نفت یکی از مهمترین موادی است که به عنوان منبع تامین انرژی مورد توجه بشر قرار گرفته است. بزرگترین نگرانی در مورد این آلاینده خصوصیات سمیت زایی، جهش زایی و سرطان زایی آن است. از دیگر آلاینده‏های پایدار، سمی و غیرقابل تجزیه در محیط زیست، فلزات سنگین هستند. بیوسورفکتانت‏ها ترکیبات دوقطبی هستند که توسط ریزموجودات تولید می شوند و از روش‏های موثر بر تجزیه و حذف آلاینده‏ها به شمار می آیند. در این پژوهش، تولید بیوسورفکتانت توسط دو باکتری pseudomonas putida 1694 و bacillus laterosporus در دو دمای 30 و 37 درجه سانتی‏گراد، در دو زمان 48 و 168 ساعت در منابع مختلف کربن (گلوکز، نفت سفید و ملاس) بررسی شد. به منظور تائید تولید بیوسورفکتانت از روش‏های کمی و کیفی غربالگری مختلف مانند آزمون‏های همولیز بلاد آگار، پراکنش نفت، فروپاشی نفت، درصد شاخص امولسیفیکاسیون، ctab آگار، آبگریزی سطح سلول باکتری و کشش سطحی استفاده گردید. همچنین زیست‏پالایی خاک آلوده نفتی با استفاده از باکتری‏های pseudomonas putida 1694 و bacillus laterosporus به صورت کشت تک و کنسرسیوم و سورفکتانت توئین20 مورد بررسی قرار گرفت. جوانه‏زنی بذور گلرنگ در خاک آلوده نفتی قبل و بعد از زیست‏پالایی بررسی شد. در مرحله بعد این پژوهش حداقل غلظت بازدارنده از رشد فلز سرب برای باکتری pseudomonas putida 1694 تعیین و حذف فلز سرب از خاک با استفاده از این باکتری، عامل کیلیت ساز edta و سورفکتانت توئین20 مورد ارزیابی قرار گرفت. بر اساس نتایج بدست آمده منبع کربن نفت سفید در دمای 37 درجه سانتی‏گراد و مدت زمان 168 ساعت به عنوان شرایط بهینه‏ی تولید بیوسورفکتانت توسط دو باکتری مذکور ارزیابی گردید. نتایج نشان داد که تیمار کنسرسیوم میکروبی+ توئین 20 بهترین عملکرد را در زیست پالایی خاک آلوده داشتند؛ و در مجموع تیمارهای میکروبی تواناتر از تیمار شیمیایی ارزیابی شدند. نتایج این پژوهش نشان داد که جوانه زنی بذور گلرنگ در خاک آلوده نفتی زیست پالایی شده نسبت به خاک زیست پالایی نشده به طور معنی‏دار بالاتر بود.