تتراسایکلین همراه با دیگر آنتی بیوتیکها در درمان h.pylori استفاده می شود، اما مقاومت به تتراسایکلین در سویه های جدا شده از بیماران گسترش پیدا کرده و یکی از علل عدم موفقیت در درمان است. مقاومت به تتراسایکلین در باکتری می تواند چندین علت داشته باشد، موتاسیون در ژن 16s rrna ، تغییر نفوذپذیری غشاء و عدم ورود دارو به باکتری، افلاکس تتراسایکلین جهت خارج کردن دارو ، پروتئینهای محافظت کننده ریبوزومی و غیر فعال سازی آنزیمی. در h.pylori مطالعات اندکی بر روی مکانیسمهای دخیل در این مقاومت انجام شده اند و فرضیه های مختلفی بیان گشته اند که تأکید بیشتر بر روی مقاومت از طریق ایجاد موتاسیون در ژن 16s rrna بوده است . اما در مطالعاتی نیز سویه های مقاوم فاقد موتاسیون شناسایی شده اند . در مورد نقش پروتئینهای افلاکس تتراسایکلین مطالعات اندکی تنها در سویه های h.pylori آزمایشگاهی مقاوم شده به تتراسایکلین ، انجام گرفته اند. در مورد مکانیسمهای احتمالی دیگر مقاومت به تتراسایکلین در h.pylori شواهدی دیده نشده است. در این مطالعه به بررسی مکانیسمهای مقاومت به تتراسایکلین در سویه های مقاوم به این آنتی بیوتیک با تأکید بر بررسی حضور افلاکس فعال در مقاومت به تتراسایکلین در h.pylori پرداخته شد. سویه ها از کودکان جدا شده و از نظر مقاومت به تتراسایکلین با روش رقت آگار مورد بررسی واقع شدند. سپس تست تجمع آنتی بیوتیکی در حضور و عدم حضور یک ماده غیر فعال کننده پمپهای افلاکس صورت پذیرفت . تستهای مولکولی pcr و rt-pcr جهت بررسی حضور ژنهای افلاکس و بیان آنها و نیز حضور موتاسیونها در ژن 16s rrna در این سویه ها انجام شد. نتایج حاصله حاکی از افزایش روزافزون مقاومت به تتراسایکلین در h.pylori و نقش مهم افلاکس فعال در سویه های با مقاومت بالا و چند فاکتوری بودن مقاومت به تتراسایکلین در این باکتری است.

helicobacter pylori بیش از نیمی از مردم جهان را آلوده کرده و عامل گاستریت، زخم و سرطان دستگاه گوارشی می باشد. در مناطق در حال توسعه آلودگی در دوران کودکی رخ داده و علی رغم درمان ممکن است تا چندین دهه در بدن فرد باقی بماند. تفاوت در علایم و بیماری های ایجاد شده می تواند در رابطه با ژنوتیپ ژنتیکی سویه ها باشد احتمالا در طول دوران آلودگی فرد به این باکتری رخ می دهد و در دراز مدت تغییرات ژنتیکی در ژن های مختلف از جمله ژن های مقاومت در آن حاصل می شود که می تواند یکی از عوامل اصلی شکست های درمانی محسوب می گردد. در این راستا بررسی مقاومت های آنتی بیوتیکی و ارتباط آن با تغییرات ژنتیکی ایجاد شده، برای درمان مناسب تر حائز اهمیت می باشد. علی رغم غالب بودن برخی از الگوی های ژنومی در برخی مناطق، الگوی ژنتیکی شایع در مناطق مختلف جغرافیایی نیز احتمالا با یکدیگر متفاوت می باشند. هدف از انجام این پروژه طبقه بندی مولکولی سویه های h. pylori جدا شده از کودکان ایرانی، توسط تکنیک الکتروفورز میدان پالسی می باشد. بعد از شناسایی بیوشیمیایی و مولکولی سویه های جدا شده طی سال های 1377 تا 1388، ژنوم کامل باکتری ها، بر اساس پروتکل اصلاح شده taylor و همکاران، استخراج و سپس توسط آنزیم محدودالاثر xbai برش خوردند. الگوی هضم آنزیمی حاصل، جهت بررسی تفاوت های ژنتیکی سویه های جدا شده استفاده گردید و فاکتور های مختلف از جمله مقاومت های آنتی بیوتیکی، سابقه بیماری و تفاوت ژن های ویژه این باکتری با تفاوت های الگوهای برشی، مورد مقایسه قرار گرفتند. الگو های ژنومی مختلفی در بین سویه های helicobacter pylori جدا شده از کودکان ایرانی بدست آمد که نشان دهنده تنوع ژنتیکی بسیار بالای موجود در بین سویه های جدا شده از کودکان در ایران است.کلیه سویه های جدا شده الگوی ژنومی متفاوتی نسبت به یکدیگر داشتند و ارتباطی معنادار بین الگوی ژنومی و مقاومت آنتی بیوتیکی سویه ها یافت نشد.

