اهمیت آمینواسیدها به عنوان سازنده پروتئینها که سازنده بدن جانداران و تنظیم کننده فعالیتهای حیاتی بدن میباشد،برهمگان آشکار است.از طرفی اسیدهای آمینه کاربرد گسترده ای درصنایع غذایی، پزشکی، دارویی، شیمیایی وغیره دارد. با این تفاسیر آنالیز آمینواسیدها از اهمیت خاصی بر خوردار است ویکی از تکنیکهای آنالیز این ترکیبات کروماتوگرافی مایع فاز معکوس بوده که قلب این تکنیک ستون کروماتوگرافی وبه تبع، فاز ساکن آن میباشد.کالیکس آرن به عنوان فاز ساکن در کروماتوگرافی مایع توجه محققان رابه خود جلب کرده است.کالیکس آرن یک مولکول ماکروسیکل می باشد که از واحدهای فنل ساخته شده که از موقعیت اورتو توسط پلهای متیلن بهم وصل شده است. علت تمایل به کالیکس در سالهای اخیر برای جداسازی شیمیایی در تجزیه، توانایی آن درتشکیل کمپلکس با مولکولهای خنثی به مانند مولکولهای باردار میباشد.در این کار دو تا از مشتقات جدید کالیکس]4[آرن سنتز وشناسایی شد و به عنوان فاز ساکن بر روی سیلیکاژل (طبق روش موجود در شکل پایان نامه) پیوند داده شد. و در مرحله ی آنالیز جداسازی پنج آمینواسید(تریپتوفان،لوسین،والین،پرولین وهیستیدین) با استفاده از فازهای ساکن سنتزی میسر گردید. در ضمن این فازهای ساکن سنتزی قادر به جداسازی پلی آروماتیکها و آلکیل بنزنها نیز می باشند.

در این طرح برای اندازه گیری اگزازپام در نمونه ادرار ، از روش جدید ، آسان و حساس میکرو استخراج مایع – مایع پخشی جفت شده با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (با آشکارساز فرابنفش) استفاده شده است. اندازه گیری در یک ستون c18 یوروسفر پر شده با ذرات 5 میکرو متری (250میلی متر×6/4 میلی متر) ، تحت شرایط بهینه کروماتوگرافی انجام شد (فاز متحرک مخلوطی از بافر و استو نیتریل با نسبت 50 به 50 بود که به صورت ایزوکراتیک با سرعت جریان 0/1 میلی لیتر در دقیقه به ستون می رسید. دمای ستون 30 درجه سانتیگراد و طول موج اندازه گیری 230 نانو متر بود). فاکتورهای مختلفی مثل ph، نوع و حجم حلال استخراج کننده، نوع و حجم حلال پخش کننده ، زمان استخراج، زمان سانتریفوژ و قدرت یونی محلول که بر میزان استخرج داروی مورد نظر تاثیر گذار هستند، مورد مطالعه قرار گرفته و بهینه شدند. تحت شرایط بهینه استخراج، میزان بازیابی اگزازپام با غلظتاولیه 5/0 میلی گرم بر لیتر، از بافت ادرار % 8/50 بود که این مقدار با کاهش غلظت دارو، افزایش می یافت. حد تشخیص 7/6 نانوگرم بر لیتر ، حد اندازه گیری 3/22 نانو گرم بر لیتر و انحراف استاندارد نسبی برای 5 اندازه گیری در غلظت یاد شده کمتر از % 2/3 بود. به علاوه رفتار خطی بسیار خوب با ضریب همبستگی برابر با 0/1 ، در محدوده خطی مورد مطالعه، برای اگزازپام بدست آمد.

اندازه گیری در یک ستون c18 یوروسفر پر شده با ذرات 5 میکرو متری (250میلی متر×6/4 میلی متر) ، تحت شرایط بهینه کروماتوگرافی انجام شد (فاز متحرک مخلوطی از بافر و استو نیتریل با نسبت 50 به 50 بود که به صورت ایزوکراتیک با سرعت جریان 0/1 میلی لیتر در دقیقه به ستون می رسید. دمای ستون 30 درجه سانتیگراد و طول موج اندازه گیری 230 نانو متر بود). فاکتورهای مختلفی مثل ph، نوع و حجم حلال استخراج کننده، نوع و حجم حلال پخش کننده ، زمان استخراج، زمان سانتریفوژ و قدرت یونی محلول که بر میزان استخرج داروی مورد نظر تاثیر گذار هستند، مورد مطالعه قرار گرفته و بهینه شدند. تحت شرایط بهینه استخراج، میزان بازیابی اگزازپام با غلظتاولیه 5/0 میلی گرم بر لیتر، از بافت ادرار % 8/50 بود که این مقدار با کاهش غلظت دارو، افزایش می یافت. حد تشخیص 7/6 نانوگرم بر لیتر ، حد اندازه گیری 3/22 نانو گرم بر لیتر و انحراف استاندارد نسبی برای 5 اندازه گیری در غلظت یاد شده کمتر از % 2/3 بود. به علاوه رفتار خطی بسیار خوب با ضریب همبستگی برابر با 0/1 ، در محدوده خطی مورد مطالعه، برای اگزازپام بدست آمد.

ویتامین ب12 بزرگ ترین (با وزن مولکولی 4/1355) و پیچیده ترین ویتامین در میان تمام ویتامین هاست و از لحاظ علمی معمولاً به نام سیانو کوبالامین شناخته می شود. این ویتامین محلول در آب، و یکی از هشت ویتامین موجود در ب-کمپلکس می باشد که برای رشد سلول ها مورد نیاز است. از آن جهت که سنتز شیمیایی ویتامین ب12 با بیش از 70 مرحله صرفه ی اقتصادی ندارد این ویتامین به صورت تخمیری توسط میکروارگانیسم های مولد آن تولید می شود. در پژوهش پیش رو، تولید ویتامین ب12، اسید استیک و اسید پروپیونیک توسط باکتری پروپیونی باکتریوم فردنریچی(ptcc 1674) در محیط کشت حاوی پسماند روغن خوراکی (سرخ کردنی) به عنوان منبع کربنی بررسی شده و از روشهای آماری جهت بهینهسازی فرآیند استفاده شد. در ابتدا در فلاسک، مقدار بهینهی روغن خوراکی به مقدار 4 درصد حجمی به دست آمد. پس از آن، از روش طراحی آزمایش پلاکت-بورمن جهت غربالگری عوامل موثر در محیط روغن استفاده شد؛ نتیجهی حاصل از این مرحله، شناسایی 4 عامل 5 و 6 دی متیل بنزیمیدازول، کبالت کلرید شش آبه، سولفات آهن هفت آبه و کلسیم کلرید دو آبه به عنوان عوامل موثر بود. این 4 عامل توسط روش سطح پاسخ بهینه شده و به ترتیب مقادیر 56/35، 69/14، 82/5 و 41/11 میلی گرم بر لیتر برای آن ها به دست آمد. روش سطح پاسخ با اعمال شرایط بهینه بیشینه تولید ویتامین ب12 به مقدار 66/2 میلی گرم بر لیتر را در بر داشت. در نهایت مقادیر بهینه ی حاصل از مرحله ی قبل جهت تولید ویتامین ب 12 در مقیاس بزرگ تر در فرمانتور 5 لیتری به کار گرفته شدند. این مرحله مقدار تولید 74/2 میلی گرم بر لیتر در فرمانتور به دست آمد. نتایج این تحقیق نشان داد پسماند روغن خوراکی می تواند به عنوان یک منبع کربنی با صرفهی اقتصادی در تولید ویتامین ب 12 به کار گرفته شود.