مقدمه: در این فصل به معرفی فصول شامل بررسی منابع، مواد و روش اجرا، نتایج و بحث می‏پردازیم. در فصل دوم به معرفی معرفی حبوبات و گیاه لوبیا، خاستگاه و سطح زیر کشت لوبیا، ارزش غذایی لوبیا، طبقه بندی لوبیا بر اساس خصوصیات بذر، گیاه‏شناسی لوبیا، ویژگی‏های بوم شناسی لوبیا، اصلاح برای تحمل به دماهای بالا و پایین و به معرفی تنش‏ها از جمله تنش دمای پایین، اثرات سرما، اثرات مورفولوژیک، اثرات فیزیولوژیک، اثرات سیتولوژیک، اثرات اکسیداتیو ناشی از سرما، سیگنال‏های تنش سرما، مکانیسم‏های مقاومت به سرما در گیاهان، تغییر در بیان ژن‏ها و تجلی پروتئین‏های خاص، تغییر وضعیت چربی های غشا، بیوسنتز اسمولیت ها، تقویت سیستم آنتی اکسیدانتی سلول، همچنین به معرفی تریازول، مکانیسم اثر پاکلوبوترازول، اثر پاکلوبوترازول روی رشد، اثر پاکلوبوترازول روی فتوسنتز و محتوای کلروفیل، اثر پاکلوبوترازول روی مقاومت به تنش پرداختیم. حبوبات از نظر تحمل گرما و سرما دو نوع هستند. نوع‏های سرما دوست که در زمان رشد چندین درجه زیر صفر را تحمل می‏کنند، مثل نخود، عدس و باقلا. این تیپ‏ها معمولاً روز بلند هستند و نوع‏های گرما دوست که در دمای صفر درجه سانتی‏گراد به شدت آسیب می‏بینند. این تیپ‏ها معمولاً روزکوتاه هستند. این گیاهان بایستی زمانی کشت شوند که خطر یخبندان وجود نداشته باشد و دمای محیط از 14 تا 22 درجه سانتی‏گراد بیشتر باشد. از این گیاهان می توان لوبیای معمولی، لوبیای چشم بلبلی و ماش را نام برد. بنابراین، از آن‏جایی که خاستگاه اصلی لوبیا مناطق گرمسیری و آمریکای جنوبی است، این گیاه در سایر مناطق مشابه که دمای محیطی کمتر از 10 درجه سانتی‏گراد نداشته باشد، جوانه خواهد زد. لوبیا گیاهی گرما دوست می باشد. به سرما و یخبندان بسیار حساس بوده و در بهار تا زمانی که دمای محیط به قدر کافی بالا نرود نمی توان به کشت آن مبادرت ورزید. لوبیا سفید گیاهی است حساس به سرما و نیاز به فصل زراعی بدون یخبندان و هوای خشک دارد. لوبیا سفید در مقایسه با انواع دیگر لوبیا مقاومتش نسبت به شرایط نامطلوب کمتر است. تنش عبارت است از تغییر در شرایط بهینه زندگی که سبب بروز پاسخ هایی خاص در فیزیولوژی یک موجود زنده می شود. این پاسخ ها بسته به نوع شرایط ممکن است موقتی یا دائمی باشند. در حدود دو سوم از زمین های کشاورزی جهان در معرض با دماهای زیر نقطه یخبندان قرار دارند و در حدود نیمی از آن‏ها در دماهای زیر 20- درجه سانتی‎گراد قرار دارند. بنابراین، اثرات تنش سرما بر گیاهان مورد توجه و مطالعه قرار گرفته است تا بتوانند مقاومت به سرما را در گیاهان کشاورزی مهم بهبود دهند. مقاومت به سرما فرآیندی است که تحت تاثیر عوامل ژنتیکی و محیطی قرار می گیرد. میزان تحمل به سرما در بین گونه ها و بین رقم‏های یک گونه و حتی در بین بافت های همان گیاه متفاوت است. بر طبق محدوده حرارتی، گیاهان به 3 گروه: حساس به سرمازدگی (گیاهان حساس به دماهای زیر 12 درجه سانتی گراد) که لوبیا در این گروه قرار می گیرد، گیاهان مقاوم به سرمازدگی ( مقاوم به دمای پایین اما نه دمای‏های یخبندان) و گیاهان مقاوم به یخبندان و انجماد (که مقاومت به یخبندان را بعد از یک دوره در معرض قرار گرفتن با دمای پایین یا غیر یخبندان کسب می کنند) تقسیم شده اند. شرایط محیطی نامساعد شامل دما های غیر بهینه، به طور چشمگیری جوانه زنی بذر و رشد گیاهان را ممانعت می کند و بنابراین، کاهش دهنده محصول است. از نظر اقتصادی پیدا کردن روش هایی برای غلبه بر این مشکلات، مهم می باشد، یکی از این روش ها استفاده از تنظیم کننده های رشد مثل تریازول ها است. در گیاهانی که دارای توانایی ذاتی در پاسخ به تنش ها هستند، تریازول ها بیان و بروز این توانایی را تسهیل می کنند. تریازول ها باعث تغییرات مورفولوژی شامل ممانعت رشد گیاه، کاهش طویل شدن، افزایش مقادیر کلروفیل، بزرگ شدن کلروپلاست ها، بافت برگی ضخیم‏تر، افزایش نسبت ریشه به ساقه، تولید آلکالوئیدها و افزایش در متابولیسم کربوهیدرات ها می شوند. همچنین تریازول ها تغییرات هورمونی و اثرات بیوشیمیایی نظیر رفع سمیت گونه های فعال اکسیژن و افزایش پرولین و تقویت سیستم های آنتی اکسیدانتی سلول ها را القا می نمایند و باعث مقاومت به تنش ها می شوند. پاکلوبوترازول از جمله تریازول هایی است که به عنوان تنظیم کننده رشد گیاهان استخراج شده‏اند. با توجه به شناخت چنین اثراتی از پاکلوبوترازول و با توجه به اطلاعات موجود مبنی بر اثرات سرما روی گیاهان و احتمال ایجاد تنش اکسیداتیو توسط سرما روی گیاهان این پژوهش در جهت بررسی اثر پاکلوبوترازول روی تعدیل اثرات تنش سرما در گیاه لوبیا طراحی و به اجرا در آمده است. به طوری که، در فصل سوم به شرح انجام آزمایش در دو مرحله شامل آزمایش اثر رقم و سرما بر درصد جوانه زنی، طول ریشه‏چه و ساقه‏چه گیاهان لوبیا و آزمایش اثر رقم، سرما و پاکلوبوترازول روی شاخص های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی گیاه لوبیا و روش‏ اندازه گیری شاخص‏ها از جمله سنجش طول، وزن تر و خشک اندام های هوایی و ریشه، اندازه گیری کلروفیل و کاروتنوئید، سنجش مقدار پراکسیداسیون لیپیدهای غشاء، سنجش میزان نشت الکترولیتی غشاء، اندازه گیری پرولین، اندازه گیری کربوهیدارت های محلول، اندازه گیری آنزیم های آنتی اکسیدانت کاتالاز و آسکوربات پراکسیداز و گایاکول پراکسیداز پرداختیم. در فصل چهارم و پنجم با توجه به نتایج به دست آمده از تحقیقات بعضی از دانشمندان از جمله berova و همکاران که در گیاه گندم و baninasab که در گیاهچه‏های هندوانه و سایر دانشمندانی که در این زمینه تحقیق کرده‏اند که به بررسی اثر سرما و پاکلوبوترازول پرداختند و مشاهده کردند که سرما باعث کاهش پارامترهای رشد و افزایش فعالیت آنزیم‏های آنتی اکسیدانت و پراکسیداسیون لیپیدی و درصد نشت می‏شوند و تیمار پاکلوبوترازول باعث بهبود فاکتورهای رشد و کاهش میزان پراکسیداسیون لیپیدی و درصد نشت و افزایش فعالیت آنزیم‏ها می‏شود، ما نیز در این تحقیق به بررسی اثرات سرما و پاکلوبوترازول پرداختیم و نتایج گزارش شده توسط دانشمندان ذکر شده و سایر دانشمندان را مشاهده کردیم. به طوری که به بررسی اثر رقم و سرما بر درصد جوانه زنی، طول ریشه چه و ساقه چه و اثر رقم، دما و پاکلوبوترازول بر شاخص های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی گیاهان لوبیا پرداختیم. بنابراین، به طور کلی در این تحقیق مشاهده شد که سرما می تواند باعث تغییر در عملکرد تمامیت غشا پلاسمایی شود، به طوریکه نشت یون ها و پراکسیداسیون لیپیدی غشا افزایش می یابد و تیمار با پاکلوبوترازول اثرات منفی برودت روی غشا را تعدیل می کند، شاید بدان دلیل که سرما باعث تغییرات غشایی شامل کاهش فسفولیپیدهای غشا و افزایش نسبت استرول به فسفولیپید و افزایش اسیدهای چرب اشباع می شود و در مقابل پاکلوبوترازول از این تغییر جلوگیری می کند. ثابت شده است که تریازول ها بیوسنتز استرول را تغییر می دهند و باعث تغییر ترکیب استرول غشا می شوند که این تغییر باعث القا استحکام و سازگاری می شود. از سوی دیگر، سرما موجب تولید گونه های فعال اکسیژن می شود که با حمله به غشا نشت یون ها و پراکسیداسیون لیپیدی غشا را افزایش می دهند. در مقابل پاکلوبوترازول با افزایش پرولین و تقویت سیستم های آنتی اکسیدانت آنزیمی موجب رفع سمیت گونه های فعال اکسیژن و در نتیجه باعث مقاومت به تنش سرما می شود. افزایش متابولیسم کربوهیدرات ها نیز به تامین انرژی سلول در تنش کمک می کند و همه این عوامل مقاومت به سرما را در گیاه القا می کنند.

