نام پژوهشگر: غلامرضا هاشمی تبار
ویدا عراقی غلامرضا هاشمی تبار
ویروس کم خونی عفونی، عامل بیماری بالینی کم خونی عفونی و یکی از عوامل ایمونوسوپرسیو در ماکیان می باشد. در این بررسی بافت های طحال، کبد و تیموس نمونه های درمانگاهی و کشتارگاهی جوجه گوشتی خراسان بزرگ، با هدف مطالعه تنوع ژنتیکی ژن های vp1، vp2 و vp3 این ویروس، به روش pcr غربال گری شدند. از میان نمونه های مثبت تعداد 20 نمونه با دو جفت پرایمر اختصاصی در برگیرنده بخش اصلی ناحیه رمز کننده vp1 و تمام ناحیه در برگیرنده vp2 و vp3 تکثیر و به صورت مستقیم، توالی یابی شدند. با حذف سویه هایی با منشاء احتمالی یکسان، مجموعا تعداد 14 نمونه از نظر vp2 و vp3 و 3 نمونه از نظر vp1 تعیین توالی شدند. توالی های خام پس از ویرایش با استفاده از نرم افزار bioedit و برنامه clustal w با توالی های انتخابی از سویه های مختلف در سراسر دنیا، مورد ردیف یابی دوگانه جهت بررسی میزان همولوژی و همسانی در سطح اسید نوکلئیک و اسید آمینه، و نیز ردیف یابی چندگانه قرار گرفتند. میزان همسانی سویه های خراسان با سویه های مورد مقایسه در سطح اسید نوکلئیک برای vp1، vp2 و vp3 به ترتیب از 3/97 تا 100%، 1/98 تا 100% و 97 تا 100% متغیر بودند. از نظر همولوژی در سطح اسید آمینه این نتایج برای vp1 از 8/96 تا 100%، برای vp2 از 2/97 تا 100% و برای vp3 از 9/95 تا 100% متنوع بود و در خصوص همسانی برای این سه ژن به ترتیب از 6/98 تا 100%، از 7/97 تا 100% و از 5/97% تا 100% متغیر بود. بر اساس توالی آمینواسید برگرفته از توالی نوکلئوتیدی (deduced amino acid) و درخت فیلوژنی vp1، سویه های خراسان همراه با سویه های تکثیر شده از نمونه های جمع آوری شده در سطح مزارع از قاره ها و کشور های مختلف، یک گروه واحد ژنتیکی را تشکیل دادند؛ در حالی که سویه های واکسینال و آداپته شده با کشت سلول در یک گروه مجزای دیگر قرار گرفتند. هیچ ارتباط مشخصی بین ژنوتیپ های مورد مطالعه و مناطق جغرافیایی و منشاء دیگر سویه های مورد استفاده جهت آنالیز فیلوژنی مشاهده نشد. علی رغم تنوع مشاهده شده در توالی آمینواسیدی vp2 و قرار گرفتن سویه های خراسان در دو گروه ژنتیکی، به نظر نمی رسد درخت فیلوژنی این ژن بتواند در ژنوتایپیتگ، کمک موثری بنماید. در آنالیز فیلوژنی توالی آمینواسیدی vp3، سویه های خراسان در دو گروه ژنی از سه گروه ژنی قرار گرفتند. نتایج حاصل از این بررسی جایگاه ژن های vp1، vp2 و vp3 برخی سویه های ویروس کم خونی عفونی خراسان را در مقایسه با سویه های دیگر در گستره جهانی به تصویر کشیده است. آنالیز فیلوژنی در سطح آمینواسید vp1 شاید قادر به تفریق سویه های واکسینال مرسوم و آداپته با کشت سلول از سویه های وحشی مزرعه باشد. این بررسی اولین مورد مطالعه ژنوم ciav در کشور می باشد که در آن توالی بخش هایی از vp1 و توالی vp2 و vp3 به طور کامل، تعیین شدند.
سهیلا فتوحی غلامرضا هاشمی تبار
چکیده تشخیص سرولوژیک کیست هیداتید انسانی با استفاده از آنتی ژن های مایع هیداتید، سوماتیک و دفعی _ ترشحی پروتواسکولکس گوسفندی به روش الایزا بیماری کیست هیداتید ( هیداتیدوزیس ) یکی از بیماریهای مهم مشترک قابل انتقال بین انسان و حیوان می باشد که به وسیله مرحله لاروی اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می شود. و موجب ضررهای اقتصادی به دلیل آلودگی در دام می شود و دارای اهمیت بهداشتی زیادی می باشد نوزاد انگل در اندامهای داخلی بسیاری از پستانداران از جمله انسان ( به عنوان میزبان واسط ) زندگی می کند و در طی تکامل سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می گردد. ایران از مناطق هیپرآندمیک بیماری بوده. آلودگی انسان به کیست هیداتید بیشتر در مناطقی که انسان با سگ و دام ها در تماس نزدیک است، دیده می شود. تشخیص هیداتیدوز در انسان بیشتر بر اساس تصاویر رادیولوژیک، سیتی اسکن یا سونوگرافی می باشد که با مشکلاتی همراه بوده و در تشخیص دقیق ماهیت این ضایعات ناتوان است. بنابراین روش های ایمونولوژیک در تشخیص آزمایشگاهی هیداتیدوز از اهمیت و اعتبار ویژه ای برخوردارند. در این راستا تعیین آنتی ژنی که از نظر ویژگی و حساسیت بتواند چنین هدفی را برآورده کند از اهمیت خاصی برخوردار است. الایزا روشی است که نسبت به سایر روشها دارای اختصاصیت و حساسیت بالاتری است. در مطالعه حاضر آنتی ژن های مایع هیداتید، سوماتیک و دفعی _ ترشحی را در میکروپلیت های جداگانه کوت کرده و با استفاده از آزمون kappa نتایج بدست آمده از تست های مختلف باکیت الایزای انسانی مقایسه شد. با توجه به نتایجی که از نمونه های کنترل مثبت و منفی بدست آوردیم آنتی ژن های مایع هیداتید در مقایسه با کیت الایزای انسانی در حد عالی، آنتی ژن های دفعی _ ترشحی، متوسط و آنتی ژن های سوماتیک ضعیف بود. با توجه به نتایجی که از نمونه های مشکوک بدست آوردیم میزان توافق مایع هیداتید با کیت الایزای انسانی در حد متوسط و آنتی ژن های دفعی _ ترشحی و سوماتیک ضعیف بودند. در حالت کلی نتیجه میگیریم کیت حاوی مایع هیداتید در شناسایی موارد مثبت انسانی خوب است ولی در شناسایی موارد منفی ناتوان است که این احتمالأ به علت واکنش متقاطع بین مایع کیست هیداتید گوسفندی با عوامل عفونی در انسان می باشد.
