هیدروژل ها به طور گسترده در سیستم های انتقال دارو به ویژه در ساختن لنزهای تماسی استفاده شده اند. در این تحقیق اثر ph و دما بر جذب و رهاشدن لیزوزیم از دو نوع پلیمر زیست سازگار مطالعه گردید. هدف از این مطالعه تعیین شرایط بهینه برای امکان انتقال چشمی این آنزیم بود. لیزوزیم خواص ضد باکتریایی و ضد ویروسی دارد و به علت دارا بودن ساختمان فشرده می تواند به درون لنزهای تماسی هیدروژلی به دام بیفتد. در عمل دیسک های هیدروژل پلی اکریل آمید و phema به درون محلول بافر فسفات/ لیزوزیم غوطه ور شدند و آنزیم به درون ژل بارگیری شد. میزان رها شدن آنزیم از لنز با قرار دادن هیدروژل های بارگیری شده از لیزوزیم در محلول بافر فسفات تازه تهیه شده، محاسبه شد. فعالیت آنزیم قبل از جذب و بعد از رهاسازی از هیدروژل ها، تعیین شد. این سنجش بر اساس لیز دیواره سلولی باکتری micrococcus lysodeikticus بود. میزان عبور نور از هیدروژل هیدراته، توسط اسپکتروفتومتر uv-visible اندازه گیری شد. تورم پذیری دیسک های خشک هنگامی که در بافر فسفات 25 درجه سانتی گراد غوطه ور شدند، تخمین زده شد و نسبت تورم ژل در یک محدوده از ph محاسبه شد. هیدروژل های فاقد و واجد لیزوزیم، از طریق تکنیک های مختلفی از قبیل ftir (اسپکتروسکوپی مادون قرمز)، dsc (کالریمتری روبشی تفاضلی) و sem (میکروسکوپی الکترونی روبشی) مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج نشان داد که بیشترین جذب لیزوزیم به هیدروژل ها در دمای 37 درجه سانتی گراد و 2/6ph= انجام شد. فعالیت آنزیم در نتیجه جذب و رها شدن از هیدروژل، تغییر قابل توجهی نکرد. لیزوزیم در تورم پذیری و میزان عبور نور هیدروژل تغییر چشمگیری ایجاد نکرد. طیف ftir هیدروژل-های فاقد و واجد لیزوزیم، مشابه بودند. مطالعات dsc، افزایش tg هیدروژل را در حضور لیزوزیم نشان داد.

لیزوزیم یک مولکول کلیدی در سیستم ایمنی غیر اختصاصی است و ویژگی های آنتی باکتریال بالایی دارد. این آنزیم در سیستم دفاعی بسیاری از گونه ها، نقش اساسی در انهدام و سرکوب گونه های بیماری زای باکتریایی و میکروارگانیسمهای عفونی دارد. توانایی لیزوزیم در هیدرولیز پیوند گلیکوزیدی دیواره سلولی باکتری، آن را یک مولکول مهم دفاعی ساخته است. لیزوزیم یک آنزیم شناخته شده در بیشتر ارگانیسمها و بافتهای دارای فعالیت آنتی باکتریال است، اگرچه در گونه های دریایی بیشترین میزان آن در بافتهایی مانند کلیه و طحال یافت شده است. در این بررسی، جهت استخراج و کلون کردن ژن لیزوزیم از بافت فوق کلیه ماهی سفید دریای خزر(rutilusfrisiikutum)cdna آن ساخته شد. طراحی پرایمر بر اساس گونه های مشابه صورت گرفت و تکثیر ژن باروش rt-pcr انجام شد. کلونینگ ژن به روش ta کلون در دو سویه باکتری اشریشیا کلای انجام شد. نتایج پس از استخراج پلاسمید حاکی از کلون شدن ژن بود.

ماهیان سفید پس از بلوغ جنسی عمدتا همه ساله تخم ریزی می کنند. شواهدی در دست است که نشان می دهد درصدی از ماهیان سفید بالغ از نظر تولید مثلی غیر فعال هستند و در تخمریزی سالیانه شرکت نمی کنند. این پژوهش به منظور بررسی سطوح شاخص ویتلوژنین پلاسما و دیگر فاکتورهای بیوشیمیایی مرتبط با تولید مثل در ماهیان سفید ماده غیر فعال و فعال انجام شد. ماهیان سفید ماده (سایز بزرگتر از 35 سانتی متر) در فصل تولید مثل طی 2 مرحله در ماه های اسفند سال90 و فروردین91 (به تعداد 35 عدد) از قسمت جنوب غرب دریای خزر صید شدند. در هر مرحله بلافاصله پس از صید از ماهی خونگیری(5سی سی) شد و نمونه های خون و ماهی ها به آزمایشگاه انتقال داده شدند. شاخص های وزنی گناد(gsi)، کبد(hsi) و چربی احشائی محاسبه شد. شاخص ویتلوژنین(alp)، میزان هورمون استرادیول(e2)، کلسیم و پروتئین کل پلاسما اندازه گیری شد. مراحل رسیدگی جنسی تخمک ابتدا از طریق ماکروسکوپی و سپس میکروسکوپی(بافت شناسی) تعیین شدند. ماهیان غیر فعال دارای تخمک های توسعه نیافته (مرحله 1 و2 رسیدگی جنسی) در تخمدان بودند. این در حالی است که ماهیان فعال دارای تخمک های کاملا توسعه یافته (مرحله 5) در تخمدان بودند. میزان هورمون 17- بتا استرادیول، alp ، کلسیم و پروتئین کل پلاسما در ماهیان غیر فعال تولید مثلی به طور قابل ملاحظه ای کمتر از ماهیان فعال بود. نتایج حاصله گویای آن است که در ماهیان سفید ماده غیر فعال به دلیل کاهش ترشح استرادیول و در نتیجه عدم تحریک کبد به سنتز ویتلوژنین، میزان alpپلاسما کاهش داشته و در نتیجه پروتئین کل و کلسیم پلاسما نیز کاهش می یابد.

