نام پژوهشگر: حسین کمال‌الدینی

توالی یابی بخشی از ژن مقاومت به شوری (eb) در گندم هیرمند
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده کشاورزی 1392
  حمیده زارع   حسین کمال الدینی

از میان تنش های غیر زنده، شوری یکی از بزرگ ترین محدودکننده های تولیدات کشاورزی می باشد. بعضی از گونه های وحشی تیره گندمیان، مانند گونه های مربوط به جنس thinopyrum دارای خزانه ژنی با ارزشی برای مقاومت به تنش های زیستی و غیر زیستی بوده و می توانند به آسانی با گندم تلاقی یابند. در اواخر سال 1936 انتقال مواد ژنتیکی از جنس thinopyrum به گندم، به منظور افزایش تنوع ژنتیکی در گندم برای ایجاد مقاومت به بیماری ها، تنش شوری، خشکی و دیگر صفات افزایش یافت. شناسایی و توصیف کروماتین یا قطعات کروموزومی بیگانه داخل ژنوم گندم، در برنامه های اصلاحی از اهمیت ویژه-ای برخوردار است. در این تحقیق بخش هایی از توالی ژن مقاومت به شوری eb در یکی از واریته های گندم نان به نام هیرمند شناسایی شد. به این منظور پس از استخراج dna، بر اساس آزمایشات انجام شده توسط محققین دیگر که پرایمرopf03 را به عنوان یک نشانگر مخصوص ژنومeb شناسایی و توالی آن را به بانک ژن گزارش کرده بودند، دو جفت پرایمر به نام های f1r1 وf2r2 طراحی و این دو پرایمر توانستند به ترتیب قطعات bp 462 و bp 1272 را در گندم هیرمند تکثیر کنند. سپس هضم آنزیمی dna ژنومی با آنزیم های برشی psti و apai انجام شده و طراحی سازگارسازها و آغازگرهای اختصاصی صورت گرفت. اتصال آداپتورهای چند نوکلئوتیدی کوتاه به انتهای قطعات برش خورده، به کمک آنزیم t4ligase صورت گرفت. در نهایت با کمک pcr و با استفاده از دو جفت پرایمر r3adp1 و f3adp2 نواحی بالادست و پایین دست ژن مورد نظر به ترتیب قطعاتی با اندازه های bp 510 و bp 130 را تکثیر کردند. قطعات تکثیر شده توالی یابی شدند که قطعه bp 1272حاصل از sequencing با سایر توالی های eb موجود در بانک ژن 96-84 درصد همولوژی نشان داد. بنابراین می توان نتیجه گرفت که قطعه bp 1272 تکثیر شده در گندم هیرمند، بخشی از ژن مقاومت به شوری بوده که احتمال دارد این ژن در طی هیبریداسیون اجداد این واریته گندم با علف شور ساحل به این رقم انتقال یافته باشد.

بررسی همبستگی پلی مورفیسمsnpی rs744166 در ژن stat3 با بیماری مالتیپل اسکلروزیس در شرق ایران
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده علوم 1393
  رویا رافع شیخی   حسین کمال الدینی

بیماری مالتیپل اسکلروزیس ((ms یک بیماری خود ایمنی تخریب کننده غلاف میلین سیستم عصبی مرکزی (cns) با سبب شناسی ناشناخته است. میزان شیوع این بیماری در قسمت های مختلف دنیا متفاوت است. متاسفانه در طی سال های اخیر نرخ ابتلا به این بیماری در ایران و سایر نقاط جهان به شدت در حال افزایش است. اخیرا مطالعات گسترده ژنوم پیشنهاد می کند که ژن انتقال دهنده سیگنال و فعال کننده رونویسی (stat3) یک ژن مستعد کننده ابتلا به مالتیپل اسکلروزیس است. stat3 روی کروموزوم 17q21.1قرار دارد و فاکتور رونویسی را کد می کند که در مسیرهای بیوشیمیایی متعددی مانند: مسیرjak-stat، آپوپتوزیس، تمایز th17، تکثیر سلولی، آنژیوژنزیس نقش دارد. در این پژوهش پس از مطالعات اپیدمیولوژیک و کسب رضایت نامه از افراد نمونه های خون محیطی 204 بیمار مبتلا به مالتیپل اسکلروزیس و 202 فرد سالم جمع آوری شدند. dna ژنومیک آن ها استخراج گردید و با استفاده از تکنیک pcr-rflp ژنوتیپ در اسنیپ rs744166 تعیین شد. داده های حاصل به روشspss (portable ibm spss (statistics v19 مورد آنالیز آماری قرار گرفت. با توجه به ضرورت و اهمیت مطالعه بیماری ms، در مطالعه حاضر همبستگی پلی مورفیسم rs744166در ژن stat3 با بیماری ms در جمعیت شرق ایران مورد بررسی قرار گرفت. در آنالیز آماری اسنیپ rs744166 که در اولین اینترون از ژن stat3 قرار دارد تفاوت معنی داری بین بیماران مورد مطالعه در مقایسه با افراد سالم مشاهده شد. پیشنهاد می گردد این پژوهش با در نظر گرفتن جامعه آماری بزرگتر و همچنین دیگر قومیت های موجود مجددا تکرار شود تا به نتایج و آمار دقیق تری دست پیدا کنیم.

