نام پژوهشگر: معصومه آقاسی نژاد

تعیین موقعیت تاکسونومیکی عامل لکه برگی باکتریایی پامچال در استان مازندران
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری - دانشکده کشاورزی 1390
  معصومه آقاسی نژاد   مسعود توحید فر

در بهار سال 1390 از برگ های پامچال وحشی(primula vulgaris) دارای علائم لکه برگی از چند منطقه جنگلی استان مازندران نمونه برداری شد. ازکشت نمونه های پامچال دارای علائم لکه برگی ،جدایه هایی با کلنی های محدب زرد رنگ ولعابدار روی محیط آگار غذایی حاوی سوکروز(nas) به دست آمد. واکنش فوق حساسیت پس از تزریق سوسپانسیون باکتری به برگهای شمعدانی ((pelargonium x hortorum بعد از 48 ساعت و بیماری زایی روی برگهای پامچال پس از 7 تا 14 روز به اثبات رسید. همه جدایه ها گرم و اکسیداز منفی ، هوازی اجباری، اوره آز منفی، کاتالاز مثبت و قادر به تولید h2s از سیستئین بودند. نقوش الکتروفورزی پروتئینهای سلولی جدایه ها تفاوت کمی با هم داشت. به منظور ارزیابی تنوع ژنتیکی جدایه ها، dna‎ ژنومی آنها استخراج و با بکارگیری آغازگرهای gyrb، reca و rpod قطعاتی از این سه ژن در واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) تکثیر و محصول به دست آمده با آنزیم های محدودگر هضم گردید. محصول های هضم آنزیمی با الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید و رنگ آمیزی با نیترات نقره مقایسه شد. از ضریب تشابه جاکارد برای تعیین تشابه جدایه ها و از روش upgamaو نرم افزار ntsys برای آنالیز خوشه ای استفاده شد. به منظور تعیین ارتباط فیلوژنتیکی و کمک به تشخیص دقیق گونه، قطعه هایی از ژن های gyrb ، reca ، rpod ، dnak و fyua با pcr تکثیر و تعیین توالی گردیدند. توالی نوکلئوتیدی به دست آمده، پس از همردیف سازی چندگانه (multiple sequence alignment) با برنامه mega4 با سایر توالی های مربوط به این ناحیه در گونه های مختلف xanthomonas موجود در genbank (ncbi) مقایسه شدند. جدایه ها در سطح تشابه 99-98% به گونه xanthomonas hortorum به ویژه پاتوار x.hortorum pv.hederae شباهت داشته و احتمالا جدایه های عامل لکه برگی پامچال به پاتوار گزارش نشده ای از این گونه تعلق دارند.