الهام رحمتیان غلامرضا هاشمی تبار
هدف از این مطالعه ارزیابی میزان شیوع و مقاومت آنتی بیوتیکی سویه های استافیلوکوکوس کواگولاز منفی جدا شده از نمونه های شیر مخازن تعدادی از گاوداریهای صنعتی مشهد، در طی سال های 1389 و 1390 در مشهد و بررسی میزان فراوانی ژن های کدکننده انتروتوکسین های استافیلوکوکوسی sea، seb، sec، sed و see در این سویه ها بود. استافیلوکوکوس های کواگولاز منفی بر اساس روش های آزمایشگاهی متداول، در 37 نمونه (37%) از 100 نمونه شیر خام با غلظت متوسط cfu/ml 105 × 14/1 مشاهده شد. در مجموع 44 جدایه استافیلوکوکوس کواگولاز منفی شامل 14 سویه استافیلوکوکوس کروموژنز (8/31%)، 12 سویه استافیلوکوکوس هایکوس (2/27%)، 10 سویه استافیلوکوکوس کاپرا (7/22%)، 5 سویه استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس (3/11%)، 2 سویه استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس (5/4%) و یک سویه استافیلوکوکوس سیمولانس (2/2%) به روش آزمایشگاهی مورد تشخیص قرار گرفتند. کلیه جدایه ها با استفاده از روش pcr نیز مورد تأیید قرار گرفتند. حساسیت یا مقاومت آنتی بیوتیکی جدایه ها با استفاده از روش انتشار از دیسک توسط 14 آنتی بیوتیک مختلف ارزیابی گردید. بر اساس نتایج بدست آمده 44 جدایه (100%) حداقل به یک آنتی بیوتیک مقاوم بودند. بیشترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به پنی سیلین (54/79%)، سفکسیم (54/79%)، استرپتومایسین (81/56%) و کلوکساسیلین (50%) مشاهده شد. 100% و 73/97% جدایه ها به ترتیب نسبت به سیپروفلوکساسین و ونکومایسین حساسیت نشان دادند. از مجموع 44 جدایه مورد مطالعه، 10 جدایه (73/22%) دارای ژن کدکننده برای یک نوع انتروتوکسین بودند. بیشترین فراوانی مربوط به ژن کدکننده انتروتوکسین a (sea) (6جدایه، 60%) و سپس sec (4 جدایه، 40%) بود. هیچکدام از جدایه ها واجد ژن های seb، sed و see نبودند. با توجه به مقادیر بالای آلودگی استافیلوکوکوسی در شیر و مقاومت قابل توجه به آنتی بیوتیک های مختلف، استافیلوکوکوس های انتروتوکسیژنیک در شیر خام به عنوان یک خطر بالقوه برای سلامت مصرف کنندگان می باشند. لذا تشخیص این سویه ها و کنترل منابع آلودگی شیر باید به عنوان بخشی از استانداردهای کنترل کیفی شیر و فراورده های لبنی مورد توجه قرار گیرد.