گوناگونی زیادی بین ژنوتیپ ژن های مختلف و بیان آنها در سویه های مختلف helicobacter pylori وجود دارد که در این رابطه مطالعات زیادی در مورد ژن های vaca و caga انجام شده است. اما مطالعات کمتری در زمینه تفاوت های موجود ما بین پروتئین های غشای خارجی (outer membrane proteins, omp) در سویه های مختلف h. pylori انجام شده است. در این مطالعه پروفایل omps سویه های مختلف h. pylori جداشده از کودکان مقایسه و رابطه حضور و یا بیان آنها با شدت پاتولوژی ایجاد شده در کودکان بیمار جستجو شد. 30 سویه مختلف h .pylori که طی سالهای 1998 تا 2008 از کودکان جداشده بود، همراه سویه استانداراد 26695 atcc در محیط کمپی بلاد آگار (campy-blood agar) رشد داده شدند. omps از30 سویه مزبور با روش سارکوزیل خالص و تحت sds-page با روش لاملی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج با برنامه lab-work بررسی شدند. سپس آنالیزهای دو بعدی کمپلکس های پروتئینی با روش blue native page در بعد اول و modified tricine sds-page در بعد دوم روی سه سویه انتخاب شده انجام گردید. نتایج، حضورالگوی omps متفاوتی را در 30 سویه نشان دادند که در مجموع 10 باند پروتئینی اصلی در نظر گرفته شدند. ولی حضور و یا شدت بیان آنها در سویه های مختلف یکسان نبودند. یکی از عواملی که می تواند در این تفاوت ها دخالت داشته باشد می تواند متفاوت بودن تعداد پاساژ در این سویه ها باشد. با مقایسه رابطه حضور باند هایی که در اکثر سویه ها حضور داشتند ولی پلی مورفیسم در آنها کاملا نمایان بود و شدت پاتولوژی ایجاد شده توسط سویه های h .pylori در بیماران، دو باند با وزن های مولکولی 30-20 و 40-30 انتخاب شدند. ظاهرا میزان بیان یک باند با وزن مولکولی 34 کیلو دالتون در سویه های جدا شده از گاستریت فعال شدید و یا گاستریت فعال متوسط در مقایسه با سویه های جدا شده از گاستریت خفیف بیشتر بود. این امر می تواند در رابطه با شدت چسبندگی این سویه ها به گیرنده های میزبان و عواقب ناشی از آن باشد. متفاوت بودن پروفایل پروتئینی omps در سویه ها ی مختلف می تواند در رابطه تبادلات ژنتیکی بین سویه ها در طول عفونت های مزمن باشد. بررسی روش blue native page برای مطالعه دو بعدی این پروتئین های چند شکلی (پلی مرفیک) نشان داد که blue native page پس از بهینه سازی می تواند روش تناوبی خوبی برای مطالعه پلی مرفیسم پروتئینهای غشای خارجی در helicobacter pylori باشد.

