثیر قرار می گیرد. علاوه برآن تیمار تخمک های گوسفندی با cb قبل از انجماد سبب اعمال اثرات منفی روی بقا و توانایی تکاملی بعدی تخمک می گردد. مطالعات بیشتری جهت افزایش توانایی تکاملی تخمک های گوسفندی بعد از انجماد لازم است.

چکیده در این مطالعه به بررسی اثرات مفید حضور کشت اویداکت و یا ترشحات آن در مرحله ivf (in vitro fertilization) با استفاده از محیط sof (synthetic oviductal fluid) بر شاخص های رشد جنین گوسفند (میزان کلیواژ و میزان تولید و اتساع و هچ بلاستوسیست) پرداخته شده است. بدین منظور تخمک ها به صورت تصادفی در 5 گروه ivf شدند که عبارتند از: الف) ivf در محیط sof (گروه کنترل) ب) ivf در محیط sof در حضور کشت اویداکت یا ocm (oviductal cell monolayer) در قطرات 50 میکرولیتری (گروه ocm 50µl) ج) ivf در محیط sof در حضور کشت اویداکت در قطرات 100 میکرولیتری (گروه ocm 100µl) د) ivfدر حضور محیط conditioned اویداکت (گروه conditioned 100%) و پروژسترون ه) ivf در حضور محیط conditioned اویداکت در غلظت ?25 (گروه conditioned 25%). نتایج نشان داد که میزان کلیواژ و تولید و هچ بلاستوسیست در گروه کنترل به طور معنی داری نسبت به گروه های دیگر بالاتر بود (p<0.001) اما تفاوت معنی داری در بین گروه های دیگر مشاهده نشد. این نتایج نشان داد که حضور ocm یا محیط conditioned کشت تک لایه اویداکت در مرحله ivf بر میزان رشد جنین گوسفند در مرحله قبل از لانه گزینی اثر سوء می گذارد. این اثر سوء ممکن است از نامناسب بودن محیط sof برای حیات و تکثیر کشت سلول های اویداکتی و در نتیجه آزاد شدن متابولیت های مضر در محیط ناشی شده باشد. احتمال دیگر این است که سلول های اویداکتی قبل از استفاده در ivf بخش عمده عوامل رشد خود را از دست داده باشد، به عبارت دیگر ممکن است که این سلول ها در خلال مدت 72-48 ساعت کشت، عوامل رشد خود را آزاد کرده و زمان 24 ساعت کشت در محیط sof فعالیت ترشحی کمتری داشته باشند. این مطالعه نشان داد که انجام ivf در حضور ocm یا محیط conditioned کشت تک لایه اویداکت میزان رشد جنین های گوسفند در مرحله بعد از لقاح را کاهش می دهد.

چرخ های عکس العملی از جمله وسایل تبادل مومنتوم زاویه ای هستند، که در پایدارسازی وضعیت ماهواره و مانورهای وضعیت آن مورد استفاده قرار می گیرند. به منظور بالا بردن ضریب اطمینان عملکردی زیر سیستم پایداری و کنترل وضعیت در سامانه های فضایی که با استفاده از چرخ های عکس العملی کار می کنند معمول این است که عملگرهای این زیرسیستم ها بصورت گرم یا سرد رزرو می شوند. این روش معمولا باعث بالا رفتن وزن و درپی آن هزینه مجموعه پایداری و کنترل وضعیت می گردد. استفاده از چیدمان هرمی عملگرهای عکس العملی، ضمن تامین رزرو هریک از چرخ های عکس العملی بر روی محورهای سه گانه می تواند محدودیت وزن و هزینه را نیز تا حد قابل قبولی ارضا نماید. برای انجام طراحی یک سیستم کنترل وضعیت نیاز است تا آن سیستم به طور کامل شناسایی شود. به همین دلیل به عنوان آشنایی با سیستم های کنترل وضعیت در فصل 1 این پایان نامه به بررسی و معرفی اجمالی روش های کنترل وضعیت در سامانه های فضایی پرداخته شده است. در فصل 2 به تدوین الگوریتم طراحی یک چرخ عکس العملی پرداخته شده و مطابق با آن نتایج حاصل از طراحی و ساخت دو نمونه چرخ عکس العملی ساخته شده در آزمایشگاه تحقیقات فضایی دانشکده مهندسی هوافضای دانشگاه صنعتی خواجه نصیرالدین طوسی آورده شده است. در فصل 3 پس از شناسایی سیستم عملگرهای عکس العملی بصورت هرمی، نحوه عملکرد سیستم کنترل وضعیت با چیدمان هرمی مورد بررسی و تحلیل قرار گرفته است و به دنبال آن الگوریتم طراحی سیستم کنترل وضعیت عملگرهای عکس العملی بصورت هرمی تدوین گردیده است. در فصل 4 با استفاده از الگوریتم تدوین شده در فصل 3 اقدام به طراحی یک سیستم عملگرهای عکس العملی به صورت هرمی خواهد شد. نهایتا نتایج و دستاوردهای نهایی به همراه پیشنهادات برای پژوهش های آتی در فصل 5 گنجانده شده است. در پیوست (1) طرح تست این سیستم مطابق با استانداردهای اروپایی ecss استخراج شده و در پیوست (2) تحلیل جامع حرارتی از این سیستم در سامانه فضایی با استفاده از نرم افزار ساخته شده توسط خود مولف در این زمینه به عمل آمده است.

