در این بررسی، نمونه های آب حاوی جلبک دونالیلا از 5 دریاچه شور ایران (دریاچه های شور ارومیه، قم، حوض سلطان، بیدگل و باتلاق گاوخونی) جمع آوری و پس از جداسازی ریز جلبک، dna آن ها استخراج و برای شناسایی ژن s rdna18 مورد استفاده قرار گرفت. واکنش های pcr برای جمعیت ها با استفاده از پرایمرهای نواحی حفاظت شده ma1، ma2 و ma3 و پرایمرهای اختصاصی گونه dbs، dss و dps مربوط به ژن s rdna18 انجام گرفت. قطعاتی با دامنه 500 تا bp 2500 به دست آمد و با اطلاعات بانک های اطلاعاتی مقایسه شدند.

امروزه استفاده از تکنولوژی گیاهان تراریخت به عنوان جایگزین مناسبی برای تولید پروتئین های نوترکیب می باشد. دستکاری های ژنتیکی از طریق ژنوم پلاستیدی به ویژه ژنوم کلروپلاست، مزایای متعددی نظیر، توان بیان بسیار بالا (تقریبا 60 کپی کروموزوم حلقوی در هر پلاستید و تقریبا 60-50 کلروپلاست در هر سلول)، توانائی بیان ژن های چندگانه و عدم انتقال ناخواسته ژن خارجی توسط دانه گرده را فراهم نموده است. با توجه به ویژگی های بی نظیر تراریختی پلاستیدی، علاقه زیادی برای به کارگیری این سیستم ها جهت تولید پروتئین های درمانی نوترکیب وجود دارد. کلسی تونین یک هورمون پپتیدی تک زنجیره می باشد که از 32 اسید آمینه تشکیل شده و دارای نقش اساسی در بکارگیری و استفاده از کلسیم و فسفر و حمایت از سیستم اسکلتی بدن در شرایط استرس کلسیم می باشد. همچنین کلسی تونین از دسته پپتیدهائی است که از پوکی استخوان جلوگیری می نماید. در این بررسی ، ژن پروتئین کلسی تونین به منظور انتقال به کلروپلاست انتخاب شده است. به این منظور ژن hct دارای دو جایگاه آنزیمی مشابه bamhiدر دو سمت خود و با ترجیح کدونی تنباکو با طولی در حدود 102 جفت باز به صورت کلون شده در پلاسمید p-pcr script دریافت شد. ژن جداسازی شده کلسی تونین تحت کنترل پروموتر prrn (که یک پروموتر دائمی و بسیار قوی در سیستم های کلروپلاستی و باکتریایی است) و خاتمه دهنده rbcl(chl)، درون ناقل کلروپلاستی pkcz کلون گردید و با استفاده از تفنگ ژنی به گیاه انتقال داده شد.

مولکول tnra یک تنظیم کننده گلوبال است که به قابلیت در دسترس بودن منابع نیتروژن پاسخ داده و نقش تنظیمی بر روی نسخه برداری از ژنها در حضور نیتروژن دارد. ملکول scoc یک پروتئین متصل شونده به dna است که تنظیم کننده شروع اسپورزایی و تولید پروتئاز قلیائی (apre) است. برای بررسی ارتباط این دو عامل نسخه برداری با تولید پروتئاز قلیائی، ژن های tnra،scoc و apre باکتری بومی b. clausii ehy l2 تکثیر، کلون و تعیین توالی شد. نتایج حاصل از انتقال به صورت طبیعی و الکتروپوریشن b. clausii ehy l2 نشان دهنده پایداری و غیرقابل ترایخته شدن این باکتری بود. انتقال سازه های حاوی ژن های جهش یافته به باکتری های b. licheniformis و b. subtilis صورت پذیرفت. در سویه نوترکیب b. licheniformis-ptcc1525-scoc میزان تول.....

