نام پژوهشگر: امیررضا پریزاده

کلونینگ و بیان ژن ناحیه 3abc سروتایپ o ویروس بیماری تب برفکی ایران و استفاده از آن در راستای تولید کیت تشخیصی الایزا.
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی 1393
  امیررضا پریزاده   سعید زیبایی

بیماری تب برفکی اولین بیماری ویروسی شناخته شده در حیوانات است که با گذشت بیش از صد سال از شناخت آن، همچنان یکی از مهمترین خطراتی است که صنعت دامپروری دنیا را تهدید می نماید. یکی از مهمترین روش های شناسایی حیوان واکسینه شده از حیوان مبتلا به تب برفکی استفاده از پروتئین غیرساختاری 3abcبه عنوان آنتی ژن در کیت الایزا می باشد. از اینرو، ژن 3abc ویروس تب برفکی سروتایپ o با استفاده از واکنش زنجیره پلیمراز و پرایمرهای اختصاصی حاوی سایت های برشی bamhi و hindiii جداسازی شد. به منظور بررسی خصوصیات نوکلوتیدی، ژن تکثیر شده به ناقل ptz57r/t انتقال و حضور ژن هدف در ناقل کلونینگ ptz57r/t با استفاده از روش¬های کلونی pcr، هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. به منظور تولید آنتی ژن نوترکیب، ژن هدف به وکتور بیانی pet21a (+) وارد و سپس به باکتری اشرشیاکلی bl21(de3) به عنوان میزبان بیان منتقل شد. باکتری حاوی وکتور نوترکیب با استفاده از iptg در غلظت نهایی5/1 میلی مولار القا شد. تولید پروتئین نوترکیب با استفاده از الکتروفورز پروتئین و وسترن بلاتینگ تایید شد. وزن مولکولی پروتئین تولید شده در حدود 50 کیلودالتون مشخص شد. نتایج آزمون الایزا نشان داد که آنتی ژن نوترکیب تولید شده به خوبی با آنتی بادی اختصاصی اتصال پیدا می کند و این آنتی ژن، پتانسیل مناسبی جهت استفاده در کیت تشخیصی الایزا برای شناسایی حیوانات اهلی آلوده از حیوانات واکسینه شده دارد.