هدف از انجام این مطالعه بررسی تأثیر برنامه پیش همزمانی g6g بر روی موفقیت برنامهی اوسینک در گاوهای شیری در اولین تلقیح پس از زایش بوده است. برای این منظور یک گله شیری در استان اصفهان با جیره استاندارد و مدیریت مناسب انتخاب گردید. در بازدید هفتگی گله و در زمانیکه گاوها برای بررسی 25 روز پس از زایش معرفی می شدند، گاوهای شیری هولشتاین (تعداد زایش 2-5)، که در سلامت ظاهری و بدون هر گونه نارسائی تولید مثلی نظیر جفت ماندگی، متریت و آندومتریت بالینی، به صورت تصادفی و با در نظرگرفتن میانگین تولید شیر و امتیاز وضعیت بدنی انتخاب و به 2 گروه درمانی و یک گروه کنترل تقسیم شدند. برنامه ی اوسینک در بردارنده 2 تزریق gnrh و pgf به فاصله ی 7 روز بوده است. متعاقب آن در برنامه ی اوسینک گاوها دز دیگری از gnrh را 48 ساعت پس از pgf دریافت کرده و 16 ساعت بعد از تزریق اخیر تلقیح مصنوعی صورت گرفت. گاوهای گروه آزمایشی g6g-ovsynch در روز 2 ± 83 پس از زایش، gnrh و 2 روز بعد pgf دریافت داشتند و برنامه ی همزمانی اوسینک، 6 روز پس از تزریق pgf آغاز گردید. گاوهای گروه کنترل بدون دریافت هر گونه درمان و پس از سپری نمودن حداقل 45 روز پس از زایش، در فاصله 12 ساعت پس از مشاهده علائم فحلی، اولین تلقیح را دریافت داشتند. در یک زمان ثابت نمونه خون از تعدادی گاوهای موجود در گروه های درمانی برای تعیین پروژسترون، در زمان تزریق pgf برنامه اوسینک جهت تعیین حضور جسم زرد فعال اخذ گردید. در روزهای 30 و 45 بعد از تلقیح تشخیص آبستنی بترتیب با کمک سونوگرافی و آزمون رکتال انجام شد. درصد آبستنی در گروه های آزمایشی اوسینک (3/41%)، g6g-ovsynch (3/33%) و کنترل (36%) تفاوت معنی داری نشان نداد (0.05<p).