فرشته میرشکار غلامرضا هاشمی تبار
اکینوکوکوس گرانولوزوس دارای 10 سویه g1-g10 می باشد. که هر سویه به میزبان واسط خاصی مربوط می شود. این سویه ها از نظر ریخت شناسی، همه گیری شناسی، درمان و کنترل با هم اختلاف دارند. برای شناسایی سویه ها از روش های مورفولوژیکی و مولکولی زیادی استفاده می شود، که البته استفاده این روش ها با همدیگر برای شناسایی سویه ها اطلاعات قابل قبول تری در رابطه با شتاسایی تنوع در سویه های اکینوکوکوس گرانولوزوس فراهم می کند. هدف اصلی مطالعه ی حاضر بررسی مورفولوژیکی و مولکولی کیست های هیداتید گوسفندان کشتارشده در کشتارگاه مشهد به منظور شناسایی سویه های اکینوکوکوس بود. در این مطالعه اندام های آلوده(کبد و ریه) از کشتارگاه به آزمایشگاه منتقل شدند. پس از استخراج مایع کیست های هیداتید، شاخص های مورفولوژیک قلاب های روستلوم پروتواسکولکس ها با استفاده از عدسی مدرج چشمی اندازه گیری شدند. نتایج بررسی شاخص های مورفولوژیکی قلاب های روستلوم پروتواسکولکس ها شامل: طول کلی قلاب بزرگ3/0±6/23 و طول تیغه ی قلاب بزرگ 5/0±7/11 و طول کلی قلاب کوچک 7/1±3/19 و طول تیغه ی قلاب کوچک 1/1±8 و تعداد کلی قلاب 7/0±7/33 می باشد. در بخش مولکولی این مطالعه بعد از استخراج dnaبا کیت mbst، واکنش pcr بر روی ژن its1 با دو پرایمر egr,egrصورت گرفت. سپس محصول pcr توسط آنزیم bsh1236i مورد هضم آنزیمی قرار گرفت. براساس الگوی باندها(4باند) گونه اکینوکوکوس گرانولوزوس سویه های g1,g2,g3 تشخیص داده شد. و برای تمایز سه سویه از یکدیگر تعیین توالی صورت گرفت. و سویه g1 تشخیص داده شد. نتایج مولکولی با نتایج مورفولوژیکی قلاب های روستلوم کاملأ هماهنگ بود و هر دو نشان دهنده ی تأیید وجود سویه گوسفندی g1در گوسفندان کشتاری مشهد بود. کلمات کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کیست هیداتید،pcr، گوسفند
کاظم دستجردی غلامرضا هاشمی تبار
بیان بیش از حد پروتئین گیرنده فاکتور شماره2 رشد اپیدرمی انسان (her2) در درصد قابل توجهی از موارد سرطان پستان انسان رخ می دهد. آنتی بادیهای منو کلونال her2 بعنوان عوامل تشخیصی و درمانی به شکل گسترده ای استفاده می شود. با این وجود شناسایی شناساگر مولکولی با خصوصیات تشخیصی و درمانی برتر از اهمیت زیادی برخوردار است. آپتامرها از این جهت امید بخش می باشند. در مطالعه حاضر روش پنینگ سلولی (cell selex ) در 16چرخه انتخابی جهت دستیابی به محصول غنی از توالی های آپتامری با قابلیت اتصال ویژه به سلول هایی که پروتئین her2 را بیش از حد بیان میکند، صورت گرفت. نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که محصول نهایی از توالی های آپتامری برای سلول sk-br3که پروتئین her2 را بیش از حد بیان می کند، غنی شده است. هر چند ایجاد محصول غنی از توالی های آپتامری برای سلولهای sk-br3 به معنای دستیابی به محصول غنی شده آپتامری برای پروتئین her2 نیست. در مطالعه حاضر روش cell elaa به گونه ای تغییر داده شد که می توان از آن بعنوان روش جایگزین برای ارزیابی پیشرفت selex بهره برد. این مطالعه همچنین نشان می دهد که واکنش زنجیره ای پلیمراز برای تکثیر dna تک رشته ای کتابخانه اولیگونکلئوتیدی و محصول هترولوگ حاصل از چرخه های پنینگ با روش استاندارد pcr متفاوت است.
افسانه جعفری مهرناز راد
گونه های باکتری اشریشیاکلی قادرند آنزیم های بتالاکتاماز را با طیف وسیع (esbl) که عامل بروز مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام می باشد تولید کنند. بنابراین تعیین الگوهای مقاومت آنتی بیوتیکی در ارگانیسم های مقاوم در جهت تجویز آنتی-بیوتیک مناسب در طی درمان ضروری می باشد. هدف از انجام این مطالعه تعیین زمینه ژنتیکی و ارتباط کلونال بین جدایه های اشریشیاکلی تولیدکننده آنزیم های بتالاکتاماز وسیع الطیف با منشأ انسان و دام بوده است. برای این مطالعه تعداد 120 جدایه اشریشیاکلی با منشأ انسان و دام مورد بررسی قرار گرفتند. تعداد جدایه هایی که به نمونه های با منشأ گوساله سالم و گوساله اسهالی و عفونت ادراری تعلق داشتند برای هریک به تعداد 40 جدایه بود. جهت جداسازی جدایه های تولیدکننده esbls و تأیید وجود باکتری های اشریشیاکلی مولد esbls از دیسک های آنتی بیوتیکی سفتازیدیم، سفوتاکسیم و سفپودوکسیم به تنهایی و در ترکیب با اسیدکلاولانیک استفاده شد. از بین تعداد120 جدایه مورد بررسی وجود esbls در 10 مورد مثبت گزارش شد که از بین آن ها تعداد 7 جدایه با منشأ عفونت ادراری و 1 جدایه جدا شده از گوساله های اسهالی و 2 مورد به جدایه های با منشأ گوساله های سالم تعلق داشتند. 10 جدایه مولد آنزیم های بتالاکتاماز با طیف وسیع جهت تعیین خصوصیات ژنتیکی و ارتباط کلونال بین آن ها با روش eric-pcr مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج حاصل از eric-pcr برای جدایه های مورد مطالعه 10 الگوی ژنتیکی مختلف را نشان داد که 12 الگوی باند dna با وزن های مولکولی متنوع نشان داد. بیشترین و کمترین وزن مولکولی مربوط به باندهای مشاهده شده برابر با 1150bp و 350bp گزارش شد. براساس نتایج حاصل از این مطالعه هیچ گونه ارتباط کلونالی بین جدایه ها وجود نداشته و هریک از جدایه های با منشأ انسان و گوساله به خاستگاه-های متفاوتی تعلق دارند.