چکیده فارسی اسپیرولینا یک نوع ریزجلبک سبز- آبی فتوسنتز کننده و با ساختمان رشته ای با مارپیچ چپگرد می-باشد که در اکوسیستم های آبی بین مدار جغرافیایی80 درجه شمالی و جنوبی مشاهده شده است. اسپیرولینا قابلیت استفاده خوراکی برای انسان در حالت فرآوری شده و فرآوری نشده را دارا می-باشد و از نظر اسیدهای آمینه و اسیدهای چرب، کامل می باشد. بهینه سازی محیط کشت ریز جلبک اسپیرولینا که به منظور دسترسی به تولید کم هزینه تر صورت پذیرفت، بر اساس یافته های محقیقین در نقاط مختلف جهان در مورد توان جذب ترکیبات مختلف توسط اسپیرولینا و بر پایه محیط کشت استاندارد زارووک انجام شد که طی آن محیط های کشت مختلف تهیه شده و پس از کشت و برداشت ماده خشک در شرایط یکسان و بهینه آزمایشگاهی، وزن ماده خشک حاصل از کشت اسپیرولینا در محیط کشت تهیه شده از اوره و آب دریا با سطح اطمینان 95% بیشتر از ماده خشک تهیه شده از محیط زارووک بود. یافتن حساسیت آنتی‏بیوتیکی مناسب در اسپیرولینا و تهیه سازه مناسب حاوی ژن مقاومت به آنتی‏بیوتیک مذکور با توان انتقال به اسپیرولینا و بیان ژن همراه در محیط اسپیرولینا به عنوان مارکر گزینش گر از دیگر اهداف این تحقیق بود که با اعمال غلظت های متفاوت آنتی‏بیوتیک‏های مختلف، حساسیت بسیار شدید اسپیرولینا به استرپتومایسین شناسایی شد. ژن آمینوگلیکوزید3- آدنیل ترانسفراز (aada) به عنوان ژن عامل مقاومت به استرپتومایسین در وکتور ptz57r همسانه سازی شد و بیان پروکاریوتیک ژن aada پس از انتقال سازه به باکتری اشرشیاکلی، با انتقال و کشت باکتری در محیط کشت دارای آنتی بیوتیک استرپتومایسین بررسی و سلامت سازه تایید گردید.

امروزه کاربرد ریزجلبک ها بعنوان غذا، مکمل های غذایی، مواد دارویی و مواد شیمیایی خالص در حال افزایش است. ریزجلبک ها شامل طیف وسیعی از ارگانیسم های یوکاریوت و پروکاریوت هستند که نقش بسیار مهمی در سنتز طیف گسترده ای از تولیدات طبیعی را بازی می کنند. به خاطر رشد سریع و کم هزینه بودن نسبت به سایر سیستم های بیان گیاهان تراریخت، ریزجلبکها کارخانجات سلولی مفیدی هستند که تولیدات با ارزشی نظیر ترکیبات شیمیایی و محصولات نوترکیب را فراهم می کنند.سیستم آگروباکتریوم اولین سیستم تراریختی موفق در گیاهان بود که موانع موجود در مهندسی ژنتیک گیاهی را کاهش داد. تاکنون روشهای مختلف انتقال ژن در گیاهان صورت گرفته اما بهینه سازی انتقال ژن در مورد ریزجلبک دونالیلا سالینا با روش آگروباکتریوم تومه فاسینس برای اولین بار در ایران صورت می گیرد. در این تحقیق کشت 5 گونه دونالیلا سالینا مربوط به نقاط مختلف ایران صورت گرفت و گونه جداشده از دریاچه قم بعنوان نمونه انتخاب شد.با کمک سویه آگروباکتریوم تومه فاسینس gv3850 که دارای پلاسمید pcambia 3301 است دونالیلا سالینای دریاچه نمک قم با روش هم کشتی با باکتری آگروباکتریوم تراریخت شد. با استفاده از آزمون pcr و آزمون هیستوشیمیایی gus حضور ژن bar و gus مورد ارزیابی و تایید قرار گرفت.

