باکتریpseudomonas aeruginosa یک باکتری گرم منفی و پاتوژن فرصت طلب انسانی است. از آنجایی که بوجود آمدن و ظهور سویه های دارای مقاومت چندگانه mdr = multi drug resistant در بخشهای سوختگی رو به افزایش و شاخص ترین مکانیسم مقاومت آنتی بیوتیکی در این پاتوژن سیستم افلاکس (efflux) می باشد در این مطالعه 50 سویه p.aeruginosa از نمونه های سوختگی جمع آوری و مورد بررسی قرار گرفت. مقاومت آنتی بیوتیکی به روش انتشار در آگار در برابر 7 آنتی بیوتیک انجام شد و سپس میزان حساسیت به 2 آنتی بیوتیک به روش میکرودایلوشن صورت گرفت و نتایج به صورت mic بدست آمد. تست های mic یک بار در حضور ماده cccp (کربونیل سیانید m- کلروفنیل هیدرازون) به عنوان مهار کننده سیستم تراوشی وابسته به نیروی محرکه پروتونی و یک بار در غیاب این ماده بررسی شد. سپس از بنزالکونیوم کلراید (bkc) به عنوان سوبسترای اختصاصی پمپ mate استفاده شد و تست های mic به روش میکرودایلوشن در حضور و در غیاب cccp بررسی گردید .در حضور cccp کاهش mic مشاهده شد. به منظور تعیین میزان اختصاصی بودن عملکرد سیستم تراوشی در باکتری p.aeruginosa تجمع سیپروفلوکساسین توسط دستگاه اسپکتروفلوریمتر اندازه گیری شد. سپس حضور ژن سیستم افلاکس mate یا سیستم pmp m به کمک روش pcr در سویه های بالینی جدا شده تکثیر شد. نتایج حاصل از آنتی بیوگرام ایزوله های بیماران سوختگی به شرح زیر است : میزان درصد مقاومت به سیپروفلوکساسین 70% ، کربنی سیلین 26% آمیکاسین 16% پیپراسیلین 11%و ایمی پنم 6 %. mic برای آنتی بیوتیک سیپروفلوکسا سین و افلوکساسین در سویه های مقاوم mg/l 32 بود . میزان mic در حضور cccp در سویه های بیان کننده افلاکس فعال حداقل یک رقت کاهش یافت. سپس میزان mic در حضور cccp در برابر bkc بررسی شد و فقط 3 باکتری که دارای ژن افلاکس pmp m مربوط به پمپ mate بودند و توسط pcr ژن آنها جدا سازی شده بود یک رقت کاهش در میزان mic را نشان دادند. تست تجمع دارو نشان داد که سیستم های تراوشی در این باکتری قادر به تراوش آنتی بیوتیک و bkc است. بااستفاده از روش pcr مشخص شد که 6% درصد از سویه های بالینی مورد مطالعه سیستم تراوشی pmpm را به عنوان عامل ایجاد کننده مقاومت ذاتی چند دارویی در باکتری p. aeruginosa بر روی کروموزوم خود دارند.