این مطالعه به منظور بررسی اثرات دو فلز روی و کبالت بر رشد و پارامتر های بیوشیمیایی سرم در ماهی قزل آلای رنگین کمان انجام گرفته است.به این منظور غلظت های 100 و 250 میکروگرم در لیتر روی و 10 و 30 میکروگرم در لیتر کبالت به کار برده شد. پس از طی دوره سازگاری (10 روز در محل نگهداری حیوانات - دانشکده دامپزشکی )، ماهی ها به مدت 30 روز در محیط های آبی حاوی یون های فوق نگهداری شدند و در این مدت 3 بار در روز های اول، 15 و 30 از آن ها نمونه گیری به عمل آمد. در هر بار نمونه گیری، پس از بیهوش کردن ماهی ها، ابتدا وزن و طول کل آن ها اندازه گیری شده و سپس از آن ها خون گیری به عمل آمد. پس از جدا کردن سرم، آنالیز های بیوشیمیایی با استفاده از دستگاه اتوآنالایزر انجام گرفت. تحلیل آماری، نتایج زیر را نشان داد. هر دو غلظت روی و غلظت زیاد کبالت طی 30 روز باعث کاهش رشد و پارامتر های آن در ماهی ها گردیده، بر همین اساس وزن، طول کل، شاخص وضعیت و نرخ رشد ویژه در ماهیان در معرض فلز، نسبت به گروه کنترل کاهش و ضریب تبدیل غذایی افزایش قابل توجهی را نشان می دهد. در مورد پارامترهای بیوشیمیایی سرم مشخص شد که روی و کبالت هر دو سبب افزایش معنی دار سطح گلوکز سرم گشته اند. در حالی که فعالیت آنزیم های آسپارتات ترانس آمیناز، آلانین ترانس آمیناز و آلکالین فسفاتاز سرم، در ابتدا افزایش معنی دار و سپس کاهش معنی دار را نشان می دهد. با این که ماهی های در معرض روی و کبالت هر دو مقادیر تری گلیسرید کمتری را در روز 15در مقایسه با گروه کنترل، نشان می دهند، سطوح کلسترول در ماهیان تیمار با روی در روز 15، افزایش، و در ماهیان تیمار با کبالت کاهش معنی دار را نشان داد. سطوح پروتئین کل نیز در ماهیان تیمار با روی در مقایسه با گروه کنترل، در روز 15 کاهش، و در ماهیان تیمار با کبالت پس از افزایش معنی دار در روز اول، کاهش شدید را در روز 15 نشان می دهند. مقادیر گلوکز، کلسترول و آلکالین فسفاتاز در تیمار های روی در روز 30 نیز افزایش یافته اند اما بقیه نتایج به دست آمده شامل یک پیک افزایشی یا کاهشی به صورت گذرا بود به طوری که در روز 30 برگشت به حالت اولیه و رسیدن به سطحی مشابه با گروه کنترل دیده می شود. این بررسی نشان می دهد که غلظت های زیر حد کشندگی روی و کبالت دارای اثرات توکسیک بر فیزیولوژی، متابولیسم و کالبد شناسی ماهی قزل آلای رنگین کمان هستند.