سالانه حدود 10 میلیون نفر در سرتاسر جهان به ویروس هاری مبتلا می شوند. راه درمان بیماری پس از آلودگی به ویروس واکسیناسیون و سرم درمانی است . آنتی بادی های ضد ویروس هاری در 2نوع hrig و erig هستند که به ترتیب از دو منبع انسانی و اسبی گرفته شده اند. اما کمبود آنتی بادی انسانی و احتمال وجود آلودگی های ویروسی نظیر ایدز در این آنتی بادی ها، همچنین وجود پروتئین های ناخواسته موجود در آنتی بادی به دست آمده از سرم اسب، که باعث ایجاد واکنش ایمنی شدید و ناخواسته با بدن فرد دریافت کننده آنتی بادی می شود، به کارگیری این آنتی بادی ها را به منظور درمان بیماری هاری با مشکلات جدی مواجه کرده است. با توجه به کشنده بودن ویروس هاری و همچنین کمبود شدید آنتی بادی ضد ویروس هاری و هزینه بالای تامین آنتی بادی ضد ویروس هاری وارداتی، امکان تولید آنتی بادی مونوکلونال ضد ویروس هاری در داخل کشور در سیستم-های ارزان قیمت، ایمن وکارا مانند گیاه بسیار مورد توجه می باشد. در این تحقیق، بیان موقت ژن کد کننده زنجیره سبک آنتی بادی مونوکلونال ضد ویروس هاری داخل گیاه تنباکو، مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور پس از اپیتمایز کردن و سنتز ژن کدکننده زنجیره سبک آنتی بادی ضد ویروس هاری این ژن در پلاسمید بیانی مخصوص سلول گیاهی pcambia 1304 قرار داده شد. سپس سازه ی نوترکیب به روش ذوب وانجماد به آگرو باکتریوم تومفسینس انتقال داده شد. انتقال ژن زنجیره ی سبک به برگ های جوان گیاه تنباکو ازطریق تکنیک آگرواینفیلتراسیون انجام شد و تولید پروتئین نوترکیب در گیاه پس از استخراج کل پروتئین،3 روز بعد از اگرواینفیلتراسیون، با آزمون دات بلات و gfp مورد تائید قرار گرفت. در این مطالعه ما اثبات کردیم که زنجیره سبک آنتی بادی مونوکلونال ضد ویروس هاری که قابلیت خنثی کردن آنتی ژن های این ویروس را داراست، به روش بیان موقت درگیاه تنباکوازطریق تکنیک اگرواینفیلتراسیون قابل تولید است.

چکیده: کلیستونین یک هورمون جانوری با 32 اسید امینه است که توسط غدد اولتیموبرانشیال تعدادی از جانوران از جمله انسان ترشح می شود. این هورمون نقش مهمی در تنظیم کلسیم خون در انسان و سایر جانوران بازی می کند. در این مطالعه امکان انتقال ژن کلسیتونین انسانی به کمک پیش بر و پپتاید نشانه به داخل آمیلوپلاست های غده ی سیب-زمینی به همراه بهینه سازی کشت بافت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این آزمایش با استفاده ازآنالیز مولکولی pcr نشان داد که سامانه بیان ژن کلسیتونین با موفقیت در ژنوم سیب زمینی وارد شد. در این آزمایش بهینه سازی کشت بافت به منظور دستیابی به بالاترین درصد کالوس زایی و باززایی به کمک یک آزمایش فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی با چهار تکرار و هر تکرار یک پلیت شامل ده ریزنمونه انجام گرفت. فاکتورهای مورد مطالعه شامل محیط در سه سطح با غلظت های هورمونی متفاوت، غلظت آنتی-بیوتیک در دو سطح 50 و 100 میکروگرم در میلی لیتر، ریزنمونه در دو سطح برگ و میانگره ساقه و رقم در دو سطح آگریا و مارفونا بودند. در این آزمایش مقایسه میانگین اثرات چهارگانه در سطح یک درصد (p?0.01) معنی دار شد. بهترین تیمار، محیط d2، ریزنمونه برگ، رقم مارفونا با غلظت آنتی بیوتیک 50 میکروگرم در میلی لیتر با مقدار صددرصد کالوس زایی شناخته شد. تا تیمار چهارم ریزنمونه ی برگ همراه محیط d2 و به صورت متناوب سطوح مختلف ریزنمونه و آنتی بیوتیک قرار داشت که کالوس زایی را تا 95 درصد اعمال کرد. کمترین مقدار کالوس دهی در این محیط مربوط به تیمارهای رقم آگریا و ریزنمونه میانگره ساقه بود که این مقدار را به زیر 88 درصد رساند و این مقدار ازتعدادی از میانگین های محیط d1 نیز کمتر شد. آزمایش نشان داد که ریزنمونه برگ و رقم مارفونا از درصد کالوس زایی بالاتری برخوردارند. بعد از محیط d2، محیط d1 درصد کالوس زایی بالاتری را نشان داد. همچنین بالاترین درصد کالوس زایی در محیط d1به همراه رقم مارفونا، ریزنمونه برگ و غلظت آنتی-بیوتیک 50 میکروگرم در میلی لیتر به مقدار 90 درصد به دست آمد. در این تیمارها نیز میانگین رقم مارفونا و ریزنمونه برگ بیشتر بود، به طوری که ریزنمونه میانگره و رقم آگریا کمترین درصدها (حدود 73 درصد) را در بین تیمارهای محیط d1 داشت. اما در مورد غلظت آنتی بیوتیک تفاوت معنی داری مشاهده نشد. محیط c کمترین میزان کالوس زایی را نشان داد به طوری که در ریزنمونه میانگره، این درصد به صفر رسید. در تیمارهای این محیط تفاوت معنی داری در سطوح آنتی بیوتیک و رقم مشاهده نشد. در کل میان سطوح فاکتورهای دو رقم، مارفونا، دو ریزنمونه، برگ، سه محیط به ترتیب d2، d1وc ، بهترین سطوح شناخته شدند و در بین غلظت های 50 و 100 میکروگرم در میلی لیتر آنتی بیوتیک کانامایسین، تفاوت معنی داری مشاهده نشد. کلمات کلیدی: ، آنالیز مولکولی، انتقال ژن، باززایی، سیب زمینی، کلسیتونین، همسانه سازی ژن.