چکیده مقدمه تست حساسیت باکتریایی، به روش انتشار دیسک به خصوص در رابطه با باکتری های بیماری زای انسانی نقش عمده ایی در درمان آنتی بیوتیکی ایفا می کند. یکی از مهمترین عوامل تأثیر گذار بر نتیجه ی حاصل از آزمایش انتشار دیسک، نوع، ساختار وکیفیت دیسک مورد استفاده می باشد. هدف این پژوهش مقایسه ی کیفیت و میزان توافق دیسک های آنتی بیوتیکی سه شرکت mast، rosco و padtan teb با تاکید بر بدست آوردن میزان توافق دیسک های آنتی بیوتیکی ساخت داخل در مقایسه با انواع خارجی آن است. مواد و روش ها این مقایسه روی دو نوع محیطquicolor و مولر هینتون اگار به روش انتشار دیسک انجام شد، پس از بدست آوردن داده های خام، با نرم افزار spss و stata، آماره ی kappa را برای داده های مربوطه محاسبه کردیم. cv (coefficient of variation) نیز برای دیسک های آنتی بیوتیکی محاسبه شد. یافته ها و بحث میزان توافق دیسک های تولید داخل در رابطه با آنتی بیوتیک های سیپروفلوکساسین و سفازولین در محیط quicolor یک گزارش شد؛ و آنتی بیوتیک مروپنم دراین میان کمترین توافق را نشان داد. توافق ها در محیط quicolor بیشتر بودند، دیسک های تولید داخل به غیر از مروپنم نشان دهنده ی توافق های خوب وعالی بودند. از 30 مورد cv بدست آمده، به جز در9 مورد بقیه ی موارد کوچکتر یا مساوی 5 درصد گزارش شد که مورد تایید بود. واژگان کلیدی: دیسک آنتی بیوتیکی، انتشار دیسک، محیط کشت quicolor، توافق، آماره kappa، cv

چکیده pseudomonas aeruginosa یکی از مهمترین باکتری های بیماری زای مرتبط با عفونت های بیوفیلمی است. بر اساس بسیاری از تحقیقات بیوفیلم ها به بسیاری از آنتی بیوتیک ها به دلیل ساختار نفوذناپذیرشان مقاوم اند بنابراین برای کاهش مقاومت باکتری ها به آنتی بیوتیک ها بیوفیلم باید حذف شود. در پژوهش حاضر، اثرات عصاره های آبی و بوتانولی دارای ساپونین گیاه cyclamen coum به تنهایی و در ترکیب با سیپروفلوکساسین علیه بیوفیلم های یک، سه و پنج روزه p. aeruginosa مطالعه شد و الگوی پروتئینی بیوفیلم سه روزه تحت تیمارهای مختلف مورد بررسی قرار گرفت. توانایی تشکیل بیوفیلم در دو جدایه استاندارد p. aeruginosa pao1 و p. aeruginosa 8821m و چهار جدایه بالینی توسط روش های پلیت میکروتیتر و pcr مورد بررسی قرار گرفت. عصاره گیری بخش توبرگیاه c. coum توسط سوکسله با اتانول و بوتانول انجام شد. فعالیت ضدمیکروبی و ضد بیوفیلمی عصاره های آبی و بوتانلی گیاه c. coum به تنهایی و در ترکیب با آنتی بیوتیک سیپروفلوکساسین بر سلول های پلانکتونیک، بیوفیلم های یک، سه و پنج روزه p. aeruginosa توسط روش های رقیق سازی و کریستال ویوله بررسی شد. اثرات سمیت سلولی عصاره های گیاه c. coum به تنهایی و به همراه سیپروفلوکساسین بر سلول هایht-29 توسط روش mtt بررسی شد. الگوی پروتئینی بیوفیلم های سه روزه تیمار شده و تیمارنشده p. aeruginosa pao1 توسط روش الکتروفورز دوبعدی مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت پروتئین های با بیان متفاوت، با روش طیف سنجی جرمی تعیین شد. براساس نتیجه pcr، هر 6 جدایه p. aeruginosa ژن cupa را داشتند. میزان ساپونین عصاره بوتانلی g/mlµ 560 و میزان ساپونین عصاره آبی g/ mlµ 145 بود. عصاره بوتانلی بطور معنی داری سبب حذف بیوفیلم های یک و سه روزه p. aeruginosa شد اما عصاره آبی و سیپروفلوکساسین هریک به تنهایی سبب حذف بیوفیلم های یک روزه شدند (p<0.05). با توجه به نتایج بدست آمده، 5/0 ? ?fbec نشان دهنده سینرژیسم (هم افزایی) بین عصاره بوتانلی c. coum و سیپروفلوکساسین برای حذف بیوفیلم بالغ یک و سه روزه می باشد. اما،1 ? ?fbec ? 5/0 نشان دهنده سینرژیسم جزئی بین عصاره آبی c. coum و سیپروفلوکساسین برای حذف بیوفیلم بالغ یک روزه است. هیچ یک از عصاره ها به تنهایی و یا همراه با آنتی بیوتیک سیپروفلوکساسین برای سلول های ht-29 سمی نبودند. بر اساس نتایج بدست آمده از آنالیز maldi-tof، بیان پروتئین هایی که در سنتز آلژینات دخالت داشتند و همچنین سبب تحمل شرایط بی هوازی می شدند، در بیوفیلم های تیمار شده، کمتر و یا اصلا بیان نشد. همچنین الگوی پروتئینی بیوفیلم تیمار شده با ترکیب توام عصاره بوتانلی- سیپروفلوکساسین بسیار شبیه سلول های پلانکتونیک (آزادزی) بود. بر اساس نتایج پروتئومیکس، به نظر می رسد ترکیب توام عصاره بوتانلی حاوی ساپونین گیاه c. coum و سیپروفلوکساسین با مهار کوروم سنسینگ و فعال کردن عملکرد آنزیم algl سبب حذف بیوفیلم p. aeruginosa شد. استفاده از عصاره های گیاهی در ترکیب با مواد ضدمیکروبی مناسب می تواند سبب کاهش دوز موثر داروها، کاهش اثرات جانبی داروها، کمک به حفظ محیط زیست و جلوگیری از تشکیل جدایه های مقاوم شود.