مژده برزن مهرناز راد
ظهور و افزایش روزافزون مقاومت نسبت به شمار زیادی از عوامل ضد میکربی مانند فلوروکینولون ها درمان عفونت های ناشی از سویه های اشریشیا کلی را پیچیده نموده است. این مسئله به ویژه در برخی از کشورها جدی و نگران کننده است. یافته های اخیر نشان می دهد که میان خصوصیات فنوتیپی مختلف سویه های اشریشیا کلی مانند مقاومت به کینولون ها و خصوصیات ژنوتیپی مانند وجود گروه های فیلوژنتیکی مختلف و عوامل حدت ارتباط وجود دارد. هدف از انجام این مطالعه بررسی ارتباط بین مقاومت به کینولون و فلوروکینولون ها و گروه های فیلوژنتیکی جدایه های اشریشیا کلی با منشأ انسان و دام است. در این مطالعه تعداد 120 جدایه اشریشیا کلی با منشأ انسان(40جدایه مربوط به عفونت ادراری)و دام(40 جدایه با منشأ گوساله های سالم و40 جدایه با منشأ گوساله های اسهالی) مورد بررسی قرار گرفتند. ابتدا مقاومت فنوتیپی جدایه ها نسبت به کینولون (نالیدیکسیک اسید) و فلوروکینولون ها ها (سیپروفلوکساسین و انروفلوکساسین) تعیین و سپس گروه فیلوژنتیکی هر یک از جدایه ها با روش multiplex pcr مشخص گردید. نتایج حاصل مورد آنالیز آماری قرار گرفت. تفاوت معنی داری در مقاومت به نالیدیکسیک اسید در بین جدایه های با منشأ انسان و دام در گروه فیلوژنتیکی a وجود داشت. در گوساله های سالم درصد بالاتری از سویه های مربوط به این گروه فیلوژنتیکی به نالیدیکسیک اسید مقاوم بودند(034/0p=). تفاوت معنی داری در مقاومت به سیپروفلوکساسین در جدایه های با منشأ انسان و دام در گروه فیلوژنتیکی b1 وجود داشت. در جدایه های انسانی در مقایسه با جدایه های گوساله های سالم درصد بالاتری در گروه فیلوژنتیکیb1 به سیپروفلوکساسین مقاوم بودند(028/0p=). مقاومت دارویی در سویه های اشریشیا کلی می تواند با زمینه فیلوژنتیکی و پروفایل حدت مرتبط باشد. انجام مطالعات بیشتر در این زمینه جهت بررسی این ارتباط در جدایه های اشریشیا کلی با منشأ مختلف ضرورت دارد.
فایق خضری محمد رضا نصیری
ایمونوگلوبولین دارای دو شاخه سبک و سنگین است که در سالهای اخیر ایمونوگلوبولین y به عنوان یک آنتی بادی پلی کلونال کاربرد زیادی در تحقیقات پزشکی داشته است. شاخه سبک و سنگین ایمونوگلوبولینy در پرندگان شامل یک ناحیه متغیر و یک ناحیه ثابت می باشد. هدف از پژوهش اخیر، تجزیه و تحلیل ژنتیکی و فیلوژنتیکی توالی ناحیه متغییر و ثابت یا vjc شاخه سبک و ناحیه ثابت یا c شاخه سنگین از ایمونوگلوبولینy مرغ بومی آذربایجان غربی است. بدین منظور 8 قطعه مرغ بومی آذربایجان غربی جمع آوری گردید. پس از استخراج rna از بافت طحال و سنترcdna، تکثیر قطعات 771 و 1201 جفت بازی نواحی شاخه سبک و سنگین ایمونوگلوبولینy توسط آغازگرهای اختصاصی انجام گرفت. قطعات تکثیر شده پس از خالص سازی به صورت رفت و برگشت توالی یابی شدند. تجزیه و تحلیل نتایج، تنوع هاپلوتایپی پایین و 11 جایگاه چند شکلی موجود در توالی ها را نشان داد که از 11 جایگاه 6 جایگاه باعث تغییر در توالی اسید آمینه شدند. توالی های نهایی بدست آمده از زنجیره سبک و سنگین به ترتیب شامل نسبت گوانین+سیتوزین 33/57، 33/66درصد و آدنین+تیمین 67/42،67/33 درصد بودند. نتایج فیلوژنتیکی با استفاده از روش neighber-joining نشان داد، که مرغ بومی آذربایجان در خوشهgallus gallus قرار می گیرد و کمترین فاصله ژنتیکی ازنظر توالی ایمنوگلوبین y نسبت به سایر موجودات دارای ایمونوگلوبولین y با مرغ دارد. کلید واژه: ایمونوگلوبولینy ، بررسی توالی و ساختار، مرغ بومی آذربایجان غربی
محسن زمانیان غلامرضا هاشمی تبار
روش pcrیک روش سریع، حساس، دارای ویژگی بالا و کم هزینه برای تشخیص پاتوژن ها می باشد و می تواند بر روش های معمول تشخیص غلبه کند. سرم به علت کاهش شدید در مهار کننده های pcr نمونه مناسب برای تشخیص بروسلوز می باشد. هدف از این مطالعه ارزیابی سه جفت پرایمر پر کاربرد b4-b5، f4-r2 و jpf-jpr، برای تشخیص بروسلوز از نمونه های سرم دام و انسان به روش pcr و هم چنین تعیین حساسیت آنالیتیک پرایمرها می باشد. تعداد 38 نمونه سرم انسان و 30 نمونه سرم گوسفند در مرحله حاد بروسلوز جمع آوری گردید. یک سوسپانسیون سلولی از بروسلا آبورتوس s19 معادل با لوله 3 مک فارلند تهیه شد. رقت های سریالی 10 برابر از سوسپانسیون سلولی و از رقت های سرمی ]رقت 1همراه با سرم منفی[ تهیه شد. رقت های سرمی به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. dna به روش جوشاندن جداسازی شد. dna جدا شده از سرم به نسبت های 100/1، 200/1، 300/1 و 500/1 رقیق سازی شده و بهترین رقت برای pcr با استفاده از هر سه پرایمر تعیین شد. dna