بررسی پایداری dna پلاسمیدی در نانو ذره کیتوزان

چکیده : قدرت سلولولیتیک و سنتز پروتئین سلولی توسط هشت گونه سلولوموناس شامل سویه ه جداشده از ایران توسط دکتر ملکزاده و سویه های تهیه شده از خارج و نیز میکروفلور مخلوط شکمبه شتر با بکارگرفتن تفاله پرتقال بعنوان منبع کربن و انرژی مورد بررسی و مطالعه قرار گرفته است . با بکاربردن روش کشت غوطه ور گونه های cellulomonas spp)g(باptcc=1325 و c.uda با ptcc=1250 به ترتیب بالاترین مقدار تولید scp را نشان دادند. در بررسی تاثیر تیمارهای شیمیائی از قبیل پکتین زدائی، اسیدی و بازی معلوم گردید که تفاله پکتیم زدائی شده در مقایسه با تفاله خام آسانتر مورد استفاده باکتریها قرار می گیرد و scp بیشتری تولید می گردد . بیوماس حاصل در گونه های مختلف سلولوموناس 5 تا 18 برابر بیشتر از تفاله خام افزایش نشان می دهد . در مقایسه تیمار با اسید سولفوریک و اسید کلریدریک و هیدروکسید سدیم در تیمار با اسید سولفوریک مقدار بیشتری پروتئین سلولی بدست آمد که در مخلوط شکمبع شتر1.12 gr/100 ml و در 1.04 gr/100 ml , c.spp)g(,ptcc=1325 و در1.01 gr/100 ml,c.uda)1259(می باشند در مورد تاثیر منبر نیتروژن نیز از منابع)nh4(2so4و nh4no3 و کورن استیپ (محیط دارای ازت آلی) استفاده گردید. در محیط کورن استیپ میزان پروتئین نسبت به دو محیط قبل بیشتر بود و بین دو محیط با ازت نیترات آمونیاکی و سولفات آمونیاکی تفاوت چشمگیری مشاهده نشد. در صورتیکه به محیط پایه با منبع ازت)nh4(2so4 به مقدار 0/5 درصد عصاره مخمر افزوده می شد، تفاوت در مقدار پروتئین حاصل مشاهده شد (. تا 1/5 درصد افزایش) در تهیه scp شرایط مناسب شامل ph برابر 7، گرمای 30 درجه سانتیگراد و زمان کشت 72-75 ساعت در rpm برابر 150 بوده و افزایش بیوماس نیز در این شرایط مطلوب می باشد. در جریان تخمیر ph محیط دو درجه کاهش پیدا کرده و به حد 5 می رسد . در مورد میکروفلور شکمبه زمان 85 ساعت و حرارت 37 سانتیگراد و rpm برابر 170 از نظر افزایش پروتئین مناسب می باشد . با نتایج حاصله بنظر می رسد که نمونه میکروارگانیسمهای موجود میتوانند در شرایطی که منبع سلولزی یعنی تفاله مرکبات پکتین زدائی شده باشد با تولید پروتئین ارزش غذائی تفاله را بالا ببرند. چنین فرآورده هائی را میتوان به غذای دام و طیور اضافه نمود و آنرا غنی کرد و از طرف دیگر از انباشته شدن تفاله به عنوان ماده زاید و ایجاد آلودگی محیط جلوگیری نمود .