تشخیص مولکولی سودوموناس آئروژینوزا با استفاده از پروب نانوذرات طلا
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده علوم 1393
  زهرا موسیوند   حسین کمال الدینی

تکنیک های مولکولی مانند واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) روش تشخیصی سریع و قابل اعتماد برای شناسایی پاتوژن های میکروبی می باشند. در دهه¬های اخیر در پی درمان آنتی¬بیوتیکی، سودوموناس آئروژینوزا به عنوان یکی از مهم¬ترین پاتوژن بیمارستانی شناسایی شده است که باعث عفونت¬های حاد و مزمن در افراد بستری در بیمارستان می¬شود. بسیاری از روش های تشخیصی بر اساس pcr برای شناسایی سودوموناس آئروژینوزا توسعه یافته اند، بااین حال بسیاری از پروتکل ها تنها یک ژن هدف را شناسایی می کنند و این روش ها، شناسایی جامع و قابل اعتمادی را برای شناسایی این باکتری فراهم نمی نمایند، زیرا گونه سودوموناس آئروژینوزا گرفته شده از بیماران تنوع ژنوتیپی بالایی را نشان می دهد. برای غلبه بر این مشکلات از چندین روش pcr استفاده شده است. اما با توجه به مبادلات ژنتیکی بین سودوموناس آئروژینوزا و باکتری های مرتبط نزدیک به آن این تکنیک اغلب اختصاصیت پایینی دارد. بنابراین نیاز به طراحی روش¬های واجد اختصاصیت بالا مبتنی بر پروب اختصاصی و multiplex pcr برای تأیید تشخیص سودوموناس آئروژینوزا وجود دارد. در این مطالعه از دو روش مولکولی multiplex pcr و روش رنگ سنجی نانوذرات طلا استفاده و حساسیت و اختصاصیت این دو روش مورد ارزیابی قرار گرفت. بهینه سازی multiplex pcr و اختصاصیت و حساسیت آن با استفاده از چهار ژن اختصاصی سودوموناس آئروژینوزا (oprl، opri، toxa و rdna 16s) صورت پذیرفت و نتایج نشان دهنده اختصاصیت 100 درصد می باشد. برای ژن 16s rdna در نهایت تأیید تشخیص این باکتری با استفاده از پروب نانوذرات طلا مورد بررسی قرار گرفت. پروب متصل شده به نانوذرات طلا در حضور dna هدف باعث تجمع نانوذرات طلا به شکل شبکه ای متصل به هم و درنتیجه تغییر رنگ می شود. این تغییر رنگ نشان دهنده وجود مولکول هدف در نمونه بوده و به روش چشمی هم قابل مشاهده است.

تشخیص باکتری آسینتوباکتر بومانی با استفاده از pcrچند گانه و نانوذرات طلا
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده علوم 1393
  لیلا سعیدی   حسین کمال الدینی

تکنولوژی های تشخیصی حساس، انتخابی و سریع برای پاتوژن های باکتریایی در تشخیص بالینی و کنترل بیماری از اهمیت ویژه ای برخوردار می باشند. روش های تشخیصی مرسوم و سنتی هر چند که تکنیک های قدرتمند و عاری از خطا هستند، اما اکثر آن ها روش هایی دشوار، وقت گیر، پیچیده و فاقد توانایی و اختصاصیت لازم برای تشخیص هدف مورد نظر می باشند. در مقابل استفاده از روش های نوظهور مانند پروب های متصل به نانوذرات طلا در مقایسه با روش های بیوشیمیایی و مولکولی از اختصاصیت، حساسیت و سرعت بالایی در تشخیص بهره مند هستند و با صرف هزینه کمتری می توانند مورد استفاده قرار گیرند. آسینتوباکتر بومانی به عنوان یک پاتوژن بیمارستانی مهم به ویژه در بیماران با وضعیت بحرانی مطرح است. توانایی ویژه این باکتری برای زنده ماندن در محیط بیمارستان و کسب مقاومت آنتی-بیوتیکی یک چالش کلینیکی مهم محسوب می‏شود. از این رو شناسایی به موقع این باکتری با توجه به اهمیت آن ضروری می باشد. این مطالعه به هدف شناسایی مولکولی سویه atcc 19606 آسینتوباکتر بومانی با استفاده از pcr چندگانه و پروب متصل شده به نانوذرات طلا طراحی شده است. آسینتوباکتر بومانی atcc 19606از مرکز تحقیقات میکروب شناسی بالینی شیراز تهیه شد. پس از کشت باکتری روی محیط اختصاصی مولر هینتون آگار (mha)، استخراج dna به روش جوشاندن انجام گردید. در مرحله بعد ابتدا multiplex pcr برای شناسایی باکتری با استفاده از ژن های ompa و csue به کار برده شد و سپس از روش های اتصالات عرضی و مستقل از اتصالات عرضی که مبتنی بر نانوذرات طلاست، برای تشخیص باکتری استفاده گردید.