همچنان عفونت با هرپس سیمپلکس ویروس ها، به عنوان یک مسأله ی جهانی که تهدیدکننده-ی سلامت افراد است، باقی مانده است. به طوری که مادران حامله بدون علامت می توانند توسط این ویروس باعث انسفالیت مرگبار در جنین خود گردند. بیماری های متعددی توسط تیپ یک این ویروس ایجاد می گردد که مهم ترین آن انسفالیت در نوزادان می باشد که هدف این مطالعه، توسعه ی یک تکنیک سریع، آسان و دارای حساسیت و ویژگی بالا برای تشخیص این ویروس در مایع مغزی نخاعی می باشد. در این مطالعه، روش lamp (loop mediated isothermal amplification) به عنوان یک تکنیک سریع با حساسیت و ویژگی بالا، برای تشخیص ویروس hsv-1 در نمونه های مایع مغزی نخاعی آلوده به این ویروس راه اندازی شد. ابتدا، این ویروس در محیط کشت سلولی رشد داده شد و بعد از استخراج ژنوم آن، از قطعه ای از ژنوم به عنوان کنترل مثبت استفاده گردید؛ جهت بررسی کار، 18 نمونه ی اخذشده از کودکان زیر هفت سال مبتلا به انسفالیت هرپس ویروسی تیپ یک بستری در بیمارستان های دی تهران و نمازی شیراز جمع آوری گردید. حساسیت و ویژگی تست در تشخیص ویروس hsv-1 به ترتیب copies/tube 500 و 9/99 درصد به ترتیب بود. تشخیص مثبت بودن در این تست از طریق الکتروفورز در ژل آگاروز 5/1 درصد و یا بررسی چشمی کدورت در لوله صورت گرفت؛ در نهایت، داده های به دست آمده با نتایج حاصل از real-time pcr و pcr مقایسه گردید که نشان داد نتایج تا حدود زیادی با یکدیگر مطابقت دارند. در این مطالعه، تکرارپذیری و قابلیت اعتماد واکنش lamp در ارتباط با تشخیص ویروس hsv-1 بررسی و مورد تأیید نهایی قرار گفت؛ نتایج نشان دادند که این روش به عنوان تکنیکی ساده، ارزان و سریع می تواند در آینده مورد استفاده های بیشتری در تشخیص بیماری های عفونی به ویژه ویروس ها خصوصاً در مناطق محروم قرار گیرد.

ویروسhdv دارای دو آنتی ژن می باشد. یک آنتی ژن 24 دالتونی با نام s-hdag و آنتی ژن 27 دالتونی به نام l-hdag . این دو آنتی ژن کاملا شبیه هم هستند با این تفاوت که l-hdag ، 19 اسید آمینه اضافی در c ترمینال دارد. s-hdag در همانند سازی و ورود ویروس به هسته و l-hdag برای بسته بندی ویروس و پایان همانند سازی مورد نیاز می باشند. در این تحقیق، تکنیک جهش زایی هدفدار بر پایهpcr و به روش overlap extention، طی سه مرحله و با دو جفت پرایمر مختلف بر روی cdna این ویروس انجام شد. قطعه dna حاصل در وکتور واسطه کلون شده و بعد از تأیید تغییرات اعمال شده توسط توالی یابی، در وکتور بیان pcdna3.1- و در سلولهای huh7 و hek293 بیان گردید. سنجش پروتئین حاصله توسط ایمیونوسایتو شیمی و الکتروفورز بر روی ژل پلی آکریل آمید در حضور سدیم دودسیل سولفات (sds-page) و westernblot با استفاده از آنتی بادی حاصل از سرم بیمار که دارای تیتر مناسبی برای hdvag بود انجام پذیرفت. با توالی یابی hdvag جهش یافته، صحت انجام مراحل جهش زایی و کلونینگ تأیید گردید. بیان این پروتئین نو ترکیب در سلولهای hek293 و huh7به خوبی صورت گرفته و روش های انجام شده جهت سنجش محصول بیان نیز ماهیت آن را تأیید نمودند. در این پژوهش سعی شده تا آنتی ژن نوترکیبی ((l-hdag از ویروس تولید شود. این آنتی ژن را می تواند در طراحی کیتهای تشخیصی، مطالعات ایمونولوژیک از قبیل dna vaccine وهمچنین از این ساختار می توان برای ساخت وکتور(جهت انتقال قطعات ژنومی از قبیل رایبوزوم) و سایر مطالعات در مورد ویروس دلتا به نحوی که این آنتی ژن در آن دخیل می باشد، مورد استفاده قرار داد. کلمات کلیدی:hdv, soeing-pcr , l-hdag

هپاتیت b یکی از شایع ترین بیماریهای کبد در جهان می‎باشد، که عامل ایجاد کننده آن عفونت با ویروس هپاتیت b (hbv) است. محدودیت‎های موجود در درمان hbv به همراه پیشرفت‎هایی که درزمینه بیولوژی مولکولی hbv اتفاق افتاده، تلاشها را برای کشف شیوه‎های جدید در مهار تکثیر hbv افزایش داده است. ژنوم بسیار فشرده و هم‎پوشان با عملکردهای مختلف باعث شده تا hbv به عنوان یک هدف مناسب برای درمان بر پایه هیبریداسیون اسید نوکلئیک از جمله rnaiقرار بگیرد. hdv به طور طبیعی فقط هپاتوسیت ها را آلوده می‎کند. بعضی از مطالعات انجام گرفته پیشنهاد می‎کنند که hdv نوترکیب می‎تواند به عنوان یک ابزار موثر برای تحویل اختصاصی رایبوزایم، sirna یا سایر rnaهایی که از لحاظ بیولوژیکی فعال هستند، عمل نموده و بافتها و یا سلولهای آلوده به hbv را هدف قرار دهد. در این پژوهش ابتدا با غربالگری 5sirna علیه ژنوم hbv ،2 sirna کارآمد جهت مهار تکثیر ویروس hbv با استفاده از روشهای الایزا و real-time pcr انتخاب شدند. در مرحله بعد، از mrna تغییر یافتهhdv ، به عنوان یک وکتور برای تحویلshrna های معادل sirnaهای انتخاب شده به سلولهای آلوده به hbvاستفاده گردید. برای این منظور ابتدا ناحیه مورد نظر در ژنوم hdv برای وارد نمودن توالی shrna انتخاب شد که در انتهای mrnas-hdag می باشد. همچنین توالی shrna در یک توالی پوشاننده از اینترون صناعی قرار داده شد تا بوسیله فرآیند splicing از انتهای mrna آزاد شود. با استفاده از روش pcr هم پوشان قطعه حاوی s-hdag/intronic shrna تولید شد و پس از کلون کردن در وکتور بیانی، اثر مهاری آن بر تکثیر hbv مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج این پژوهش برای اولین بار نشان داد hdv mrna توانایی انتقال توالیintronic shrna را به سلولهای huh-7 دارد و پس از پردازش بوسیله فرآیند splicing می تواند تولید rna و پروتئین های hbv را مهار نماید. بنابراین از این شیوه می توان در تولید ژنوم نوترکیب hdv حاوی توالی shrnaعلیه ویروس hbv و همچنین سایر اختلالات کبدی استفاده کرد.