رقت های سرمی و dna نمونه های سرم به نسبت 200/1 رقیق سازی شد و pcr با استفاده از هر سه پرایمر بر روی همه رقت های باکتریایی، رقت های سرمی، رقت های 200/1 و نمونه های سرم انجام شد. مقایسه حساسیت سه پرایمر با آنالیز آماری انجام گرفت. a260/a280 حاصل از 9 نمونه توسط نانودراپ کمتر از 1 بود و بهترین رقت dna سرمی برای هر سه پرایمر 200/1 تعیین شد. از تعداد کل 68 نمونه به ترتیب 54 نمونه (41/79 درصد)، 44 نمونه (70/64 درصد) و 35 نمونه (47/51 درصد)، از نمونه های انسانی 33 نمونه ]84/86 درصد[، 27 نمونه ]05/71 درصد[ و 22 نمونه ]89/57 درصد[ و از نمونه های حیوانی 21 نمونه ]70 درصد[، 17 نمونه ]67/56 درصد[ و 13 نمونه ]33/43 درصد[ با سه جفت پرایمر b4-b5، f4-r2 و jpf-jpr مثبت بودند. b4-b5، f4-r2 و jpf-jpr به ترتیب قادر به شناسایی 9×102، 9 و 9×105 باکتری در 1ml از سوسپانسیون باکتریایی، 9×108، 9×108 و 9×108 باکتری در 1ml از سوسپانسیون سرمی و 9×104، 9×105 و 9×107 باکتری در 1ml از رقت 200/1 از رقت های سرمی بودند. تفاوت های بین نتایج برای پرایمرها در مورد نمونه های سرم انسانی و حیوانی به صورت جدا و با همدیگر معنی دار بود. نتایج نانودراپ و تشکیل اسمیر بر روی ژل از وجود مهار کننده ها حکایت داشت. در رقت 1 از dna سرمی هیچ باندی مشاهده نشد اما در رقت های 100/1 تا 500/1 قابل مشاهده بود، بنابراین بهترین کار برای حذف یا کاهش تأثیر مهار کننده ها رقت سازی dna می باشد. پرایمر b4-b5 توانست بیشترین موارد بروسلا در نمونه های سرم و تمام رقت های 200/1 از رقت های سرمی را شناسایی کند. هم چنین f4-r2 توانست تمام رقت های سریالی از باکتری خالص را شناسایی کند. بنابراین در مواقعی که روش جوشاندن برای بروسلا استفاده می شود پرایمر f4-r2 برای باکتری خالص و پرایمر b4-b5 برای سرم، دارای بیشترین حساسیت برای تشخیص بروسلا هستند. جداسازی dna توسط روش جوشاندن سبب کاهش هزینه های مربوط به pcr می شود.
نسرین صفایی محمدرضا باسامی
در چند دهه اخیر اختلالات اندام حرکتی به مشکلی اساسی در سطح گله های طیور گوشتی تبدیل شده است. در کنار عوامل مختلفی که در این رابطه نقش دارند، عوامل عفونی از اهمیت بیشتری برخوردارند. امروزه نکروز سر استخوان ران یا دژنراسیون سر استخوان ران به عنوان مسبب اصلی لنگش در جوجههای گوشتی مطرح است که توسط عوامل عفونی مختلف ایجاد می گردد. در این پایان نامه عوامل عفونی این بیماری مورد شناسایی و بررسی قرار گرفته است. در این تحقیق طی مدت 6 ماه، 450 لاشه متعلق به تلفات 86 گله ارسال شده به بیمارستان ماد ، 3 نمونه از تلفات هر گله که دارای جراحات مشخص - مورد بررسی کالبد گشایی قرار گرفتند. تعداد 4 بیماری بودند، انتخاب و برای کشت باکتری و سایر آزمایشات بیوشیمیایی به کار گرفته شدند. علاوه بر آن نمونه بافت آنها نیز برای تشخیص آسیب شناسی که در آینده انجام خواهد شد جمع آوری گشتند. نمونه مغز استخوان، ابتدا در محیط آگار خون دار کشت داده شدند. باکتری های میله ای گرم منفی به محیط مک کانکی آگار منتقل شدند و آزمایشات بیوشیمیایی لازم برای تعیین گونه آنها انجام شد. باکترهای کوکسی شکل گرم مثبت و کاتالاز مثبت در محیط مانیتول سالت آگار و باکترهای کوکسی شکل گرم مثبت و کاتالاز منفی در محیط بایل آسکولین آگار کشت داده شدند و آزمایشات بیوشیمیایی استاندارد جهت تایید گونه آنها انجام گرفت. در بررسی کالبد گشایی جراحاتی مرتبط با نکروز سر استخوان ران ، همچون تغییرات دژنراتیو در غضروف مفصلی، جداشدن غضروف مفصلی از اپیفیز، شکنندگی و از بین رفتن تمام یا بخشی از یک یا ه fhn هر دو سر استخوان ران مشاهده گردید. بر این اساس، تقریبا در در 305 لاشه متعلق به 61 گله تایید گردید. در آزمایشات باکتری شناسی از 61 نمونه کشت داده شده، 9 نمونه به دلایل مختلف حذف شدند. از 52 نمونه کشت باقی مانده ، 50 مورد باکتری اشریشیا کلی، 1مورد باکتری اشریشیا کلی به همراه استافیلوکوکوس اورئوس و 1 مورد اشریشیا کلی به همراه استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس شناسایی شدند. لازم به ذکر است که در هیچ موردی انتروکوک ها یا سایر باکتری ها جدا نگشتند. نتایج حاصل از به طور گسترده در سطح گلههای گوشتی وجود دارد که علاوه بر fhn این مطالعه نشان می دهد که تاثیر منفی بر آسایش و رفاه جوجه های گوشتی، زیان های مالی بسیار بالایی نیز بر دوش پرورش دهندگان خواهد گذاشت. بر اساس نتایج به دست آمده، اشریشیا کلی عامل عفونی اصلیِ بیماری است. این نتایج مطابق یافته سایر محققانی است که باکتری اشریشیا کلی را مسبب اصلی لنگش در طیور صنعتی معرفی کرده اند.