چکیده: پروتئین های کوچک اغلب به منظور ایجاد کمپلکس و مطالعه بر هم کنش با سورفکتانتها مورد استفاده قرار می گیرند. لیزوزیم آنزیمی کروی کوچک و فشرده با 129 اسید آمینه می باشد، که دارای 4 پیوند دی سولفید و 6 اسید آمینه تریپتوفان است ا ز این رو برای مطالعات طیف سنجی و طیف سنجی فلورسانس مناسب میباشد. در این تحقیق دگرگون سازی لیزوزیم توسط ترکیبات مختلف شامل سدیم دودسیل سولفات، سدیم اکتیل سولفات، ستیل تری متیل آمونیوم بروماید، دو دسیل تری متیل آمونیوم بروماید، اسپرمین، اوره، گوانیدین هیدرو کلراید و نانو ذرات tio2و sio2 در شرایط فیزیکی مختلف از نظر دما و phدر بافرهای مختلف توسط دستگاه های اسپکتروفتومتر و اسپکتروفلوریمتر مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این تحقیق نشان داد که tm آنزیم طبیعی در کلیه phهای مورد بررسی بالاتر از k 373 و به عبارت دیگر 100 درجه سانتی گراد است که دلیل اصلی این امر ناشی از 4پیوند دی سولفید موجود در ساختمان طبیعی آنزیم است. در حضور sds و sos به عنوان دو سورفکتانت با بار منفی tm آنزیم بشدت کاهش میابد و با افزایش غلظتsds و sos دمای tmآنزیم کمتر می شود. همچنین با افزایش غلظتsds و sos میزان جذب آنزیم و نشر آنزیم افزایش می یابد. در حضور ctab و dtab بعنوان دو سورفکتانت با بار مثبت tm آنزیم کاهش می یابد و از طرفی با افزایش میزان غلظت ctab و dtab میزان tm آنزیم افزایش می یابد. از طرفی ctab باعث افزایش میزان نشر ولی dtab کاهش نشر می شود. اسپرمین بعنوان یک پلی آمین tm آنزیم را کاهش می دهد این در حالی است که نشر آنزیم با افزایش غلظت اسپرمین افزایش می یابد. اوره باعث کاهش tm و همچنین کاهش نشر می شود. گوانیدین هیدروکلراید باعث کاهش tm و افزایش میزان نشر می شود. نانو ذرات tio2و sio2 باعث افزایش میزان جذب آنزیم، کاهش tm آنزیم و افزایش نشر آنزیم می شوند. کلمات کلیدی: سدیم دودسیل سولفات، سدیم اکتیل سولفات، ستیل تری متیل آمونیوم بروماید، دو دسیل تری متیل آمونیوم بروماید، اسپرمین، اوره، گوانیدین هیدرو کلراید و نانو ذرات tio2و sio2

ریبونوکلئازa پانکراس گاو (ec: 3. 1. 27. 5) یک پروتئین کوچک منومر می باشد. این آنزیم دارای 124 اسید آمینه بوده و ریبونوکلئازa فاقد اسید آمینه تریپتوفان می باشد. وزن مولکولی آن معادل 7/13 کیلو دالتون می باشد. ساختارهای دوم غالب آن شامل چهار رشته از صفحات بتا ضد موازی بلند و سه هلیکس آلفا کوتاه. ریبونوکلئاز a برش rna تک رشته ای را در انتهای p-o5 نوکلئوتیدهای پیریمیدینی کاتالیز می نماید. سه ریشه لیزین41، هیستیدین12 و هیستیدین119 نقش مهمی را در کاتالیز ریبونوکلئازa بازی می کنند. tmآنزیم ریبونوکلئاز aبه عنوان شاخص پایداری گرمایی با استفاده از تکنیک اسپکتروفتومتری در حضور دگرگون کننده های مختلف شامل سدیم دو دسیل سولفات(sds) ، ستیل تری متیل آمونیوم برماید )‍(ctab، دودسیل تری متیل آمونیوم برماید(dtab) ، گلیسرول، بوتانول و 1-4 بوتاندیول، گوانیدین هیدروکلراید، اوره و نانوذره sio2 در دو 3/3 و 5/1=ph مورد بررسی قرار گرفت. تغییرات شدت نشر فلورسانس آنزیم ریبونوکلئاز aدر مقابل غلظت های مختلف دگرگون کننده هایsds ، ‍ctab، dtab، بوتانول گوانیدین هیدروکلراید و اوره در دماهای مختلف و در دو 3/3 و 5/1=ph با استفاده از تکنیک اسپکتروفلوریمتری مطالعه شد.

انتخاب یون مس به این واسطه میباشد که در صنعت تولید گوشت برای شناسایی گوشتهای آلوده به بیماری جنون گاوی از این آنزیم استفاده میشود. در این بیماری پروتئین بیماری زا به فلز مس بیشتری متصل میشود و بحثی که وجود دارد این است که آیا این فلز مس باعث پایداری این پروتئین در برابر آنزیم میشود و یا اینکه این فلز آنزیم را مهار میکند و مانع از فعالیت آنزیم میشود. و برای مقایسه میزان و نوع مهار آنزیم توسط یونهای مس و نانو ذرات اکسید مس از نانو ذرات اکسید مسهم استفاده شد. و از طرف دیگر نبود k همانطور که اشاره شد از یک طرف به خاطر کاربردهای زیاد آنزیم پروتئیناز مطالعات پایداری و سینتیکی بر روی این آنزیم در حضور شویندههای مختلف برای این مطالعه از این آنزیم ستیل تری متیل ،(sds) دودسیل سولفات -n استفاده شده است. در این مطالعه از شویندههایی نظیر سدیم استفاده شده است. (dtab) دودسیل تری متیل آمونیوم بروماید -n و (ctab) آمونیوم بروماید