باکتریpseudomonas aeruginosa یک باکتری گرم منفی و پاتوژن فرصت طلب انسانی است. از آنجایی که بوجود آمدن و ظهور سویه های دارای مقاومت چندگانه mdr = multi drug resistant در بخشهای سوختگی رو به افزایش و شاخص ترین مکانیسم مقاومت آنتی بیوتیکی در این پاتوژن سیستم افلاکس (efflux) می باشد در این مطالعه 50 سویه p.aeruginosa از نمونه های سوختگی جمع آوری و مورد بررسی قرار گرفت. مقاومت آنتی بیوتیکی به روش انتشار در آگار در برابر 7 آنتی بیوتیک انجام شد و سپس میزان حساسیت به 2 آنتی بیوتیک به روش میکرودایلوشن صورت گرفت و نتایج به صورت mic بدست آمد. تست های mic یک بار در حضور ماده cccp (کربونیل سیانید m- کلروفنیل هیدرازون) به عنوان مهار کننده سیستم تراوشی وابسته به نیروی محرکه پروتونی و یک بار در غیاب این ماده بررسی شد. سپس از بنزالکونیوم کلراید (bkc) به عنوان سوبسترای اختصاصی پمپ mate استفاده شد و تست های mic به روش میکرودایلوشن در حضور و در غیاب cccp بررسی گردید .در حضور cccp کاهش mic مشاهده شد. به منظور تعیین میزان اختصاصی بودن عملکرد سیستم تراوشی در باکتری p.aeruginosa تجمع سیپروفلوکساسین توسط دستگاه اسپکتروفلوریمتر اندازه گیری شد. سپس حضور ژن سیستم افلاکس mate یا سیستم pmp m به کمک روش pcr در سویه های بالینی جدا شده تکثیر شد. نتایج حاصل از آنتی بیوگرام ایزوله های بیماران سوختگی به شرح زیر است : میزان درصد مقاومت به سیپروفلوکساسین 70% ، کربنی سیلین 26% آمیکاسین 16% پیپراسیلین 11%و ایمی پنم 6 %. mic برای آنتی بیوتیک سیپروفلوکسا سین و افلوکساسین در سویه های مقاوم mg/l 32 بود . میزان mic در حضور cccp در سویه های بیان کننده افلاکس فعال حداقل یک رقت کاهش یافت. سپس میزان mic در حضور cccp در برابر bkc بررسی شد و فقط 3 باکتری که دارای ژن افلاکس pmp m مربوط به پمپ mate بودند و توسط pcr ژن آنها جدا سازی شده بود یک رقت کاهش در میزان mic را نشان دادند. تست تجمع دارو نشان داد که سیستم های تراوشی در این باکتری قادر به تراوش آنتی بیوتیک و bkc است. بااستفاده از روش pcr مشخص شد که 6% درصد از سویه های بالینی مورد مطالعه سیستم تراوشی pmpm را به عنوان عامل ایجاد کننده مقاومت ذاتی چند دارویی در باکتری p. aeruginosa بر روی کروموزوم خود دارند.