چکیده طی پانزده ماه،170 سویه سودوموناس آئروجینوزا ازنمونه های بالینی ومحیط سه بیمارستان عمومی ویک بیمارستان سوختگی تهران،جمع آوری گردیده است .ابتداهریک ازسویه ها تعیین بیوتیپ شدند وسپس به کمک پیوسین تایپینگ باروش اصلاح شده govan تیپ وساب تیپ پیوسینی هریک ازنمونه ها شناسائی گردید.تیپ های پیوسینی غالب رادراین بررسی pt10 و pt1 و pt3 به ترتیب باتواتر 21/7 درصد 30/6 و 8/8 درصد تشکیل می دادند ساب تیپ های پیوسینی غالب ،ساب تیپ های a,d,b و c به ترتیب با رویداد 18/4 درصد ،14/9 درصد ،12/7 درصد و 9/2 درصد بودند. همچنین تعداد سویه های قابل تیپ بندی بروش پیوسین تایپینگ 95/9 درصد بود . بعلاوه دراین بررسی سنجش حساسیت نسبت به مواد ضدمیکروبی برروی همه نمونه های جداشده انجام شد.آنتی بیوتیکهای بکاررفته برای این آزمون عبارتنداز:آزترئونام - سفتازیدیم- سفتریاکسون - ایمی پنم - سفوپرازون - آمیکاسین - سیزومی سین - پلی میکزین - b جنتامی سین - توبرامایسین - نتیل می سین - تتراسیکلین و کربنی سیلین .98/8 درصد ازسویه های جداشده دارای شاخص مقاومت برعلیه یک یا چندآنتی بیوتیک بودن بیشترین مقاومت برعلیه تتراسیکلین ارویداد 98/2 درصد است وعلیه پلی میکزین b سویه مقاومی جدانگردید . دربین آنتی بیوتیکهای بکاررفته سفتازیدیم موثرترین آنتی بیوتیک بتالاکتامی و آمیکاسین موثرترین آنتی بیوتیک آمینوگلیکوزیدی است . همچنین دراین بررسی مشاهده شدکه درقالب تیپ پیوسین 10 سیزده طرح،درقالب pt1 دره طرح درقالب pt3 شش طرح مقاومت آنتی بیوتیکی وجوددارد. بعلاوه تیپ پیوسینی شایع درچهاربیمارستان موردبررسی تعیین ومشخص گردیدکه در بیمارستان i تیپ پیوسینی 1 با 47/6 درصد ودربیمارستان ii تیپ های پیوسینی 3 و 10 بطورمساوی بامیزان 18/9 درصد بیشترین میزان بروز را دارا بودند. دربیمارستان iii(سوختگی) و iv تیپ پیوسینی 10 به ترتیب با 60 درصد و 25/6 درصد بیشترین میزان وقوع را حائز بود . دراین مطالعه همچنین مشخص گردید که اکثرسویه های مقاوم به آنتی بیوتیک به تیپ پیوسین 10 تعلق دارند و در بیمارستان سوانح وسوختگی)iii(که میزان بروز مقاومت بالاتر می باشد فراوانی این تیپ پیوسینی نیزبالاتراست . ضمنااثرپیوسین برباکتریهای غیرمنسوب ثابت کرد که حساسیت به پیوسین تنهابه سویه های منسوب به سویه مولد ویاگونه های کاملا نزدیک محدودنشده بلکه جنس های غیرمرتبط به سویه مولد پیوسین راهم دربرمی گیرد .