پراکسیداز ها (e.c. 1.11.1.7) گروهی از اکسیدوردوکتازها هستند که احیای پراکسید ها را کاتالیز می کنند. پراکسیداز ها به طور وسیعی در بیوشیمی بالینی و آزمایشات ایمنی شناسی استفاده می شوند. ایزو آنزیم c پراکسیداز ترب کوهی (hrpc) یکی از بهترین پراکسیداز های شناخته شده است. ساختار این آنزیم به طور غالب دارای مارپیچ آلفا است. این آنزیم یک تریپتوفان دارد که فلورسانس آن توسط گروه هم موجود در آنزیم فرونشانده می شود. تغییر در کونفورماسیون پروتئین به نحوی که محیط تریپتوفان، بویژه فاصله آن از گروه هم را تحت تاثیر قرار بدهد، فرونشانی را تغییر خواهد داد. در این مطالعه تغییر کونفورماسیون ایجاد شده توسط یون های نیکل و کادمیوم و نانو ذرات اکسید نیکل و تلوراید کادمیوم، و پایداری حرارتی پراکسیداز ترب کوهی در حضور این عوامل در دماهای مختلف توسط تکنیک های اسپکتروفتومتری و اسپکتروفلوریمتری بررسی شد. اتصال نیکل، کادمیوم و نانو ذرات اکسید نیکل و تلوراید کادمیوم به آنزیم با مطالعات اسپکتروفتومتری از طریق نشان دادن اثر آن ها بر روی باند جذبی سورت آنزیم در 404 نانومتر بررسی شد. اطلاعات تغییرات ساختار سوم از طریق تغییرات حاصله در جذب 275 نانومتر در مقابل غلظت این عوامل به دست آمد. طیف نشری فلورسانس بعد از برانگیختگی در 297 نانومتر و انکوباسیون های مقدماتی 5، 15 و 30 دقیقه ای آنزیم با یون های نیکل و کادمیوم در دماهای مختلف به دست آمد. در هر دما، شدت فلورسانس با افزایش غلظت این یون ها و زمان انکوباسیون افزایش یافت. در دماهای بالاتر و زمان های انکوباسیون طولانی تر، نشر بیشترین شدت را داشت. همچنین سینتیک این آنزیم در حضور یون های نیکل و کادمیوم و نانو ذرات اکسید نیکل و تلوراید کادمیوم در دماهای مختلف بررسی شد. در این مطالعه پراکسید هیدروژن سوبسترای متغیر بود و غلظت ارتو- دی آنیزیدین ثابت نگه داشته شد. در حضور نیکل، مهار غیر رقابتی در غلظت های کم و مهار مخلوط در غلظت های بالاتر دیده شد. با افزایش دما نه تنها مهار شدیدتر می شود بلکه نوع مهار نیز در غلظت های کمتر نیکل عوض می شود. تحریک فعالیت آنزیم نیز در حضور نیکل در غلظت های پایین تر دیده شد (2، 6 و 12 میلی مولار در 25 درجه سانتی گراد، 2 و 6 میلی مولار در 35 درجه سانتی گراد و 2 میلی مولار در 45 درجه سانتی گراد). نمودار های لینویور- برک در غلظت های مختلف کادمیوم و دماهای مختلف، خطی و موازی بود که نشان می دهد کادمیوم یک مهار کننده نا رقابتی پراکسید هیدروژن است. در حضور نانوذره اکسید نیکل، غلظت های کمتر (تا 0.05 میلی مولار) فعالیت آنزیم را به صورت غیر رقابتی مهار کردند، اما غلظت های بالاتر (تا 0.5 میلی مولار) ان را تحریک کردند، که ممکن است این اثر به خاطر به دست آوردن انعطاف پذیری بیشتر تحت این شرایط باشد. تمامی غلظت های نانو ذرات تلوراید کادمیوم فعالیت آنزیم را در دماهای 25 و 35 درجه سانتی گراد تحریک کردند و غلظت های پایین تر اثر گذارتر بودند. مهار غیر رقابتی غلظت های 0.1 و 0.5 میلی مولار این نانو ذرات در دمای 45 درجه سانتی گراد مشاهده شد. در این مطالعه ما با تکمیل مطالعات قبلی، نشان دادیم که رفتار این فلزات سنگین و روی ساختار و سینتیک آنزیم پراکسیداز ترب کوهی نه تنها وابسته به غلظت و زمان انکوباسیون است بلکه دما نیز این روند را تحت تاثیر قرار می دهد. بعلاوه اثر نانو ذرات اکسید نیکل و تلوراید کادمیوم در این زمینه قبلا گزارش نشده بود و مطالعه ای جدید می باشد. در این مطالعات مشاهده شد که نانو ذرات اکسید نیکل و تلوراید کادمیوم بخاطر ویژگی های خاص خود مهار متفاوتی را نسبت به یون های نیکل و کادمیوم دارند. بنابراین اتصال این نانوذرات نیز به پراکسیداز ترب کوهی وابسته به غلظت و زمان انکوباسیون بوده و دما نیز آن را تحت تاثیر قرار می دهد.

لیزوزیم ها، اندواستیل مورامیدازهایی هستند که در انواع موجودات زنده، یافت می شوند. دو نوع مختلف لیزوزیم- لیزوزیم نوع c و نوع g- در سفیده ی تخم پرندگان وجود دارد. لیزوزیم های نوع c، قادر به تخریب دیواره سلولی باکتری های گرم مثبت می باشند، بنابراین، در صنعت، از این نوع لیزوزیم، به منظور نگهدارنده های غذایی استفاده می شود. آنزیم لیزوزیم سفیده ی تخم مرغ (نوع c)، بهترین مدل برای مطالعه ی تاخوردگی پروتئین است. این آنزیم، یک پروتئین حلقوی کوچک می باشد که 129 آمینو اسید دارد و شامل دو دومین آلفا و بتا است. جایگاه فعال آنزیم در شکاف بین این دو دومین قرار دارد. همچنین وجود 6 آمینو اسید تریپتوفان و 3 آمینو اسید تیروزین در لیزوزیم، این آنزیم را برای مطالعات فلورسانس مساعد کرده است. در این مطالعه، اثر سدیم دو دسیل سولفات (sds)، ستیل تری متیل آمونیوم بروماید (ctab)، اتیلن گلیکول، نانوذره ی نیمه رسانای کادمیوم تلوراید و نانوذره ی مغناطیسی اکسید آهن، بر فعالیت آنزیم لیزوزیم، در دمای 35 درجه سانتی گراد و 25/7ph= (بافر فسفات سدیم)، به کمک دستگاه اسپکتروفتومتر uv-vis مورد بررسی قرار گرفته است. سوبسترای استفاده شده در این آزمایش، باکتری میکروکوکوس لیزودیکتیکوس می باشد. نتایج، نشان می دهند که با افزایش غلظت ctab و sds، سرعت لیز باکتری میکروکوکوس لیزودیکتیکوس (مقدار vmax) کاهش می یابد. نتایج همچنین نشان داده اند که فعالیت آنزیم لیزوزیم، در حضور اتیلن گلیکول و نانوذره ی کادمیوم تلوراید، کم می شود. در مقابل، فعالیت این آنزیم، در حضور نانوذره ی اکسید آهن، افزایش می یابد. از طرف دیگر، تغییرات ساختاری آنزیم لیزوزیم، در حضور نانوذره ی اکسید آهن، نانوذره ی کادمیوم تلوراید و اتیلن گلیکول، با استفاده از تکنیک های اسپکتروفتومتری و اسپکتروفلوریمتری، بررسی شده اند. در این آزمایشات، مشخص شده است که با افزایش این مواد، شدت نشر فلورسانس، کاهش پیدا می کند. همچنین، مشخص شده است که درحضور اتیلن گلیکول، میزان tm آنزیم لیزوزیم، کم می شود. این در حالی است کهنانوذرات اکسید آهن و کادمیوم تلوراید، باعث افزایش tm لیزوزیم می گردند. کلمات کلیدی: لیزوزیم، سدیم دو دسیل سولفات، ستیل تری متیل آمونیوم بروماید، نانو ذره ی کادمیوم تلوراید، نانوذره ی اکسید آهن، اسپکتروفتومتری، فعالیت، پروتئین.

اشرشیاکلای یکی از رایج ترین پاتوژن های ایجاد کننده عفونت های ادراری است. ایجاد مقاومت آنتی بیوتیکی در اشرشیاکلای به صورت یک مشکل جدی در درمان این بیماریها در آمده است. بیش بیان سیستم انتشار به خارج acrab-tolc به عنوان عامل مهم ایجاد مقاومت اشرشیاکلای به چندین آنتی بیوتیک گزارش شده است. بیان این کمپلکس به صورت نرمال توسط acrr در یک سطح پایین نگه داشته می شود. در این تحقیق اهداف، بررسی احتمال حضور موتاسیون در ژن acrr و همچنین بررسی بیان ژن acra در موتان های gyra مقاوم به سیپروفلوکساسین در اشرشیاکلای بود. برای این منظور حضور جهش های احتمالی در ژن acrr و بیان ژن acra به ترتیب توسط تکنیک های pcr و real time- pcr در 5 موتان gyra با mic های متفاوت برای سیپروفلوکساسین بررسی شد. نتایج نشان داد که سویه های موتان در ژن acrr جهشی نداشتند و هیچگونه اختلاف معنی داری بین دو گروه (موتان و کنترل mg1655) از نظر بیان ژن acra یافت نشد. بنابراین سطح پایین و متوسط مقاومت به سیپروفلوکساسین باعث افزایش بیان اپرون acrab نمی شود.