مهرداد آهوران غلامرضا هاشمی تبار
چکیده استفاده از روش الایزای غیر مستقیم و مقایسه با آزمایشات رزبنگال، رایت، 2 مرکاپتواتانول در تشخیص سرولوژیکی بروسلوز گاوی مقدمه و هدف: تب مالت یکی از بیماری های شایع مشترک انسان و دام در سطح جهان است. این بیماری مزمن و مسری به طور عمده از گاو، گوسفند، بز، خوک و شتر و از طریق تماس مستقیم با خون، جفت، جنین و یا ترشحات رحم و یا از طریق مصرف محصولات آلوده حیوانی خام منتقل می شود .بروسلوز در ایران آندمیک است .هدف از این مطالعه، مقایسه تست های سرولوژی برای تشخیص بروسلوز بود. مواد و روش ها: نمونه خون از 92 گاو (واکسینه شده و واکسینه نشده) جمع آوری شد. برای جداسازی سرم 10 میلی لیتر خون با استفاده از یک لوله استریل از رگ واگ از گاو به دست آمده و در دو لوله قرار گرفتند، اولین لوله حاوی ماده ضد انعقاد (edta)، و لوله دیگر بدون ماده ضد انعقاد بود. پس از سانتریفوژ نمونه ها( 6000 دور به مدت 5 دقیقه)، تا انجام تست ها نمونه های سرم در دمای °c 20- نگهداری شد. تشخیص بروسلوز توسط الایزا غیر مستقیم (i.elisa)، رزبنگال، 2 مرکاپتو اتانول و رایت انجام گرفت. تجزیه و تحلیل داده ها با استفاده از نرم افزار spss16 انجام شد. نتایج: فراوانی شیوع بروسلوز با استفاده از روش های رایت، 2 مرکاپتو اتانول، رز بنگال و الایزا غیر مستقیم به ترتیب50 درصد (46 مورد) ، 3/42 درصد (39 مورد) ،2/78%(72 مورد) و 6/82% (76 مورد) بوده است. ویژگی و حساسیت الایزا غیر مستقیم بالاتر از تست های دیگر بود. بحث: پیشگیری از بروسلوز عمدتا شامل آموزش و پرورش ،کنترل و بهداشت شخصی است. باید سعی شود مقامات مسئول در جریان این بیماری قرار گیرند. نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد ویژگی و حساسیت آزمون الایزا غیر مستقیم بیشتر از سایر روش ها است؛ بنابراین، تشخیص بروسلوز با استفاده از این تست توصیه می شود. واژه های کلیدی: گاو، تب مالت، الایزا غیر مستقیم، روش رزبنگال
فهیمه یادگار جمشید رزمیار
کلستریدیوم پرفرینجنس که یکی از باکتری های بیماری زا با گسترش بسیار در محیط می باشد، باسیلی بی¬هوازی، گرم مثبت و اسپوردار است. کلستریدیوم پرفرینجنس را بر اساس چهار توکسین عمده و کشنده حاصل از آن (آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا) به پنج تیپ از a تا e تقسیم می کنند. بجز سموم اصلی فوق الذکر، حداقل سیزده توکسین کم اهمیت تر دیگر که در پاتوژنز بیماری نقش دارند، نیز شناخته شده اند که شامل توکسین های دلتا، تتا، کاپا، لامبدا، مو، نو، گاما، اتا، نورآمینیداز و اوره¬¬ آز، انتروتوکسین،netb، b2 می¬باشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی حضور ژن توکسین¬های اصلی و توکسین¬های netbو tpelو cpb2 total در 44 ایزوله اخذ شده از 25 گله گوسفندی و 19 گله مرغی می¬باشد. از 25 ایزوله گوسفندی ، 16 ایزوله درگیر با بیماری انتروتوکسمی و 9 ایزوله از لحاظ این بیماری سالم بودند. در بین ایزوله¬های گوسفندی مبتلا به آنتروتوکسمی 10(5/62%) ایزوله تیپ a و6(5/37%) ایزوله تیپ c شناسایی شدند. از 9 ایزوله سالم گوسفندی 6(6/66%) ایزوله تیپ a و3(3/33%) ایزوله تیپ c بودند. در بین 19 ایزوله مرغی،10 ایزوله مربوط به موارد درگیر با آنتریت نکروتیک بود که 9 (90%)ایزوله از موارد بیمار تیپ a و 1(10%) ایزوله تیپ c بود. از 9 ایزوله مرغی سالم 5(5/55%) ایزوله تیپa بودند و 4(4/44%) ایزوله تیپ c بودند. در نمونه¬های گوسفندی درگیر با آنتروتوکسمی، در مجموع ژن cpb2 حاصل از دو آزمایش (single pcr و multiplex pcr)، در 14(5/87%) ایزوله حضور داشت و در نمونه¬های گوسفندی سالم در مجموع ژن cpb2 حاصل از دو آزمایش (single pcr و multiplex pcr)، در5 (5/55%) ایزوله حضور داشت. در نمونه¬های مرغی درگیر با آنتریت نکروتیک، در مجموع ژن cpb2 حاصل از دو آزمایش (single pcr و multiplex pcr)، در 9(90%) ایزوله حضور داشت و در نمونه¬های مرغی سالم در مجموع ژن cpb2 حاصل از دو آزمایش (single pcr و multiplex pcr)، در7 (7/77%) ایزوله حضور داشت.