coli تولید کننده توکسین شیگا) stec) ، می تواند موجب اسهال خونی شود که در %15-2 موارد، به خصوص در کودکان ، موجب ایجاد سندرم (hus) می شود و می تواند موجبات نارسایی کلیوی و حتی مرگ را فراهم آورد . در % 90 موارد اسهال خونی که به hus منجر شده، stec نقش داشته است. در کشور ما ،گوشت گاو به عنوان اصلی ترین منبع برای stec مطرح شده است(salmanzadeh .a.s.2009). در این مطالعه از روش های مولکولی (pcr) استفاده شده تا تعیین شود آیا سبزیجات تازه را می توان به عنوان منبع بالقوه stec در تهران در نظر گرفت یا خیر .طبق داده های این پژوهش ، میزان شیوع stec در سبزیجات تازه تهران شامل جعفری و تره %8/12 می باشد. طبق این تحقیق24 % سویه ها stx2، 24 % سویه ها stx1 ، 36 % سویه ها دارای هر دو ژنstx1 و stx2، 15% موارد دارای ژن o157 و vt2 را بودند. همه سویه ها فاقد h7 و eae بوده اند. تست حساسیت به آنتی بیوتیک ها ، بر روی همه ایزوله های غیر o157 صورت گرفت . در نهایت همه سویه ها برای دو آنتی بیوتیک آمپی سیلین و تتراسیکلین مقاوم بودند. mic برای سویه های stec-o157 با استفاده از 4 آنتی بیوتیک انجام شد . همه سویه ها به آمپی سیلین و تتراسیکلین مقاوم بودند. در نهایت بر اساس این مطالعه ، سبزیجات تازه تهران را می توان به عنوان منبع بالقوه stec در تهران درنظرگرفت.

بیماری های عفونی اسهالی یک مشکل مهم و عامل مرگ و میرهای چشمگیر در جهان هستند. سوش های esherichia coli بیماری زای روده ای عامل مهمی در ایجاد اسهال اپیدمیک و اندمیک در سراسر جهان هستند. اطلاع از شیوع (stec) shiga toxin – producing e. coli در منابع مختلف می تواند در مدیریت و کنترل بیماری های ایجاد شده توسط این باکتری ها مفید باشد. حیوانات مزرعه مانند گاو مخزن اصلی stec در کشور ما هستند. به علاوه سبزیجات تازه آلوده می توانند یک منبع بالقوه برای stec در تهران است. اهداف این مطالعه تعیین فراوانی stec در سبزیجات و نیز تعیین الگوی حساسیت آنها به آنتی بیوتیک های مختلف توسط روش استاندارد انتشار دیسک بود. در این مطالعه 100 نمونه کاهو در طی 6 ماه از شهر تهران جمع آوری شد. شناسایی سوش ها با روش مولکولی pcr و تست های بیوشیمیایی انجام شد. این سوش ها برای ژن های stx1 ، stx2، eaea ، flich7 و rfbo157 ، ژنهای اختصاصی stec، بررسی شدند. تست حساسیت ضد میکروبی بر اساس روش انتشار دیسک انجام شد. در این مطالعه آمار ایزوله های stec در کاهو 8 درصد بود. سه ایزوله حامل ژن stx1، 3 ایزوله حامل ژن stx2 و یکی از ایزوله ها ژنهای stx2و flich7 و rfbo157را حمل می کرد به احتمال 90 درصد o157:h7 می باشد. برای تایید نیاز به آزمایش های سرولوژی است. در تست مقاومت آنتی بیوتیکی، همه ایزوله ها به سفتازیدیم، سفپیم، ایمی پنم، کلرآمفنیکل، آمیکاسین، استرپتومایسین، کانامایسین، سفالوتین، نورفلوکساسین، سفترآکسون، جنتامایسین و سیپروفلوکساسین حساس و به تتراسایکلین و آمپی سیلین مقاوم بودند. نتایج مطالعه حاضر نقش احتمالی کاهو به عنوان یک منبع آلودگی به سوش های stec را نشان داد.