غشای خارجی باکتری های گرم منفی دارای پروتئین های مهمی مانند ompf و ompc می باشد. پورین ompf به عنوان کانال پروتئینی غیر اختصاصی برای ورود مواد غذایی و ترکیبات مختلف مانند آنتی بیوتیک ها به درون سلول عمل می کند و بیان آن در پاسخ به فاکتورهای استرسی مانند حضور آنتی بیوتیک و عوامل محیطی نظیر تغییر فشار اسمزی و دما تنظیم می شود. جذب بتالاکتام ها و فلوروکینولون هایی مانند سیپروفلوکساسین از طریق ompf به داخل سلول باکتریایی رخ می دهد، بنابراین تنظیم بیان ژن ompf به عنوان یکی از مکانیسم های موثر در مقاومت آنتی-بیوتیکی مورد توجه دانشمندان است. بیان این ژن در سطح ترجمه توسط rna آنتی سنس micf مهار می شود. بیان ژن micf توسط فعال کننده mara در پاسخ به آنتی بیوتیک های مختلف مانند فلوروکینولون ها القا شده و منجر به کاهش تولید پورین ompf و افزایش ناپایداری mrna ی آن می گردد. اهداف این تحقیق بررسی حضور موتاسیون احتمالی در ژن micf در نمونه های موتان gyra و موتان مضاعف gyra-marr و همچنین سنجش کمّی بیان ژن ompf در موتان های فوق الذکر نسبت به تیپ وحشی mg1655 ، سویه کنترل، با روش real time pcr می باشد. برای این منظور، 5 نمونه موتان با mic های متفاوت برای سیپروفلوکساسین و تتراسیکلین ارزیابی شد. بررسی نتایج حاصل از تعیین توالی ژن micf نشان داد که موتاسیون در این ژن وجود ندارد. بنابراین اطمینان حاصل شد که بیانompf در این نمونه ها بطور غیر مستقیم تحت کنترل mara می باشد. آنالیز آماری نتایج حاصل از واکنش real time pcr، اختلاف معنی داری را بین میزان بیان ompf در موتان ها و تیپ وحشی نشان نداد. به طور کلی می توان گفت فعالیت پورین ompf در مقاومت به سیپروفلوکساسین و ایجاد فنوتیپ mdr در این موتان ها موثر نمی باشد.

پروتئین آلفا1- آنتی تریپسین عضو اصلی ابر خانواده مهار کننده های سرین پروتئاز ( سرپین) است. این پروتئین شامل 394 اسیدامینه است که از سه صفحه بتا و نه مارپیچ آلفا تشکیل شده است. نقش اصلی آن مهار فعالیت پروتئازها است. اطلاعات مربوط به ساختار این پروتئین از این جهت مهم است که می تواند زمینه ساز فهم علت عملکرد نادرست آنتی تریپسین و دیگر سرپین ها باشد. عوامل مختلف ژنتیکی و محیطی از قبیل دما و ph و دگرگون کننده های شیمیایی بر ساختار پروتئین می توانند اثر بگذارند. در این مطالعه با دو روش تجربی و نظری به بررسی تغییرات ساختاری این پروتئین در شرایط مختلف دگرگونی پرداخته شد. در این بخش اثر دما، دگرگون کننده های شیمیایی اوره و گوانیدین هیدروکلراید، یون سیترات و نیز اثر ph های مختلف ( phهای 2/5، 4، 6/5، 7 و 7/8 ) بر نشر فلورسانس بررسی شد. نتایج نشان داد که دما، اوره، گوانیدین هیدروکلراید و ph اسیدی باعث تغییرات معنی داری در شدت نشر فلورسانس شدند در حالی که یون سیترات تغییر مشخصی در شدت نشر فلورسانس ایجاد نکرد. هم چنین با استفاده از شبیه سازی دینامیک مولکولی ( با استفاده از برنامه گرومکس 4.5.3) اثر دما ( 300، 318، 338، 358 و 500 درجه کلوین) اثر ( ph (2.5 ,7 و اثر اوره ( غلظت صفر و چهار مولار) بر ساختار پروتئین بررسی شد. نتایج حاصل از شبیه سازی نشان داد که در دمای 300 تا 358 درجه کلوین تغییر ساختاری مشخصی در پروتئین به وجود نیامده ( بنابر این در این دماها به زمان بیشتری (بیشتر از 20 نانوثانیه) برای شبیه سازی نیاز داریم) در حالی که در دمای 500 درجه کلوین تغییرات مشخصی در ساختار پروتئین مشاهده شد. هم چنین ph اسیدی و نیز اوره 4 مولار تغییرات ساختاری مشخصی را در پروتئین ایجاد کردند.

در این مطالعه اثر عوامل دناتوره کننده و حلال های الکلی و نانوذرات nio و tio2 بر فعالیت و ساختمان آنزیم تریپسین مطالعه شده است. نتایج نشان می دهند که فعالیت تریپسین در حضور سدیم دودسیل سولفات کاهش پیدا کرده است. نشر تریپسین در حضور سدیم دودسیل سولفات کاهش پیدا کرده است. فعالیت آنزیم تریپسین در حضور اوره و گوانیدین هیدروکلرید کاهش پیدا کرده است و شدت نشر تریپسین افزایش پیدا کرده است. در حضور محلول های 1-4-دی اکسان و دی متیل سولفوکسید فعالیت آنزیم تریپسین کاهش پیدا کرده است و طیف نشری تریپسین افزایش پیدا کرده است. فعالیت تریپسین در حلال های 1-4-دی اکسان و دی متیل سولفوکسید در حضور کلسیم کاهش پیدا نکرده است. فعالیت تریپسین در حضور نانوذره tio2 کاهش پیدا کرده است و طیف نشری تریپسین در 0/3 ph= افزایش و در 25/7 ph= کاهش پیدا کرده است. فعالیت تریپسین در حضور نانوذره nio افزایش پیدا کرده است و شدت نشر تریپسین کاهش پیدا کرده است