دمای بهینه فعالیت آنزیم 60 درجه سانتی گراد ph بهینه فعالیت آنزیم 8-6 یونهای ca,mg,na اثرفعال کننده و یونهای co,fe,cu,cd اثر مهار کننده بر فعالیت آنزیم دارد نیمه عمر غیر فعالسازی حرارتی آنزیم در عدم حضور کلسیم در دماهای 50و60و70 درجه سانتیگراد به ترتیب 25و17و12 دقیقه و نیمه عمر غیر فعالسازی حرارتی آنزیم در دمای 50و60و70 درجه سانتیگراد به ترتیب 60و50و40 دقیقه تعیین گردید که نشان میدهد کلسیم سبب افزایش پایداری آنزیم در دماهای بالاتر می شود همچنین آنزیم درحضور sds نسبت به اوره و تریتون x100 سریع تر غیر فهال می شود در حضور غلظتهای مختلف nacl مشاهده می شود که با افزایش غلظت نمک فعالیت آنزیم کاهش یافته و در غلظت بیش از یک مولار نمک آنزیم غیرفعال می شود

- متالو پروتئاز ها گروه مهمی از پروتئاز ها می باشند که کاربرد های صنعتی مختلفی در سنتز پپتید، پردازش پروتئین و صنایع غذایی، دارویی و شوینده دارند. الاستاز یکی از آنزیم های این خانواده است. طی مطالعات پیشین آنزیم کایمری از الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا طراحی شد و تلاش های زیادی برای تخلیص این آنزیم با استفاده از انواع روش های کروماتوگرافی صورت گرفت که به خلوص نسبی آنزیم دست یافت. در تحقیق حاضر جهت تخلیص بیشتر این آنزیم دو راه کار مورد استفاده قرار گرفت. در نخستین راه کار، مهندسی پروتئین به گونه ای که توالی-های رمز گردان 3 امینو اسید انتهای کربوکسی آنزیم شامل سرین، آلانین و لوسین و آمینو اسیدهای لایزین، لوسین آلانین، آلانین و آلانین موجود در وکتور pet-21a+ حذف گردد، به عنوان هدف در نظر گرفته شد. بدین منظور پرایمر reverse جدیدی طراحی شد. اغلب این امینو اسید ها آب گریز هستند و قبل از دنباله ی هیستیدینی قرار دارند و احتمال می رفت برش آنها توسط آنزیم مانع از اتصال آنزیم به ستون کروماتو گرافی تمایلی نیکل و در نتیجه مانع از امکان تخلیص آنزیم توسط این روش شود. در راه کار دوم از رسوب دهی و جدا سازی پروتئین های میزبان بیانی از آنزیم الاستاز وحشی و نو ترکیب با استفاده از شوک حرارتی و حلال های آلی متانول و دی متیل فرمامید استفاده شد. در نهایت با استفاده از شوک حرارتی آنزیم کایمر با خلوص نسبتا بالا به دست آمد. هم چنین در مورد آنزیم وحشی خلوص نسبی با رسوب دهی توسط متانول حاصل گردید.

زخم های پپتیک جزء شایع ترین و پرهزینه ترین بیماری های شناخته شده در انسان است. تشخیص آن در مراحل اولیه می تواند مزیت بزرگی در درمان بیماری باشد. بزاق دارای انواع مختلفی از بیومارکرهاست که در طی چند سال گذشته به عنوان یک مایع تشخیصی مورد توجه محققین قرار گرفته است. هدف از این مطالعه مقایسه تغییرات فعالیت آنزیم های بزاقی در بین بیماران مبتلا به زخم پپتیک و افراد سالم و هم چنین تخلیص آنزیم آلکالین فسفاتاز بزاق و تعیین خصوصیات سینتیکی آن است. دو گروه هر کدام تشکیل شده از 26 شرکت کننده (13 مرد و 13 زن) بیماران مبتلا به زخم پپتیک و گروه کنترل سالم انتخاب شدند. فعالیت آنزیم های انتخابی بزاق از طریق روش اسپکتروسکوپی اندازه گیری شد. جهت تخلیص آنزیم آلکالین فسفاتاز بزاق از کروماتوگرافی تعویض یونی و ستون deae استفاده شد. نتایج افزایش معنی داری از فعالیت آنزیم های آلکالین فسفاتاز، آسپارتات آمینوترانسفراز، هم چنین آلانین آمینوترانسفراز و غلظت توتال پروتئین در بزاق بیماران مبتلا به زخم پپتیک در مقایسه با گروه کنترل نشان داد. در این مطالعه پارامترهای سینتیکی km و vmax آنزیم آلکالین فسفاتاز بزاقی به ترتیب 22/3 و 037/0 به دست آمد. بر پایه نتایج بدست آمده می توان نتیجه گرفت که زخم پپتیک ممکن است در مراحل اولیه با تعیین فعالیت آنزیم های بزاقی تشخیص داده شود. بنابراین بزاق می تواند به عنوان یک مایع تشخیصی پیشنهاد شود.