هلیکوباکتر پیلوری عامل اولیه ی گاستریت، زخم معده، زخم دئودنوم و سرطان معده می باشد. روش های مختلفی برای تشخیص عفونت helicobacter pylori وجود دارد که به دو دسته مهاجم و غیر مهاجم تقسیم می شوند. روش های غیر مهاجم شامل جستجوی آنتی بادی های سرمی، آنتی ژن مدفوعی، pcr مدفوعی و تست تنفسی اوره آز می باشند. هر یک از این تست ها دارای مزایا و معایبی هستند؛ اما روش هایی که دارای اختصاصیت بالا هستند به ویژه حائز اهمیت می باشند. هدف از این پژوهش طراحی یک واکنش pcr حساس و اختصاصی برای تشخیص هلیکوباکتر پیلوری در نمونه های گوناگون بیولوژیکی به ویژه مدفوع می باشد. طراحی واکنش شامل انتخاب برنامه ی مناسب و حتی الامکان کوتاه مدت برای pcr، شرایط واکنش به خصوص دمای اتصال پرایمر و طراحی پرایمر می باشد. در طراحی پرایمر اختصاصی بودن آن برای توالی هدف در ژن مربوطه و داشتن همولوژی نزدیک به 100% در اکثر سوش های h. pylori و در عین حال همولوژی بسیار پایین با سایر ژن ها و سایر باکتری ها به دقت مورد توجه قرار گرفته است. در واقع هدف اصلی ما در این پژوهش انتخاب روش و دستورکار ثابت برای انجام pcr بوده است که نه تنها ساده و ارزان باشد، بلکه بتواند به عنوان یک روش تشخیصی با حساسیت و ویژگی بالا برای تشخیص غیر تهاجمی h. pylori به کار رود. مصارف کاربردی چنین روشی شامل جستجوی این ارگانیسم در نمونه های غیر بیوپسی در مواردی است که عمل آندوسکپی یا مجاز نیست و یا مانند مورد کودکان مشکل بوده و دارای محدودیت است. در چنین مواردی می توان به ویژه از نمونه هایی مانند مدفوع برای تشخیص عفونت استفاده نمود. این هدف با مقایسه توالی های ژن هایی که به طور رایج در آزمایشگاه های گوناگون از جمله آزمایشگاه الزهرا استفاده شده و می شود با توالی های جدید تر یک ژن محافظت شده دنبال شد. در انتها طراحی یک یا چند جفت پرایمر pcr با اختصاصیت و حساسیت بالا بررسی خواهد شد؛ به نحوی که بتوان با کمک آن این ارگانیسم را در تمام نمونه های بیولوژیکی رد یابی کرد. در این پژوهش با هدف مقایسه نتایج pcr با چند جفت پرایمر، ژن های 16srna ،vaca وurec یا phosphoglucosamine mutase) glmm) انتخاب شدند. پرایمر های مختلف از این ژن های اختصاصی تهیه شده و در شرایط بهینه بررسی شدند. در مورد glmm سعی شد تا حساس ترین پرایمر انتخاب شود. لذا برای تکثیر این ژن چند جفت پرایمر طراحی و استفاده شد و بهترین آن ها به ویژه از نظر حساسیت انتخاب شد. در این پژوهش از توالی های حتی الامکان همولوگ حفاظت شده ی ژن urec (glmm) - که یک ژن housekeeping و حفاظت شده (conserved) می باشد- سه جفت پرایمر طراحی شد که این سه جفت پرایمر با پرایمر مطالعه ی espinoza و همکاران برای شناسایی 10 سویه ی h. pylori مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت. واکنش pcr با تمام پرایمرهای سنتز شده در گرادیان های دمایی مختلف برای بدست آوردن بهترین باند pcr انجام شد. گرادیان غلظت dna نیز برای دو جفت پرایمر دارای نتایج مطلوب بررسی شد. علاوه بر پرایمرهای ژن glmm از یک جفت پرایمر برای هر یک از ژن های vaca(m)، vaca(s) و 16s rrna نیز استفاده شد و نتایج همه ی آنها با هم مقایسه و بررسی شد. دو روش pcr نیز شامل روش معمول و روش multiplex pcr مورد بررسی قرار گرفت. نتایج urec pcr با نتایج pcr ژن های vaca(m)، vaca(s) و 16s rrna مقایسه شدند. نتایج نشان دادند که دو جفت از پرایمر های urec طراحی شده در این پژوهش نسبت به سایرین حساسیت بالاتری داشتند. واکنش multiplex pcr برای این دو جفت پرایمر نتایج مطلوبی را حاصل نمود. هدف از طراحی واکنش multiplex با دو جفت پرایمر افزایش حساسیت و اختصاصیت واکنش با تشکیل دو محصول همزمان pcr بود. بنابراین روش و دستور کار مربوط به واکنش multiplex طراحی شده در این پژوهش می تواند برای تشخیص h. pylori در نمونه های مختلف استفاده شود.