آنزیم کاتالاز یک هموپروتئین بسیار فعال است که در اکثر موجودات دارای تنفس هوازی وجود دارد. این آنزیم هیدروژن پراکساید (h2o2) را بدون ایجاد رادیکال های آزاد به آب و اکسیژن تبدیل می کند، بنابراین می تواند سلول ها را از اثرات سمی h2o2 محافظت کند. کاتالاز کبدی گاو هموتترامری با وزن ملکولی 243 کیلو دالتون و دارای 84 رزیدوی تیروزین و 24 رزیدوی تریپتوفان است که هر منومر آن شامل یک گروه هم می باشد. در این مطالعه اثر اوره، گوانیدین هیدروکلراید، کلرید نیکل، سولفات مس، اتانول، متانول و نانوذرات اکسید مس، اکسید نیکل و اکسید تیتانیوم بر سینتیک آنزیم کاتالاز، توسط دستگاه اسپکتروفتومتر uv-vis در دمای 25 درجه سانتی گراد و 7=ph (بافر فسفات سدیم و tris-hcl) مورد بررسی قرار گرفته است. نتایج حاصل نشان دهنده ی نقش دگرگون کنندگی اوره و گوانیدین هیدروکلراید بر ساختار آنزیم و در نتیجه کاهش فعالیت کاتالیتیکی کاتالاز است. همچنین نتایج حاصل از مطالعات سینتیکی بیانگر عملکرد مهار کنندگی مخلوط کلرید نیکل و سولفات مس بر فعالیت آنزیم کاتالاز است. نانوذره ی اکسید مس سبب افزایش جزئی فعالیت آنزیم می شود این درحالی است که نانوذره ی اکسید نیکل به عنوان یک فعال کننده ی قوی سبب افزایش چشم گیر فعالیت آنزیم شده است. از طرفی نانوذره ی اکسید تیتانیوم سبب کاهش فعالیت آنزیم می شود. مطالعات انجام شده موید عمل کرد اتانول و متانول به عنوان مهار کنندگان رقابتی برای کاتالاز می باشد.

پروتئین ها در دمای بالا، متمایل به تشکیل تجمعات ناخواسته و غیر کنترل شده می باشند. تجمع پروتئینی یکی از مسائل مهم مرتبط با پروتئین ها در زمینه های بیولوژیکی و پزشکی می باشد. این تحقیق اثرات نانو ذرات tio2 و sio2، اوره، گوانیدین هیدروکلراید و اسپرمین را روی دوباره تاخوردگی و فعال سازی آنزیم لیزوزیم، به عنوان یک آنزیم کروی فشرده بررسی می کند. لیزوزیم سفیده تخم مرغ، به عنوان مدل پروتئینی به کار گرفته شد؛ زیرا مکانیسم های اشتباه تاخوردگی و دوباره تاخوردگی آن ها به طور چشمگیر مورد بررسی قرار گرفته است. در حضور اسپرمین، حتی در غلظت های فوق العاده کم (mm)، این ترکیب، بعد از تیمار حرارتی در 98 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه، هیچ رسوب یا تجمعی مشاهده نشد. درحالی که با افزایش ترکیب گوانیدین هیدروکلراید از 0 تا 1.5 مولار، تجمع لیزوزیم از 60 درصد به 10 درصد کاهش یافت؛ اما با افزایش اوره، میزان تجمع در حدود 60 درصد ثابت باقی ماند. در حضور نانوذرات tio2 و sio2 نه تنها تجمع مشاهده شد بلکه میزان آن نیز افزایش یافت. فعالیت باقی مانده آنزیم تجمع یافته برای اسپرمین، حدود 50 درصد بود، درحالی که برای دیگر افزودنی های فوق کمتر از 10 درصد باقی ماند. دمای دگرگون سازی حرارتی (tm) آنزیم تجمع یافته لیزوزیم در حضور اسپرمین و اوره با افزایش غلظت آن ها افزایش یافت. این میزان برای گوانیدین هیدروکلراید و نانوذرات tio2 و sio2 با افزایش غلظت این افزودنی ها کاهش یافت. حائز-اهمیت است که بدانیم tm لیزوزیم تجمع یافته در حضور یا عدم حضور تمامی افزودنی های فوق، بسیار پایین تر از آنزیم طبیعی است. به عبارت دیگر، tm آنزیم طبیعی بالای 100 درجه سانتی گراد یا 373 کلوین می باشد که دلیل اصلی آن ناشی از 4 پیوند دی سولفیدی موجود در ساختمان طبیعی آنزیم است.

پروتئینازk (3.4.21.14ec ) یک اندوپپتیداز خارج سلولی است که به وسیله قارچ tritirachum album limber ترشح می شود و متعلق به رده سرین اندوپپتیداز هاست. این آنزیم دارای 279 اسید آمینه است. در جایگاه فعال این آنزیم سه اسید آمینه 39asp ، 69his و224 ser وجود دارد. پروتئیناز k تک زنجیره ای با وزن مولکولی 9/28 کیلو دالتون می باشد. این آنزیم در ph 3 تا 11 بسیار پایدار و فعال است. نقطه ایزوالکتریک این آنزیم 9/8 و ph بهینه آن 12-5/7 می باشد. در این مطالعه اثر اوره، گوانیدین هیدروکلراید، اتانول، متانول، ایزو پروپانول، نانوذرات اکسید نیکل و اکسید تیتانیوم بر سینتیک آنزیم پروتئیناز k، توسط دستگاه اسپکتروفتومتر uv-vis در دمای 40 درجه سانتی گراد و 4/7=ph (بافر فسفات سدیم) مورد بررسی قرار گرفته است. نتایج حاصل نشان دهنده ی نقش دگرگون کنندگی گوانیدین هیدروکلراید بر ساختار آنزیم است. در حضور گوانیدین هیدروکلراید فعالیت کاتالیتیکی پروتئینازk کاهش می یابد. فعالیت پروتئینازk در غلطت های پائین اوره کاهش می یابد ولی در غلظت های بالای اوره فعالیت آنزیم افزایش می یابد. نانوذرات اکسید تیتانیوم و اکسید نیکل به عنوان یک فعال کننده سبب افزایش فعالیت آنزیم شده-اند. حلال های آلی، اتانول، متانول و ایزو پروپانول در درصد های پائین باعث افزایش فعالیت آنزیم شدند ولی با افزایش درصد این حلال ها فعالیت آنزیم کاهش می یابد.