گونه های اکسیژنی فعال (ros)، هم در سلول های نرمال و هم در سلول های تحت تنش تولید می شوند. گیاهان دارای سیستم دفاعی پیشرفته ای برای مقابله با ros هستند که هم می تواند تولید آنها را محدود کند و هم باعث حذف آنها می گردد. در داخل سلول آنزیم های سوپراکسید دیسموتاز، که تبدیل آنیون های سوپراکسید را به o2 و h2o2 کاتالیز می-کنند، اولین خط دفاعی در برابر ros را تشکیل می دهند. بنابراین آنزیم سوپراکسید دیسموتاز به صورت بالقوه برای درمان اختلالات التهابی مفید است. در این تحقیق، تخلیص آنزیم سوپراکسید دیسموتاز از گیاه چای، که غنی از آنتی-اکسیدان ها است، انجام گرفت. روش تخلیص شامل استخراج عصاره ی آنزیمی توسط بافر فسفات و به دنبال آن استفاده از ستون تعویض یونی deae است. فعالیت ویژه ی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز u/mg protein 74/0 بدست آمد. آنالیز توسط ژل sds-page باندی در نزدیکی kda 50 را نشان داد. ph بهینه برای این آنزیم 5/7 محاسبه شد و دمای بهینه نیز ?c25 بدست آمد. آنزیم تخلیص شده دارای mm 73/0= km یا سوبسترای nbt بود و vmax برای این آنزیم ?mol/min 09/12 محاسبه شد. در بخش دیگری از این مطالعه، اثر ارتفاع بر فعالیت و خصوصیات سینتیکی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز بررسی شد. به این منظور، برگ گیاه چای از سه ارتفاع 534، 305 و 50 متر برداشت شد و مورد آزمایش قرار گرفت و تفاوت قابل توجهی در فعالیت و خواص سینتیکی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز در سه ارتفاع مختلف مشاهده شد.

دود سیگار، حاوی ترکیبات شیمیایی مختلفی است که می¬توانند ایجاد¬¬¬¬کننده و تشدید ¬کننده¬ بسیاری از بیماری¬ها شود و علاوه بر افراد سیگاری، برای کسانی که با آنها زندگی می¬کنند نیز خطرناک است. بزاق به عنوان یک مایع زیستی، زودتر از سایر مایعات بدن در معرض دود سیگار قرار می گیرد و تغییرات عمده ای را نشان می دهد که به راحتی قابل ردیابی است. در این تحقیق اثر دود سیگار روی آنزیم های آنتی اکسیدان بزاقی بررسی گردید. آنزیم¬های پراکسیداز،سوپر¬اکسید¬دیسموتاز و کاتالاز موجود در بزاق، در حفظ و نگهداری دستگاه گوارش و حفره¬ دهانی از صدمات محیطی و داخلی حایز اهمیت می¬باشند. در بخش عملی این پژوهش، 25 نفر از افرادی که با افراد سیگاری زندگی می¬کردند و 25 نفر که هیچ تماسی با دود سیگار نداشتند، همگی مرد و 20 تا 25 سال انتخاب شدند و بزاق غیر تحریکی آنها در فالکن های استریل جمع آوری و بعد از سانتریفیوژ کردن تا انجام آزمایش ¬ها در فریزر نگهداری شد. سپس فعالیت آنزیم های بزاقی پراکسیداز ، سوپر¬اکسید -دیسموتاز و کاتالاز، با استفاده از سوبسترای هر آنزیم در بافرهای مشخص و شرایط ویژه تعیین گردید. نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که فعالیت بیولوژیکی آنزیم های آنتی¬اکسیدانی پراکسیداز، سوپر¬اکسید¬ دیسموتاز و کاتالاز موجود در بزاق افرادی که در معرض دود سیگار بودند به ترتیب 4/54، 4/21 و 7/31 درصد نسبت به گروه شاهد کاهش داشت. بر اساس این نتایج می توان پیش بینی نمود که ترکیبات شیمیایی موجود در دود سیگار علاوه بر اینکه برای خود فرد سیگاری مضر است در غیر سیگاری های مرتبط با او نقش بازدارنده برای فعالیت آنزیم های مهم آنتی اکسیدان دارد.