از آنجایی که میزان موفقیت در لقاح آزمایشگاهی (ivf) سگ به دلیل نامناسب بودن بلوغ آزمایشگاهی تخمک های استحصال شده بسیار ضعیف بوده و از سویی امکان دسترسی به منابع تخمدانی در سگ بسیار محدود می باشد و نیز با توجه به هدف اصلی مطالعه ی حاضر که همان بررسی قابلیت بارورسازی اسپرم های زنوگرافت سگ می باشد، در این مطالعه قابلیت تشکیل پیش هسته ی نر متعاقب icsi (تزریق داخل سیتوپلاسمی اسپرم) بین گونه ای (با استفاده از تخمک گوسفند) با 3 منبع متفاوت اسپرم سگ مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل اختلاف معناداری را از حیث روند decondensation سر اسپرم در بین 3 گروه مورد آزمایش نشان نداد و می توان نتیجه گرفت اسپرم های زنوگرافت همانند اسپرم های اپیدیدیمال و بیضه ای از قابلیت یکسانی در این خصوص برخوردار می باشند و لذا می توان نتیجه گیری نمود که با اتخاذ روش های مناسب آماده سازی اسپرم بویژه در خصوص اسپرم زنوگرافت ابقای باروری با استفاده از این منبع بخصوص در آینده امکان پذیر خواهد گردید

چکیده: دستیابی به روشی مطمئندر خصوص انجماد تخمک پستانداران، گامی موثر در جهت حفظ باروری درانسان و گونه های جانوری محسوب می شود. از طرفی امکان ابقای منابع ژنتیکی ارزشمنددر گونه های اهلیجانوری و وحوش در حال انقراض با بهره برداری از این تکنیک میسر می گردد. انجماد آهسته روشی است که باعث ایجاد یخ داخل سلولی و شوک اسمزی در تخمک های منجمد شده می شود. در انجماد شیشه ای با افزایش غلظت مواد ضدیخ و سرعت انجماد حساسیت نسبت به سرما کاهش یافته و ضمن جلوگیری از تشکیل بلورهای یخ، آسیب های حاصل از انجماد نیز به حداقل می رسد. در حقیقت غلظت بالای مواد ضدیخ متضمن روند مطلوب انجماد شیشه ای می باشد. افزایش غلظت مواد ضدیخ به دلیل خاصیت سمی آنها اثرات مخربی بر سلول داشته و همچنین سبب بروز آسیب اسمزی می گردد. به منظور غلبه بر این مشکل می توان از انواع بخصوصی از ظروف حامل استفاده نمود. ظرف حامل مورد استفاده در این مطالعه کرایوتاپ بوده است. در این روش با استفاده از حجم بسیار اندک مواد ضدیخ میزان سرمادهی تا بیش از 4000 درجه سانتی گراد در دقیقه افزایش می یابد. در این مطالعه ما اثرات انجماد شیشه ای را در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده گوسفند، در مرحله تکاملی رویان و پیش از جایگزینی رویان مورد بررسی قرا دادیم. یکی از تغییرات مهم در این مرحله فعال سازی ژنوم رویانی است که در طی این مرحله فعالیت ژنوم رویانی متعاقب رخداد ها اپی ژنتیک آغاز شده و با شروع رونوشت برداری عملا نقش ترانس کریپت های مادری در هدایت رخداد های سلولی به حداقل خواهد رسید. تغییرات اپی ژنتیک شامل طیف نسبتا گسترده ای از تغییرات اعمال شده در سطح مولکول dna و پروتئین های هسته ای (از جمله histon ها) است. از جمله این تغییرات، استیلاسیون و متیلاسیون هیستون هاست. در این مطالعه ژن های موثر در تغییرات در ساختار هیستون hat1 (histon acethyle transfrase) و (histon metyle transfrase)suv39h1مورد بررسی قرار گرفتند که هر دو در تنظیم بیان ژن ها نقش دارند. hat1 به وسیله استیله کردن انتهای n هیستون ها، باعث باز شدن ساختار کروماتین و فراخوانی فاکتور های رونویسی و در نهایت آغاز رونویسی می شود. suv39h1نیز با مشارکت در ساختار هتروکروماتین، نقش در غیر فعال ساختن کروماتین و خاموش ماندن ژن ها دارد. در این مطالعه میزان بیان نسبی ژن های hat1 و suv39h1 در مراحل رویانی 7-2 سلولی، 16-8 سلولی، مورولا و بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک منجمد و رویان های حاصل از تخمک غیر منجمد با استفاده ازروش real time pcr ارزیابی شد. نتایج حاصله حاکی از آن بود که در تخمک های منجمد در مقایسه با گروه کنترل، بیان ژن های مذکور کاهش نسبی، لیکن غیر معنی دار را نشان می دهد(p<0.05) و در مورد هر 2 ژن روند انجماد باعث کاهش نسبی میزان کلی ترانسکریپت ها شده است اما این کاهش معنی دار نیست. در نهایت می توان نتیجه گیری نمود که روند انجماد شیشه ای تاثیر معنی داری در الگوی بیان2 ژن مذکور نداشته است.