مطالعه در زمینه پروتئوم انسانی جهت تشخیص بیومارکرهای بیماری¬ها به دلیل پتانسیل دارو¬ سازی بسیار مورد توجه است. بسیاری از این پروتئین¬ها غلظت کمی در پلاسما دارند و به همین دلیل آشکار کردن و شناسایی آن¬ها سخت است. این تکنولوژی به دلیل وجود پروتئین¬های پرحجمی نظیر آلبومین و ایمونوگلبولین محدود شده است چرا که این پروتئین¬های سنگین باعث پوشیده شدن و یا کاهش حساسیت آشکارسازی بسیاری از پروتئین¬های کوچک با غلظت پایین می¬شوند. علاوه بر این الگوی وسیع پراکندگی این دو پروتئین روی ژل¬های دو بعدی الکتروفورز باعث دشواری تشخیص پروتئین¬های با ph ایزوالکترویک و یا وزن مولکولی مشابه می¬شود. در میان پروتئین¬هایی که بیشترین فراوانی را دارند، آلبومین، ترنسفرین، ایمونوگلوبین، 85% کل پروتئین¬ها را تشکیل می¬دهند. اما از آنجا که pi زنجیره سنگین lgg بالای بازه متداول pi مورد استفاده در الکتروفورز دو بعدی است، مشکل اصلی در تشخیص بیومارکرها، وجود آلبومین است. لذا یافتن روشی مناسب برای حذف آلبومین همواره مورد توجه بوده است. روشی که اولا، آلبومین را به صورت اختصاصی و بدون حذف پروتئین¬های همراهش برداشت کند؛ ثانیا، آلبومین را با راندمان بالا و به صورت کارآمد حذف کند؛ ثالثا، مقرون به صرفه و به کارگیری آن آسان باشد تا در آزمایشگاه¬های تشخیص طبی به سهولت بتوان از آن استفاده کرد. به نظر می¬رسد روشی که چن(chen) و همکارانش بر مبنای رسوبدهی با 10% tca در استون مطرح کردند می¬تواند تا حد زیادی موارد بالا را تامین کند، اما با اینکه حذف آلبومین بر مبنای استفاده از 10% tca در استون روش مناسبی به نظر می¬رسد اما هنوز مقداری آلبومین را باقی می¬گذارد. در این پایان نامه سعی شد که با گزارش کردن پارامترهای جدیدی شامل امگا و دلتا توضیح تئورتیکی برای روش¬های رسوبدهی مبتنی بر tca در حلال آلی ارائه شود و با توجه به آن، تلاش¬هایی در زمینه بهبود این روش بر مبنای بعضی خصوصیات فیزیکوشیمیایی منحصر به فرد آلبومین، قطبیت حلال، دفعات رسوبدهی، دما و درصد¬های مختلفی ازtca انجام شد و در نهایت چهار حجم از حلال آلی اتانول همراه با 20% tcaبه عنوان نقطه¬ی اپتیمم که در آن حذف آلبومین در حداکثر مقدار ممکن است معرفی گردید. برای دستیابی به اهداف مدنظر این تحقیق ، از روش¬ها و نرم افزار¬های متنوعی شامل الکتروفورز یک بعدی، نرم افزار phoretix 1d، design expert و... استفاده گردیده است.

به منظور کاهش، جلوگیری از رشد و یا مهار اجرام بیماری زا و عوامل فساد مواد غذایی تحقیقات فراوانی در جهت یافتن نگهدارنده های طبیعی صورت گرفته و در حال حاضر نیز در حال انجام است. این مطالعه به منظور بررسی mic و mbc لیزوزیم و نایسین بر باکتری های اشریشیا کلای، لیستریا مونوسایتوژنز، استافیلوکوکوس ارئوس و سالمونلا تایفی موریوم و همچنین تأثیر غلظت های این ترکیبات بر میزان رشد باکتری های فوق انجام گرفته است. در این مطالعه غلظت های مختلف لیزوزیم و نایسین به صورت تنها و توأم (صفر، 53/19، 06/39، 13/78، 25/156، 5/312، 625، 1250، 2500، 5000 µg/ml) در محیط کشت tsb که در شش ph ، 5/5، 6، 5/6، 7، 5/7 و 8 تنظیم شده بود، به روش میکرودایلوشن و در دمای 24 درجه سانتی گراد و قرائت اثر ترکیبات بر روی میزان رشد باکتری ها با استفاده از دستگاه الیزا ریدر انجام شد. در بین چهار باکتری مذکور لیزوزیم کمترین تأثیر را بر باکتری اشریشیاکلای و بیشترین تأثیر را بر باکتری استافیلوکوکوس ارئوس داشت. تأثیر توأم این دو ماده بر روی لیستریا مونوسایتوژنز از بقیه کمتر و تأثیر توأم بر روی استافیلوکوکوس ارئوس از همه بیشتر بود. کمترین تأثیر نایسین در بین چهار باکتری نام برده بر روی لیستریا مونوسایتژنز و بهترین عملکرد را نایسین بر روی باکتری استافیلوکوکوس ارئوس داشت. در مورد چهار باکتری مذکور، استفاده توأم لیزوزیم و نایسین در ph های پایین موجب کاهش mic شد.

پراکسیدازها (ec.1.11.1.7) گروهی از آنزیم های اکسید و ردوکتازها هستندکه توسط تعدادی از میکروارگانیسم ها وگیاهان تولید می شوند و احیای پراکسیدها را کاتالیز می کنند . پراکسیدازها به طور وسیعی در بیوشیمی بالینی و آزمایشات ایمنی شناسی آنزیمی استفاده می شوند. ایزوآنزیم c پراکسیداز ترب کوهی (hrpc) یکی از بهترین پراکسیدازهای شناخته شده است ساختار این آنزیم به طور غالب دارای مارپیچ آلفا است. مطالعات سینتیکی آنزیم پراکسیداز با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر uv-vis مدل فارماسیا - 4000 مجهز به سیستم کنترل الکترونیکی در دمای oc 35 و oc 45 و در 4 ph و درحضور اتانول ، بوتاندیول ، پروپانول ، بوتانول ، گلیسرول ، یون های آهن و مس ، نانو ذرات اکسید آهن و اکسید مس انجام گرفت. بررسی پارامترهای سینتیکی نشان می دهند که این حلال های آلی باعث افزایش سرعت ماکسیمم (vmax ) و فعالیت آنزیم پراکسیداز می شوند. یون های آهن و مس و نانو ذرات اکسید آهن و اکسید مس باعث کاهش سرعت ماکسیمم (vmax ) و فعالیت آنزیم پراکسیداز می شوند. حدس زده می شود ، نانو ذرات اکسید آهن و اکسید مس از طریق برهم کنش های هیدروژنی سبب تغییر ساختار جایگاه فعال پراکسیداز شده و به این طریق منجر به کاهش فعالیت آنزیم شده اند.

در سال های اخیر در جوامع شهری درصد قابل توجهی از انسان ها غذای مصرفی خود را به صورت آماده یا فرآوری شده مصرف می کنند درنتیجه نیاز به نگهداری کیفیت غذا و جلوگیری از رشد و جمعیت باکتری ها مهم است. از سوی دیگر استفاده بیش ازحد مواد نگه دارنده شیمیایی سبب افزایش نگرانی مصرف کنندگان شده و این موضوع خود را در صنعت غذا نیز بازتاب داده است. این مطالعه به منظور بررسی تأثیر غلظت های لیزوزیم و اسید آسکوربیک بر باکتری های listeria monocytogenes و escherichia coli و همچنین تعیینmic و mbc این ترکیبات بر میزان رشد باکتری های فوق انجام گرفته است. در این مطالعه غلظت های مختلف آسکوربیک اسید و لیزوزیم به صورت تنها و توأم (صفر ، 53/19 ، 06/39 ، 13/78 ، 25/156 ، 5/312 ، 625 ، 1250 ، 2500 ، 5000 میکروگرم در میلی لیتر ) در محیط کشت tsb که در پنج ph 5، 5/5 ، 6 ، 5/6 و 7 تنظیم شده بود، به روش میکرودایلوشن و در دمای 24 درجه سانتی گراد و قرائت اثر این ترکیبات بر روی میزان رشد باکتری ها با استفاده از دستگاه الیزا ریدر انجام شد. در بین دو باکتری ذکرشده لیزوزیم کمترین تأثیر را بر باکتری اشریشیا کلای و بیشترین تأثیر را بر باکتری لیستریا مونوسیتوژنز داشت. تأثیر توأم این دو ماده بر روی لیستریا مونوسیتوژنز از اشریشیا کلای بیشتر بود. بهترین تأثیر آسکوربیک اسید بر روی لیستریا مونوسیتوژنز و کمترین تأثیر آن بر روی اشریشیا کلای بود. در مورد این دو باکتری، استفاده توأم لیزوزیم و آسکوربیک اسید در ph پایین موجب کاهش mic شد

