نام پژوهشگر: محدثه محبوبی
محدثه محبوبی طاهره فلسفی
پروتئین oipa (outer inflammatory protein a) یکی از مهمترین ادهزینهای h. pylori و کاندید مناسبی برای ساخت واکسن است. ژن آن تحت تنظیم وضعیت on-off در ارتباط با بیان پروتئین oipa است. هدف از این مطالعه به دست آوردن یک کلون نوترکیب (با وضعیت on) از یک ایزوله بالینی h. pylori با میزان بیان بالا برای پروتئین غشای بیرونی (omp) با وزن مولکولی kda 35-33 است. برای تکثیر ژن oipa از سویه ایرانی، پرایمر اختصاصی این ژن بر اساس توالی oipa سویه استاندارد b8 h. pylori طراحی شد و با استفاده از این پرایمر ژن تکثیر و محصول pcr جهت تعیین توالی به genebank ارسال شد. پلاسمید pet28a و e. coli dh5α برای همسانه سازی و ترانسفورماسیون انتخاب شد. به منظور بیان پروتئین پلاسمید نوترکیب حاوی ژن oipa (pet28a-oipa) در e. coli bl21(de3) ترانسفورم شد. پروتئین oipa از باکتری جداسازی و تخلیص شد و حضور پروتئین oipa با استفاده از آنتیبادی مونوکلونال آنتی his-tag و آنتی بادی اختصاصی بر علیه پروتئین 35-33 کیلودالتون تأیید گردید. کارایی محافظتی پروتئین oipa و برهموم به عنوان ادجوان در محافظت از موش c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori تعیین شد. چهار گروه از موشها به صورت مخاطی پروتئین oipa (واکسن)، پروتئین oipa و برهموم (واکسن- آدجوان)، برهموم (آدجوان) و pbs (کنترل) را دریافت کردند. سویه h. pylori b19 (caga+/vacas1m2) که از نمونه بیوپسی با علائم بالینی التهاب شدید گرفته شده بود، به طریق داخل معدهای برای آزمایشات ارزیابی ایمنی در موش استفاده شد. کولونیزاسیون h. pylori، شاخص التهاب در معده و میزان تیتر iga در سرم خون موشها با روش شمارش باکتری (cfu)، پروتوکلهای هیستوپاتولوژیکی استاندارد و الایزا تعیین گردید. توالی ژن oipa حضور قطعه 924 جفت بازی مرتبط با پروتئینی با وزن مولکولی 34 کیلودالتون را نشان داد (kj816695). میزان مشابهت ژن oipa با سایر ژنهای oipa منتشر شده در ncbi برابر 96-92% تعیین گردید. بیشترین مشابهت با کلون oipa مکزیکی مشاهده شد. میزان بار باکتریایی و شاخص التهاب به طور مشخصی در گروه موشهای کنترل در مقایسه با گروه واکسن (oipa) بالاتر بود. تیتر iga آنتی oipa به طور مشخصی در گروه واکسن در مقایسه با سایر گروهها بالاتر بود. در گروه برهموم، کاهش کمتری در بار میکروبی و شاخص التهاب در مقایسه با گروه واکسن مشاهده شد، اما به طور مشخصی از گروه کنترل پایینتر بود. بنابراین برهموم به تنهایی ممکن است به طور جزئی از موشهای c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori محافظت کند. تجویز خوراکی بره موم به عنوان آدجوان همراه با واکسن oipa نسبت به واکسن به تنهایی اثر آدجوانی یا افزایشی نشان نداد. در واقع برهموم در مقابل از اثرات مؤثر واکسیناسیون پروتئین oipa جلوگیری کرد. یک توضیح حضور ترکیبات فنولیک، فلاونوئیدی یا سایر ترکیبات موجود در برهموم است که میتواند روی ساختار آنتیژنیک پروتئین oipa اثر بگذارد و از فعال شدن ایمنی مخاطی توسط oipa جلوگیری کند. نتایج حاصل از این پژوهش بر نقش مهم oipa در بیماریزایی h. pylori تأکید دارد و oipa را به عنوان یک کاندیدای خوراکی در مقابل عفونت h. pylori معرفی میکند.