جواد سودمند غلامعلی کلیدری
اکثر انتروکوک ها میزبان طبیعی دستگاه گوارش پرندگان، پستانداران و انسان هستند. امروزه با شیوع انتروکوک های مقاوم به آنتی بیوتیک ها و با پخش جهانی در پرنده ها و افزایش بیماری های مربوط به انتروکوک ها به خصوص انتروکوکوس فکالیس، انتروکوکوس فیسیوم، انتروکوکوس دورانس و انتروکوکوس هیره، که باعث بیماری های اندوکاردیت، سپتمی سمی حاد، عفونت های کیسه زرده، سلولیت، تورم پلک و ملتحمه، آرتریت، آمیلوئید مفصلی، استئومیلیت، سالپنژیت و سالپنژیت ـ پریتونیت که باعث ایجاد خسارات به علت مرگ و میر، کاهش عملکرد و نیز حذف لاشه های طیور میشوند. هدف این مطالعه جدا سازی انتروکوکوس ها از کلواک و محوطه دهانی پرندگان (ماکیان، طوطی سبز، دلیجه، سار، عقاب طلایی، کلاغ، مینا، کبوتر، قناری، فنچ آفریقایی، طوطی برزیلی، طوطی استرالیایی، اردک، طوطی کاسکو، کاکاتیل، بلبل هزار دستان، یاکریم، بالابان، قرقاول، کبک) و تعیین هویت تا حد گونه به روش تست های بیوشیمیایی، و همچنین تعیین الگوی مقاومت به انتی بیوتیک ها به روش دیسک دیفیوژن در گونه های ایزوله شده بود. در این مطالعه 56 گونه ایزوله جداسازی و تعیین هویت گردید که بیشترین گونه ایزوله به ترتیب انتروکوکوس فکالیس 67.8%، سپس انتروکوکوس فاسیوم 17.9%، انتروکوکوس موندتی 7.2%، انتروکوکوس گالیناروم 3.5%، انتروکوکوس رافینوسوس 1.8% و انتروکوکوس مالودراتوس 1.8% مشخص گردید. که از این 56 ایزوله 64.3% از پرندگان سالم و 35.7% از پرندگان بیمار با علائم اسهال، عدم وزن گیری، بی حالی و ژولیدگی پرها و عفونت تنفسی که به بیمارستان دامپزشکی مشهد مراجعه نموده، ، که %71.4 جدایه ها مربوط به نمونه های اخذ شده از کلواک و 28.6% از محوطه دهانی بوده است. همچنین در تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیک به روش دیسک دیفیوژن انتروکوک ها به ترتیب بیشترین مقاومت دارویی به آنتی بیوتیک های سفازولین، سفتریاکسون،سفالکسین، فلومکوئین، تیامولین، اکسی تتراسایکلین، استرپتومایسین، و بیشترین حساسیت به آنتی بیوتیک های آموکسی سیلین و فلورفنیکول مشاهده گردید.
کلثوم اسدپور رحیم آبادی غلامرضا هاشمی تبار
مقدمه و هدف: عفونت دستگاه ادراری دومین عامل شایع عفونت در بدن انسان می باشد. اشریشیا کلی شایع ترین باکتری عامل عفونت ادراری می¬باشد. افزایش مقاومت آنتی بیوتیکی اشریشیا کلی باعث افزایش شکست درمان می¬شود. این مطالعه جهت تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی e.coli در نمونه¬های ادراری بیماران چند بیمارستان¬ شهرستان رشت طراحی شده است. مواد و روش ها: جدایه¬های اشریشیا کلی از نمونه¬های ادرار بیماران بستری مبتلا به عفونت ادراری که آنتی بیوتیک دریافت نکرده بودند، جدا گردید و آنتی بیوگرام انجام گرفت. روش دیسک ترکیبی نیز برای تشخیص سویه¬های مولد بتا- لاکتاماز (esbl) مورد استفاده قرار گرفت. داده¬ها با استفاده از نرم افزار spss version 19 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. یافته ها: از 195 جدایه اشریشیا کلی جدا شده، به ترتیب 93/76 و 07/23 درصد زنان و مردان دارای عفونت بودند. بیشترین میزان مقاومت از پنی سیلین¬ها نسبت به اگزاسیلین و آمپی سیلین و در مورد سفالوسپورین¬ها به سفالوتین و کمترین مقاومت نسبت به سفوکسیتین بود. در بین کینولون¬ها نیز بیشترین مقاومت نسبت به نالیدیکسیک اسید مشاهده گردید. همچنین کمترین مقاومت نسبت به جنتامایسین، نیتروفورانتوئین و سفوکسیتین به ترتیب 2/8، 71/8 و 79/11 درصد بود. 92/36 در صد سویه¬ها نیز مولد (esbl) بودند. بحث و نتیجه گیری: بیشترین حساسیت برای ایمی پنم مشاهده شد. با توجه به نتایج این مطالعه انجام آنتی بیوگرام دقیق با استفاده از دیسک¬های مناسب، تجویز منطقی آنتی بیوتیک¬ها و مصرف خودسرانه آنتی بیوتیک ضروری است.