با توجه به قابلیت تکاملی ضعیف رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده، در مطالعه ی حاضر قابلیت تکاملی رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده در همکشتی با رویان های حاصل از تخمک های غیر منجمد مورد ارزیابی قرار گرفت. بدین منظور رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده در مجاورت رویان های حاصل از تخمک های غیر منجمد (2 رویان حاصل از تخمک های منجمد شده و 2 رویان حاصل از تخمک های غیر منجمد) در گوده های ایجاد شده در قطره، کشت داده شدند. در دو گروه دیگر نیز رویان های حاصل از تخمک های منجمد و رویان های حاصل از تخمک های غیرمنجمد به صورت جداگانه کشت داده شدند. طبق نتایج حاصله میزان تسهیم (cleavage) در گروه تخمک های غیرمنجمد نسبت به گروه تخمک های منجمد به صورت معنی داری بیشتر بوده لیکن تفاوتی با گروه های هم کشتی نداشته است. همچنین میزان تولید بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک های منجمد صفر و در رویان های حاصل از تخمک غیرمنجمد 9/27% بوده است (p<0.05). در شرایط هم کشتی علیرغم عدم تولید بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک های منجمد لیکن میزان تسهیم بطور غیر معنی دار نسبت به رویان حاصل از تخمک های منجمد شده در گروه غیر هم کشتی افزایش یافته است. و لذا می توان نتیجه گرفت که روش هم کشتی در بهبود شرایط بطور نسبی تاثیر گذار بوده است. همچنین در این مطالعه میزان بیان نسبی ژن های e-cad و stat3 در مراحل رویانی 7-2 سلولی، 16-8 سلولی، مورولا و بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک منجمد و رویان های حاصل از تخمک غیر منجمد با روش real time pcr ارزیابی شد. بر اساس نتایج به دست آمده میزان بیان نسبی e-cad در رویان های حاصل از تخمک غیر منجمد بیشتر از میزان بیان در رویان های حاصل از تخمک های منجمد بوده و این افزایش در مرحله بلاستوسیست معنی دار (p<0.05) بود. و میزان بیان stat3 در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده بیشتر بوده که این افزایش در مرحله ی 8-2 سلولی و مورولا از نظر آماری معنی دار (p<0.05) بوده است. می توان نتیجه گرفت که انجماد سبب کاهش میزان بیان نسبی e-cad و افزایش میزان بیان نسبیstat3 با توجه به نقش آن در القای بیان ژن های آنتی آپوپتوز و فعال شدن روند آپوپتوز به دنبال انجماد می شود.

دستیابی به روشی مطمئن در خصوص انجماد تخمک پستانداران، گامی موثر در جهت حفظ باروری در انسان و گونه های جانوری محسوب می شود. از طرفی امکان ابقای منابع ژنتیکی ارزشمند در گونه های اهلی جانوری و وحوش در حال انقراض با بهره برداری از این تکنیک میسر می گردد. انجماد آهسته روشی است که باعث ایجاد کریستال های یخ داخل سلولی و شوک اسمزی در تخمک های منجمد شده می شود.