نام پژوهشگر: علی محمد لطیفی

ارزیابی اثر فیتوتوکسین های میکروبی روی دوگونه علف هرز خردل وحشی و بارهنگ آبی
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان البرز - پژوهشکده بیوتکنولوژی 1389
  فاطمه شاکری   علی محمد لطیفی

یکی از مهمترین چالش های محصولات کشاورزی، علف های هرز می باشند. بسته به نوع محصول و نوع علف هرز، شیوه های مبارزه متفاوت بوده و به تبع آن در کشور های مختلف اثرات زیان بار اقتصادی متفاوتی را از خود نشان می دهند. در این راستا روش های کنترل بیولوژیک از کارآمدی بالایی برخوردار بوده و مورد توجه ویژه قرار گرفته اند. در این مطالعه که با هدف استفاده از بیوهربیساید های قارچی برای کنترل بیولوژیک علف هرز خردل وحشی انجام گرفت ما موفق به جداسازی 846 سویه قارچی از خاک و گیاهان آلوده دولپه ای مناطق مختلف کشور شدیم. سویه های قارچی خالص شده برای بررسی توانایی تولید فیتوتوکسین های نکروز دهنده گیاهان دولپه ای مورد نظر، در محیط چاپکس داکس بهمراه کازآمینو اسید دردمای 28 درجه بمدت 10 روز انکوبه شدند. از این میان تنها 50 جدایه قارچی مهار 70% یا بیشتر علف هرز خردل وحشی را در مقایسه با کنترل نشان دادند. سپس محلول رویی سویه های منتخب مرحله اول بروش سولفات آمونیوم تغلیظ گردیده و پس از محلول سازی با بافر مناسب بروی علف هرز تست گردید براساس قدرت تاثیر گذاری، زمان مورد نیاز برای تاثیرگذاری، نوع تاثیرگذاری برروی خردل وحشی، نهایتا سویه irlm,lc34 مولد فیتوتوکسین پروتئینی با قابلیت کنترل و تخریب موثر خردل وحشی انتخاب شد که بر پایه صفات مورفولوژیکی و ژنتیکی 18s rdna مورد شناسایی فراتر قرار گرفت. پس از تعیین غلظت پروتئین محلول رویی بروش برادفورد با sds- page آن را مورد ارزیابی قرار داده و باند 25 کیلودالتونی مشاهده شد که در بیشتر مقالات نیز باند پروتئینی 25 کیلودالتونی باعث نکروزدهندگی گیاه می شود. در نهایت فیتوتوکسین پروتئینی تولید شده با استفاده از سیستم fplc تخلیص گردید.نتایج ارزیابی های به عمل آمده نشان دهنده اثرات تخریبی شدید فیتوتوکسین به صورت ایجاد نکروز شدید بود به طوری که در مراحل مختلف رشد منجر به مرگ سلولی گیاه هدف گردید. یکی از ویژگی های بارز این نوع فیتوتوکسین اثر تخریبی انتخابی بر روی علف های هرز دولپه ای و عدم اثر منفی بر روی انواع گیاهان تک لپه ای مثل گندم، جو، برنج می باشد. با توجه به اینکه گیاه خردل وحشی به عنوان یکی از مهمترین علف های هرز در مزارع کشت گندم می باشد لذا استفاده از فیتوتوکسین مذکور می تواند گام موثری در جهت کنترل این نوع علف هرز تلقی گردد. لازم به ذکر است که به علت عدم پایداری طولانی مدت فیتوتوکسین ها در شرایط محیطی خاک، استفاده از آنها هیچ گونه مخاطره جدی زیست محیطی را به دنبال نخواهد داشت

ارزیابی اثر فیتوتوکسین های میکروبی روی دو گونه علف هرز تاج خروس و سلمک
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده علوم کشاورزی 1391
  رعنا نصیری   علی محمد لطیفی

در زمینه کشاورزی، علف های هرز به عنوان یک معضل جدی تلقی می شوند. به منظورمهار و یا کاهش رشد و گسترش علف های هرز، امروزه از روش کنترل بیولوژیکی، استفاده می شود. در این تحقیق، به منظور کنترل زیستی علف های هرز، علف های هرز تاج خروس و سلمک انتخاب شده و در شرایط آزمایشگاهی (در محیط کشت ms و(b5 و شرایط گلخانه ای کشت داده شدند. 9 گونه قارچی توانمند در تولید فیتوتوکسین انتخاب و کشت داده شدند. از بین 9 سویه قارچی که از مناطق مختلف ایران گردآوری، شده بودند، سویه sprd بر روی گیاه سلمک (ch-a) و سویهqap1 بر روی گیاه تاج خروس am-r)) بهترین تاثیر را از خود نشان داده و باعث پژمردگی و نکروزگی و در نهایت باعث مرگ گیاه شدند. قارچهای مزبور در محیط چاپکس داکس مایع با 1% گاز آمینو اسید در دمای0c 28 و با دور rpm 150 به مدت 10 روز و با ph6 کشت داده شدند. در این محیط نیترات سدیم به عنوان منبع نیتروژن و ساکارز به عنوان منبع کربن به کار برده شد. ml2 سوپرناتانت با 20 لاندا توئین بر روی سلمک و تاج خروس اسپری شد. از بین 9 سویه، محلول رویی اثربخش ترین سویه ها یعنیsprd و qap1 مورد سنجش پروتئین قرار گرفتند و محلول رویی بر اساس روشهای برادفورد، نانودراپ، تغلیظ پروتئین با استفاده از سولفات آمونیوم و دیالیز و بالاخره sds-page بررسی شد. نتیجه حاکی از این بود که فیتوتوکسین حاصل ازsprd غیر پروتئینی می باشد، اما فیتوتوکسین حاصل از qap1 پروتئینی می باشد.