رضا ولدان علیرضا رفیعی
سرطان پستان شایع¬ترین و مهم ترین بدخیمی در بین زنان در سراسر دنیا است. سلول¬های سرطانی از مسیرهای سیگنالینگ مختلف و متعدد گیرنده¬های خانواده فاکتور رشد اپیدرمال، جهت مقاومت به آنتی¬بادی-های ضد سرطانی مثل trastuzumab بهره می برند. مسیرهای سیگنالینگ همپوشان گیرنده های erbb1 و erbb2 از مهم ترین علل شکست استراتژی های درمانی در سرطان پستان می باشد. هدف از این مطالعه تولید آنتی بادی های نوترکیب انسانی علیه اپی¬توپ مشترک گیرنده های erbb1 و erbb2 به جهت مهار همزمان مسیر سیگنالینگ این دو گیرنده است. گیرنده های erbb1 و erbb2 به صورت پایدار در سلول vero بیان شدند. انتخاب آنتی بادی علیه اپی¬توپ مشترک گیرنده های erbb1و erbb2 از طریق روش subtractive phage display انجام شد. آنتی بادی های انتخاب شده الگو یکنواخت fingerprinting در چرخه سوم انتخاب نشان دادند. آنتی¬بادی¬های به دست آمده در آزمون phage-elisa قابلیت اتصال جداگانه به هر کدام از گیرنده ها و قابلیت اتصال همزمان به هر دو گیرنده را نشان دادند. بعلاوه این آنتی بادی ها توانایی شناسایی همزمان گیرنده¬های خالص شده erbb1 و erbb2 را در آزمون وسترن بلات داشتند. از طرف دیگر آنتی بادی های نوترکیب تولید شده ضد دامین شماره 2 گیرنده erbb1 در آزمون phage-elisa قابلیت اتصال به گیرنده erbb1 تحریک شده با egf را داشتند. بعلاوه این آنتی¬بادی¬ها از لحاظ عملکردی قادر به مهار دایمریزاسیون گیرنده¬های erbb1 و erbb2 در تست مهار دایمریزاسیون نیز بودند. با در نظر گرفتن اهمیت هدف قرار دادن همزمان گیرنده های خانواده فاکتور رشد اپیدرمال، آنتی بادی های تولید شده علیه اپی-توپ مشترک گیرنده های erbb1 و erbb2 به عنوان آنتی بادی های نوین در مهار همزمان این دو گیرنده و درمان سرطان پستان مطرح هستند
محمد معینی غلامعلی کلیدری
هدف این تحقیق مطالعه¬¬ی جداسازیِ استرپتوکوکوس¬های گروهc و d (غیرانتروکوکی) پرندگان (ماکیان، طوطی سبز، دلیجه، سار، عقاب طلایی، کلاغ، مینا، کبوتر، قناری، فنچ آفریقایی، طوطی برزیلی، طوطی استرالیایی، اردک، طوطی کاسکو، کاکاتیل، بلبل هزار دستان، یاکریم، بالابان، قرقاول، کبک) ارجاعی به بیمارستان دامپزشکی دانشگاه فردوسی مشهد و تعیین هویت تا حد گونه به روش تست¬های بیوشیمیایی و همچنین تعیین الگوی مقاومت به انتی بیوتیک¬ها به روش دیسک دیفیوژن در گونه¬های ایزوله شده بود. در این مطالعه 42 ایزوله جداسازی و تعیین هویت گردید که بیشترین گونه به ترتیب استرپتوکوکوس دیس آگالاکتیه 76%، سپس استرپتوکوکوس گالولیتیکوس5/9%، استرپتوکوکوس¬زواپیدمیکوس 7%، استرپتوکوکوس موتانس 5/4%، استرپتوکوکوس سوئیس 3% مشخص گردید. که از این 42 ایزوله 5/40% از پرندگان سالم و 5/59% از پرندگان بیمار با علائم اسهال، عدم وزن¬گیری، بی¬حالی و ژولیدگی پرها و عفونت تنفسی که به بیمارستان دامپزشکی مشهد مراجعه نموده، که 3/75% جدایه ها مربوط به نمونه¬های اخذ شده از کلواک و 7/24% از محوطه دهانی بوده است. همچنین در تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیک به روش دیسک دیفیوژن، استرپتوکوکوس¬ها به ترتیب بیشترین مقاومت دارویی به آنتی بیوتیک¬های سفازولین، سفتریاکسون، سفالکسین، فلومکوئین، اکسی تتراسایکلین، استرپتومایسین، تیامولین، تایلوزین، داکسی سیکلین، نئومایسین و بیشترین حساسیت به ترتیب به آنتی بیوتیک¬های آموکسی سیلین، ونکومایسین، پنی سیلین و فلورفنیکول را نشان دادند.
سید مصطفی صداقت غلامرضا هاشمی تبار
آنتی بیوتیک درمانی به عنوان ابزاری ابتدایی برای کنترل ورم پستان در گاوهای شیری و خشک محسوب می شود. مقاومت آنتی بیوتیکی ارتباط نزدیکی با استفاده نادرست از ترکیبات ضد میکروبی دارد، در این رابطه کنترل حساسیت ضد میکروبی در مورد پاتوژنهای عامل ورم پستان بسیار حائز اهمیت می باشد