انجماد شیشه ای روشی جایگزین در انجماد بوده که در آن، سلول های در حال انجماد سریع در معرض غلظت بالائی از مواد ضد یخ قرار می گیرند که نتیجه ی آن تشکیل یک ساختمان شبه شیشه ای فاقد کریستال های یخ و کاهش آسیب های حاصل از انجماد می باشد. در حقیقت، غلظت بالای مواد ضد یخ متضمن روند مطلوب انجماد شیشه ای خواهد بود. البته افزایش مواد ضد یخ به دلیل خاصیت سمی آن ها می توانداثرات مضری بر سلول داشته باشد. در مطالعه ی حاضر، ما اثرات انجماد شیشه ای را در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده ی گوسفند، در طی مراحل تکاملی پیش از جایگزینی رویان مورد بررسی قرار دادیم. یکی از تغییرات مهم پیش از جایگزینی، فعال شدن ژنوم رویانی است که متعاقب رخداد های اپی ژنتیک آغاز می شود. در این شرایط، با شروع رونوشت برداری عملا نقش ترانس کریپت های مادری در هدایت رخدادهای سلولی به حداقل خواهد رسید. تغییرات اپی ژنتیک شامل طیف نسبتا گسترده ای از تغییرات اعمال شده در سطح مولکول dna و پروتئین های هسته ای است. در این مطالعه میزان بیان نسبی ژن های hmgn3aو smarcal1 در مراحل رویانی 7-2 سلولی، 16-8 سلولی، مورولا و بلاستوسیست در رویان های حاصل از تخمک منجمد و رویان های حاصل از تخمک غیر منجمد با روش real time pcr ارزیابی شد. نقش این ژن ها در remodelling کروماتین، افزایش رونویسی و نسخه برداری و اصلاح dna در نمو جنین اولیه حائز اهمیت است. همانطور که نتایج نشان می دهند، میزان بیان ژن hmgn3a در گروه رویان های حاصل از تخمک های غیرمنجمد، بیشتر از میزان بیان در رویان های حاصل از تخمک های منجمد بوده و این افزایش در مرحله 16-8 سلولی و مرولا (morulae) معنی دار (p<0.05) بود. میزان بیان smarcal1 در رویان های حاصل از تخمک های منجمد شده بیشتر بوده که این افزایش در مرحله ی بلاستوسیست (blastocyst) از نظر آماری معنی دار (p<0.05) بود. می توان نتیجه گرفت که انجماد سبب کاهش میزان بیان ژن hmgn3a در حالیکه میزان بیان ژن smarcal1 به دنبال انجماد افزایش می یابد.

زرده تخم مرغ رایج ترین محافظ انجماد در رقیق کننده های منی به منظور حفاظت اسپرم ها در مقابل شوک سرمایی است. بطور کلی عملکرد حفاظتی زرده تخم مرغ به طور زیادی ناشی از حضور لیپوپروتئین های با چگالی کم است. در سال های اخیر نگرانی هایی در مورد حضور ترکیبات مضر در زرده تخم مرغ بیان شده است و استفاده از ldl استخراج شده از زرده تخم مرغ مورد توجه قرار گرفته است. برخی محققان معتقدند که افزودن مواد سورفاکتانت به زرده تخم مرغ باعث بهبود تحرک، یکپارچگی آکروزومی و ظرفیت باروری اسپرم ها می شود. در سال های اخیر نیز آنتی اکسیدانت های زیادی به عنوان افزودنی در رقیق کننده های انجماد منی با اثرات مفید مورد استفاده قرار گرفته است. گزارش شده است که در استخراج ldl ممکن است آنتی اکسیدانت های موجود در زرده تخم مرغ کاهش و یا حذف شوند. هدف از این مطالعه بررسی تأثیر محافظت کنندگی زرده تخم مرغ به همراه ماده ی سورفاکتانت سدیم دودسیل سولفات (sds) و لیپوپروتئین های با چگالی کم فریز شده و سطوح صفر، 35، 75 و 115 میکروگرم بر میلی لیتر پودر عصاره الکلی جوانه میخک در رقیق کننده های انجماد منی قوچ بود. نمونه منی در طول فصل جفتگیری و به صورت هفته ای دوبار از سه قوچ نژاد لری بختیاری جمع آوری و سپس به منظور انجماد با محیط های انجماد مورد نظر رقیق شدند. تحرک، زنده مانی و یکپارچگی غشای پلاسمایی به عنوان مهمترین