عصاره گیری، فرمولاسیون و بررسی اثر التیام بخشی عصاره scrophularia striata در درمان زخم باز پوستی در موش آزمایشگاهی
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده علوم پایه 1391
  علی اکبر جعفری   علی محمد لطیفی

ترمیم زخم فرآیند فیزیولوژیک پیچیده ای است که شامل مراحل متوالی می باشد، هر دارویی که بتواند زمان این مراحل را کمتر کند، منجر به تسریع روند ترمیم می شود. گیاه اسکروفولاریا استریاتا، بطور سنتی در التیام زخم مورد استفاده قرار می گیرد. تحقیق حاضر جهت بررسی اثرات التیام بخشی این گیاه در ترمیم زخم موش سوری و مقایسه عصاره های مختلف این گیاه صورت گرفته است. برای این مطالعه از موش سوری نر در محدوده وزنی 35- 25 گرم استفاده شد. این تحقیق شامل دو مرحله بود که در مرحله اول اثرات التیام بخشی سه نوع عصاره آبی, الکلی و هیدروالکلی در زخم مورد بررسی قرار گرفت. موشها به پنج گروه تقسیم شده، گروه اول بدون درمان(شاهد)، در گروه دوم از فنی توئین و گروه سوم تا پنجم نیز به ترتیب از عصاره های آبی، الکلی و هیدروالکلی با غلظت 10 درصد برای درمان استفاده شد. برای مطالعه روند ترمیم از زخمها عکس برداری شده و توسط نرم افزار image j آنالیز گردید. در گام دوم تحقیق که بر اساس یافته های گام اول برنامه ریزی شده بود, اثر التیام بخشی پماد های ساخته شده از عصاره هیدروالکلی این گیاه مورد بررسی قرار گرفت. موشها به پنج گروه شاهد، اسرین، فنی توئین، پماد گیاهی 5 درصد و 10درصد تقسیم شدند. برای مطالعات بافت شناسی در روزهای 4, 7, 14 و 21 نمونه برداری از زخمها صورت گرفت. میانگین زمان ترمیم زخم در گام اول برای گروه های شاهد، فنی توئین و عصاره های الکلی، آبی و هیدرو الکلی به ترتیب 1/3±1/9، 9/1±6/6، 7/1±5/6، 8/1±7/6 و 9/0±1/6 روز بود که گروه عصاره هیدروالکلی بهترین نتیجه را نشان داد و در گام دوم تحقیق این زمان برای گروههای پماد 10 درصد، پماد 5 درصد، فنی توئین، اسرین و شاهد به ترتیب6، 43/6 ، 71/6، 86/8 و 14/9 روز بود. اگرچه تمامی گروههای مورد مطالعه دارای اختلاف آماری معنی داری (p<0.05) با گروه های شاهد و اسرین بودند, اما نتایج مطالعات بافت شناسی نشان می دهد که گروه پماد 10 درصد نسبت به بقیه گروهها بهترین تاثیر را نشان داد.

کلون و بیان ترشحی آنزیم dfpase در باسیلوس سوبتیلیس
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه سمنان - دانشکده علوم 1393
  صفرعلی احمدی زادفیروزجائی   علی محمد لطیفی

آفت¬کش¬های ارگانوفسفره برای کنترل آفت¬های کشاورزی استفاده می¬شوند و 38% کل آفت کش های موجود در جهان را شامل می شوند. این ترکیبات استیل کولین استراز را مهار می کنند که منجر به تجمع استیل کولین و در نهایت نقص در اندام و حتی مرگ می گردند. یکی از آنزیم¬هایی که دارای ویژگی سوبسترایی وسیع برای تجزیه ارگانوفسفات¬هاست آنزیم دی ایزوپروپیل فلوروفسفاتاز(dfpase ) می¬باشد که در مغز ماهی مرکب( loligo vulgaris ) یافت شده است. تیمار ترکیبات ارگانوفسفره با استفاده از سوش¬های مهندسی شده حاوی آنزیم dfpase روش مناسبی برای حذف این ترکیبات می¬باشد. در این مطالعه به منظور تسریع تجزیه ترکیبات ارگانوفسفره بیان ترشحی آنزیم dfpaase برای اولین بار در میزبان b. subtilis wb600 بررسی شد. این مدل از بیان آنزیم باعث میگردد محل آلوده مورد نظر سریعتر و با ایمنی بالاتر رفع آلودگی شود. ژن dfpase به کمک pcr از وکتور pet28-inav/n-dfpase تکثیر یافت. محصول pcr بدست آمده در وکتور pwb980 کلون گردید. سوش باکتریایی b. subtilis wb600 مستعد با وکتور نوترکیب ترانسفرم شدند. بررسی بیان ترشحی پروتئین در محیط بسیار غنی به کمک تکنیک sds page باند پروتئینی حدود 35 کیلودالتون را پس از 72 ساعت گرمادهی در دمای 35 درجه و دور rpm 150 نشان داد. مطالعه فعالیت به روش مانیتورینگ فلوراید آزاد شده از تجزیه dfp، u/l3333 فعالیت را نشان داد. نتایج به دست آمده نشان می دهد سوش نوترکیب به منظور تولید تجاری این آنزیم، بسیار کارآمد باشد.