آنزیم پروتئینازk (3.4.21.14)ec جزء خانواده سرین پروتئینازها میباشد که توسط قارچ tritirachum album limber تولید شده و این ارگانیسم را قادر میسازد کراتین را تجزیه و آن را به عنوان منبعی از قند و نیتروژن استفاده کند. این آنزیم دارای 279 اسیدآمینه و به صورت پلیپپتید تکرشتهای است. در جایگاه فعال این آنزیم 224ser، 69 hisو39 aspقرار دارد که هیستیدین و آسپارتات توسط یک باند هیدروژنی کوتاه به هم وصل میشوند. این آنزیم برش در سوبسترا را از ناحیه کربوکسیلیک، اسیدهای آمینه آلیفاتیک و آروماتیک انجام میدهد که این برش بیشتر بین اسیدآمینههای فنیلآلانین و آلانین رخ میدهد. اکثر مطالعاتی که بر روی آنزیم پروتئیناز k صورت گرفته، مطالعات ساختاری بوده است. این مطالعات منجر به تعیین توالی اسیدآمینه و خصوصیات کلی آنزیم شده است. با توجه به پایداری بالای این آنزیم در دمای بالا و همچنین فعال ماندن در ph های مختلف (10- 3) در مطالعات مربوط به پروتئینها از این آنزیم استفاده میشود. مطالعات سینتیکی آنزیم پروتئینازk، توسط دستگاه اسپکتروفتومترuv-vis و در دمای 40 درجه سانتی گراد، 7ph= (بافرفسفات) و در حضور غلظت های مختلف بوتانول، 1و4 بوتاندیول، اسپرمین، پوترسین، اکسید روی و نانوذرات اکسید آهن، اکسید روی و اکسید سیلیسیوم مورد بررسی قرار گرفته است. نتایج حاصل نشان میدهد که در حضور حلالهای آلی بوتانول و 1و4 بوتاندیول فعالیت آنزیم افزایش مییابد. اکسید روی و نانوذرات اکسید آهن، اکسید روی و اکسید سیلیسیوم بر روی آنزیم اثر مهاری دارند. پوترسین و اسپرمین باعث کاهش فعالیت آنزیم میشوند.

کاتالاز از جمله آنزیم های آنتی اکسیدانی است که در موجودات هوازی وعمدتا در ارگانل پراکسی زوم پستانداران موجود است ویکی از آنزیم های بسیار مهم در حفاظت سلول از آسیب های اکسیداتیو است.کاتالاز آنزیمی بسیار فعال است و می تواند در هر ثانیه میلیون ها مولکول پراکسید هیدروژن را بهh2oوo2تبدیل کند. کاتالاز به علت عملکرد مهمی که دارد حائز اهمیت بوده و در زمینه های مختلف مورد مطالعه قرار گرفته است از جمله در پزشکی، چرا که در بروز برخی از بیماری ها غلظت آن به منظور انجام متابولیسم رادیکال های آزاد بالا می رود

آنزیم اوره آز (ec:3.5.1.5) از نظر عملکردی جزه خانواده آمیدوهیدرولازها و فسفوتری استراز می باشد . این آنزیم هیدرولیز اوره به کربن دی اکسید و آمونیاک را کاتالیز می کند. به صورت اختصاصی تر می توان گفت که اوره آز کاتالیز اوره به آمونیا و کربامات را کاتالیز می کند سپس کربامات به طور خود به خودی تجزیه و ایجاد آمونیاک و کربن دی اکسید می نماید . اوره آز یک متالوآنزیم(حاوی نیکل) با وزن مولکولی بالا است . وزن مولکولی اوره آز 480 یا 545 کیلو دالتون می باشد. هر مولکول اوره آز داری 840 آمینواسید می باشد که 90 تای آنها سیستئین می باشند. ph اپتیمم اوره آز 2/7 و دمای اپتیمم آن 40 درجه سانتیگراد می باشد. اوره آز لوبیای جک دارای زیرواحدهای یکسانی است (هر کدام 90 کیلو دالتون ) که بعنوان تریمر یا هگزامر تجمع می یابند. جایگاه فعال آنزیم در زیرواحد α قرار دارد و شامل دو یون نیکل با فاصله اتمی a0 5/3 ~ می باشد. یونهای نیکل به وسیله یک لیزین کربامیله شده و یک یون هیدروکسید به هم وصل شده اند. یون (i) ni با اتم نیتروژن رزیدیوی هیستیدین و یک مولکول آب احاطه شده. یون (ii)ni از طریق دو رزیدیوی هیستیدین (از طریق یون نیتروژن )، یک آسپارتیک اسید (از طریق یون اکسیژن ) و دو مولکول آب احاطه شده است. مولکولهای اوره برای واکنش به جایگاه فعال متصل می شوند و جایگزین مولکولهای آب می شوند. رزیدیوهای آمینواسید در اتصال سوبسترا، تثبیت حالت گذر و تسریع واکنش شرکت می کنند، به علاوه این رزیدیوهای آمینواسیدی در ساخت لبه متحرک جایگاه فعال آنزیم که به عنوان درب برای سوبسترا عمل می کند، شرکت می کنند. رزیدیوهای سیستئین به فراوانی در لبه متحرک آنزیم وجود دارند، این زیدیوها در تعیین موقعیت رزیدیوهای کلیدی جایگاه فعال نقش دارند. در این مطالعه سینتیک آنزیم اوره آز در حضور پراکسید هیدروژن ، نانوذرات اکسید نیکل و اکسید آهن و دیگر مواد شیمیایی بررسی شد که به منظور انجام این آزمایش ها از دستگاه اسپکتروفتومتر uv-vis شیمادزو مدل 4000pharmacia- استفاده گردید. آنزیم اوره آز با غلظت 075/0 میلی گرم بر میلی لیتر درتامپون فسفات آماده گردید. نتایج این آزمایش ها نشان دادندکه : 1)پراکسید هیدروژن اثر مهاری بر روی سینتیک اوره آز دارد و این اثر مهاری به وسیله بوریک اسید و بتامرکاپتو اتانول کاهش می یابد. 2) نانوذرات اکسیدنیکل و اکسیدآهن به عنوان یک مهارکننده غیر رقابتی برای اوره آز عمل می کنند و این اثر مهاری توسط edta کاهش می یابد. 3)بوریک اسید و مرکوریک سولفات به ترتیب به عنوان مهارکننده رقابتی وغیر رقابتی عمل می کنند.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.