پارامترهای اسپرم بعد از سرد سازی و بعد از یخ گشایی مورد ارزیابی قرار گرفتند. کلیه داده ها با استفاده از رویه مدل خطی رایج (proc glm) نرم افزار آماری sas (نسخه 0/9) آنالیز شدند و مقایسه میانگین حداقل مربعات (lsm) با استفاده ازآزمون t استودنت انجام شد و سطح معنی داری (05/0>p) در نظر گرفته شد. به طور کلیsds همراه با زرده تخم مرغ در دو مرحله ی قبل و بعد از فریز کردن بهترین عملکرد را بر پارامترهای تحرک، زنده مانی و یکپارچگی غشای پلاسمایی داشت (05/0>p). سطح 8 درصد لیپوپروتئین با چگالی پایین فریز شده در قبل از فریز کردن عملکرد پایین تری نسبت به گروه کنترل (15 درصد زرده تخم مرغ) بر پارامترهای تحرک و زنده مانی (05/0>p) داشت اما در بعد از یخ گشایی عملکرد یکسانی در مقابل گروه کنترل نشان داد. افزودن 35 و 75 میکروگرم بر میلی لیتر میخک اثرات مضر رادیکال های آزاد را پس از سرد سازی مهار کرد اما سطح 115 میکروگرم بر میلی لیتر اثر سمی بر اسپرم ها داشت. پس از یخ گشایی تنها سطوح 75 میکروگرم بر میلی لیتر در بین سطوح دیگر میخک بهترین عملکرد را بر پارامترهای تحرک، زنده مانی و یکپارچگی غشای پلاسمایی داشت. یافته های آزمایش حاضر بیانگر آن است که عملکرد حفاظتی لیپوپروتئین با چگالی پایین عموماً در مرحله ی فریز نمودن بروز نموده و لیوفیلیزه نمودن ldl (فریز درایر) موجب کاهش پتانسیل حفاظتی این ماده می شود. همچنین سطح مورد نیاز ترکیبات آنتی اکسیدانتی در مرحله قبل از فریز نمودن کمتر از مرحله ی فریز است.

چکیده: یکی از مشکلاتی که تکنیک تولید جنین های آزمایشگاهی (ivep) با آن روبرو است، انتخاب تخمک با کیفیت و مناسب است. به طور معمول تخمک هایی که از فولیکول های تخمدان ‘گاو های کشتار شده از کشتارگاه جمع آوری می شود از نظر کیفیت و شایستگی تکوین با هم اختلاف دارند. یکی از این اختلاف ها در تخمک های نابالغ تولید آنزیمی به نام glucose-6-phosphate dehydrogenase (g6pdh) است و به وسیله رنگی بنامbrilliant cresyl blue (bcb) میزان این فعالیت آنزیمی سنجیده و به دو گروه bcb+ (با فعالیت آنزیمی کمترg6pdh ) و سیتوپلاسمی به رنگ آبی همچنین گروه bcb- (با فعالیت آنزیمی بیشتر g6pdh) و سیتوپلاسم بی رنگ تقسیم می کند. یکی از تکنیک هایی که در آزمایشگاه های تولید جنین به طور معمول استفاده می شود (cryopreservation) است که اجازه ذخیره طولانی مدت تخمک هایی با ارزش ژنتیکی بالا را می دهد. تخمک های جدا شده به وسیله bcb را در دو گروه انجمادی و غیر انجمادی تقسیم کرده و هر کدام از گروه ها را به دو روش ivf , paretenogensis اقدام به تولید جنین کرده و سپس نتایج حاصل از تسهیم (cleavage) و میزان تولید بلاستوسیت را ثبت کرده و سپس به وسیله رنگ آمیزی افتراقی به بررسی توده ی بلاستوسیست در جنین های جدا شده به وسیله ی تست bcb، در گروه غیر انجمادی پرداختیم. طبق نتایج حاصله میزان تسهیم در گروه bcb+ غیر انجمادی و انجمادی به روش ivf به ترتیب نسبت به گروه bcb- غیر انجمادی و انجمادی افزایش غیرمعنی داری داشته (p>0.05)، همچنین میزان تسهیم دو گروه انجمادی و غیر انجمادی تفاوت معنی داری نداشتند (p>0.05). اما نتایج حاصله میزان تولید بلاستوسیت در گروه bcb+ غیر انجمادی و انجمادی به روشivf به ترتیب نسبت به گروه bcb- غیر انجمادی و انجمادی افزایش معنی داری داشت (p<0.05). اما در تولید جنین هایparetenogensis در نتایج حاصل از تسهیم، افزایش معنی داری در گروه bcb+ غیر انجمادی نسبت به بقیه گروه ها دیده شد (p<0.05). اما تفاوت معنی داری در بین گروه های bcb+ و bcb- انجمادی دیده نمی شد (p>0.05). از طرف دیگر میزان تولید بلاستوسیت در بین تمامی گروه ها تفاوت معنی داری داشته و گروه های bcb+ انجمادی و غیر انجمادی نسبت به هم و نسبت به گروه های - bcbانجمادی و غیر انجمادی افزایش معنی داری داشت (p<0.05). همچنین نتایج حاصل از رنگ آمیزی افتراقی در گروه غیر انجمادی در بلاستوسیت های hatch شده نشان می دهد که روند تکاملی در جنین هایbcb+ بهتر بوده و این جنین ها بیشترین توده ی سلولی را داشته اند. با توجه به نتایج به دست آمده می توان گفت که استفاده از رنگ bcb به عنوان یه تست در انتخاب تخمک با کیفیت بسیار مناسب بوده و باعث افزایش راندمان تکینک های آزمایشگاهی تولید جنین به خصوص درتولید جنین با استفاده از تکنیک انجماد شیشه ای تخمک می شود. کلید واژه ها: انجماد تخمک، بلاستوسیست، رنگ آمیزی افتراقی، brilliant cresyl blue (bcb)، g6pdh

هدف از انجام این مطالعه ارزیابی تاثیر دو روش همزمان سازی اوولاسیون، هیتسینک و آوسینک، روی میزان آبستنی در گاوهای شیری بوده است. این مطالعه در یکی از گله های بزرگ گاو شیری در استان اصفهان انجام شد. در کل 133 راس گاو شیری با روزهای شیردهی 200-50 روز در تجربه قرار داده شد. گاوها به صورت تصادفی در سه گروه توزیع شدند گروه کنترل: شامل 50 راس گاو بود. در مورد گاوهای این گروه از هیچ برنامه ی همرمانی خاصی استفاده نشد. این گاوها بعد از مشاهده علائم فحلی مطابق برنامه am/pm تلقیح می شدند؛ ملاک فحل یابی، فحلی ایستا (standing heat) بود.گروه آوسینک(ovsynch): شامل 46 راس گاو بود؛ این گاوها با پروتکل آوسینک تحت درمان قرار می گرفتند. در روزهای 0 و 9 به میزان 10 میکروگرم آنالوگ gnrh و در روز 7 در حدود 500 میکروگرم pgf2? به صورت عضلانی دریافت می کردند و 20-16 ساعت بعد از gnrh دوم، تلقیح مصنوعی می-شدند. گروه هیتسینک (heatsynch): شامل 37 راس گاو بود. این گاوها با پروتکل هیتسینک تحت درمان قرار گرفتند؛ در روز 0 به میزان 10 میکروگرم آنالوگ gnrh و 7 روز بعد از آن 500 میکروگرم pgf2? و 24 ساعت بعد یک میلی گرم استرادیول سیپیونات به صورت عضلانی دریافت کردند. گاو هایی که بعد از تزریق استرادیول فحلی نشان دادند با روش am/pm تلقیح شدند، آن هایی که فحلی نشان ندادند، 48 ساعت بعد از تزریق استرادیول، تلقیح اجباری شدند (ta). تشخیص آبستنی بوسیله سونوگرافی در روز 30 و با روش لمس رکتال بین روزهای40تا 45 بعد از تلقیح مصنوعی انجام شد. تفاوت های مشاهده شده در میزان آبستنی در گروه های مختلف با روش chi-square مورد مقایسه قرار گرفت. اگرچه میزان آبستنی در گروه اوسینک نسبت به گروه هیتسینک و گروه کنترل بالاتر بوده ولی این اختلاف از نظر آماری معنادار نیست (0/05>p).

علی رغم پیشرفت های اخیر انجماد تخمک تا رسیدن به مرحله ای که به صورت گسترده در برنامه های تولید مثلی به ویژه در دام های اهلی مورد استفاده قرار گیرد، فاصله زیادی دارد. مشخص شده است که در تخمک ها در اثر انجماد شیشه ای سطح رادیکال های آزاد افزایش یافته و ظرفیت آنتی اکسیدانی کاهش می یابد؛ همچنین میکروتوبول ها دچار آسیب شده و در نتیجه توزیع میتوکندری ها در سطح تخمک دچار اختلال می شود و پتانسیل غشای میتوکندری ها کاهش یافته و سطح atp کمتر از تخمک های غیر منجمد است. هدف این پایان نامه افزایش قابلیت تکاملی تخمک های نابالغ انجماد شیشه ای- ذوب شده گوسفند با استفاده از از آنتی اکسیدان ها (ویتامین c، nac و گلیسین) با دو غلظت در محلول های انجماد و ذوب و یک غلظت فقط در محیط کشت بلوغ، ترکیبات موثر بر میکروتوبول ها (پاکلیتاکسل و دمکولسین) با دو غلظت پیش از انجماد شیشه ای و یک مهار کننده mpt (سیکلوسپورین a) با دو غلظت پیش از انجماد شیشه ای، بو.با توجه به نتایج بدست آمده می توان گفت ترمیم آسیب های ناشی از انجماد شیشه ای در تخمک های نابالغ با استفاده از آنتی-اکسیدان ها، ترکیبات موثر بر میکروتوبول ها و مهارکننده mpt سبب افزایش قابلیت تکاملی تخمک ها پس از انجماد شیشه ای و ذوب می شود. همچنین بالاترین میزان بلاستوسیست بدست آمده در مطالعات انجماد شیشه ای تخمک نابالغ گوسفند در مطالعه حاضر حاصل آمده است.

روش intracytoplasmic sperm injection (icsi) یکی از روش های کمک باروری برای غلبه بر ناباروری با فاکتور اسپرمی می باشد که علاوه بر انسان در گونه های حیوانی و نیز حیوانات اهلی انجام می گیرد. در مورد گاو، خوک و گوسفند به دلیل منحصر به فرد بودن ساختار کروماتین اسپرم، تزریق آن به تنهایی برای لقاح موفق در icsi و تشکیل پیش هسته نر کفایت نمی کند. ساختار نوکلئوپروتئینی کروماتین اسپرم در این گونه ها از جمله در گوسفند به دلیل حضور پروتامین نوع 1 و پیوند های دی سولفیدی فراوان در ساختار آن بسیار متراکم و پایدار است. لازمه تشکیل پیش هسته نر در این گونه ها، تراکم زدایی اسپرم قبل از تزریق به داخل اووسیت می باشد. کارایی روش icsi را در گوسفند با تیمار های مختلف به منظور تراکم زدایی کروماتین آن می توان ارتقا بخشید. تیمار مناسب علاوه بر کارایی در تراکم زدایی، باید حداقل تأثیر سوء را بر صحت dna اسپرم داشته باشد. بنابراین ارزیابی صحت dna اسپرم قبل از تزریق ضروری می باشد که بدین منظور از روش هایی همچون رنگ آمیزی اکریدین اورنج و آزمون tunel استفاده می شود. از آن جا که تا کنون تیمار کارآمد و ایمن برای اسپرم گوسفند شناسایی نشده است، بر آن شدیم تا با هدف دستیابی به چنین روشی به بررسی تیمار های hep+dtt، hep+2me (2-mercaptoethanol) و hep+gsh و انجام آزمون tunel و رنگ آمیزی اکریدین اورنج در مورد آن ها بپردازیم.

با توجه به میزلن پایین شکل گیری پرونوکلئوس نر و متعاقبا جنین های حقیقی در هنگام تزیق داخل سیتوپلاسمی اسپرم در گونه هایی نظیر گاو و گوسفند، سعی بر آن است تا با کمک ترکیباتی هم چون gsh+heparin، 2me+heparin، triton x-100، sonication، القـای واکنش آکروزومی و نیز تزریق گلوتاتیون و عصاره اسپرم روند تولید پیش هسته ی نر و جنین های حقیقی بهبود یابد.ترکیباتی هم چون gsh+heparin، 2me+heparin، triton x-100، sonication، القـای واکنش آکروزومی و نیز تزریق گلوتاتیون و عصاره اسپرم است. انتظار می رود احیای باندهای دی سولفید توسط ترکیبات احیاکننده ای نظیر gsh و 2me و جابه جایی پروتامین با هیستون توسط هپارین، حذف اثرات مخرب آنزیم-های آکروزوم به دنبال القـای واکنش آکروزومی، تخریب و نابودی غشای پلاسمایی به کمک triton x-100 و امواج اولتراسوند و نیز فاکتور فعال کننده ی تخمک موجود در اسپرم (soaf)که در عصاره ی اسپرم حضور دارد، همگی بتوانند نقش موثری در بهبود شکل گیری پرونوکلئوس نر وایجاد جنین های حقیقی ایفا کنند.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.