مسیری که توسط آن انسان ها helicobacter pylori را بدست می آورند ناشناخته است. چندین مطالعه ی اپیدمیولوژیکی، انتقال دهانی- مدفوعی را به عنوان یک مسیر انتقال احتمالی h. pylori پیشنهاد می کند. در حال حاضر، روش تشخیص عفونت فعال، شامل کشت، بافت شناسی، تست سریع اوره آز و واکنش زنجیره ای پلی مراز بر روی نمونه بیوپسی است. این روش ها دقیق هستند اما نیازمند نمونه گیری تهاجمی بعد از آندوسکوپی هستند. تست های غیرتهاجمی نیز که بر پایه سرم و تنفس می باشد همچنین معایبی دارند. اگرچه، تست های برپایه مدفوع می توانند مناسب باشند زیرا هم کم هزینه است و هم این که در بزرگسالان و کودکان قابل اطمینان می باشد. در میان آن ها، کشت مدفوع به عنوان یک روش با ارزش نه تنها به طور اختصاصی موجب آشکارسازی عفونت می شود بلکه توانایی جداسازی ارگانیسم زنده را نیز فراهم می کند. هدف از این مطالعه اپتیمم سازی کشت مدفوع برای تشخیص عفونت h. pylori می باشد. به منظور راه اندازی چنین روش بهینه ای، مدفوع از یک بیمار غیر عفونی گرفته شد و h. pylori در آن تزریق شد و شرایط متفاوت توسط روش های متنوع آزمون شد. با ارزیابی روش موثرتر، نمونه تازه مدفوع از 50 فرد مراجعه کننده به بیمارستان شریعتی که دارای مشکلات گوارشی فوقانی در آندوسکوپی، و تست اوره آز مثبت یا منفی در همان جا، گرفته شد. در میان روش های بررسی شده، روش ترکیبی (کلستیرامین، سانتریفوژ و فیلتراسیون) به عنوان روش مناسبی در جداسازی h. pylori از نمونه های مدفوع بیماران می باشد. حساسیت و اختصاصیت این روش 30% و 100% به ترتیب می باشد. اگرچه حساسیت این متد نیز هنوز پایین است، اختصاصیت بسیار بالایی دارد و هماهنگی بین کشت مثبت بیوپسی، تست hpsa مثبت و کشت مثبت مدفوع دیده شد.

چکیده باکتریhelicobacter pylori دارای خانواده ای از پروتئین های غشاء خارجی شامل 32 عضو است. چسبیدن با واسطه برخی از این پروتئین های غشاء خارجی سبب القای تولید اینترلوکین-8 می گردند. یکی از این پروتئین های غشاء خارجی، 33 -35 کیلو دالتون بوده و توسط ژن پروتئین التهابی غشائ خارجیa (oipa) بیان میگردد، که نقش مهمی را در بیماری زایی helicobacter pylori ایفا می نماید. .هدف ما از این مطالعه جداسازی و بررسی ایمنی زایی پروتئین حدودا kda34 درحیوان آزمایشگاهی برای اهداف ایمونولوژیک و کاربردی می باشد. در این مطالعه پروفایل پروتئین های غشاء خارجی سویه های helicobacter pylori جمع آوری شده در مطالعات قبلی جهت تشخیص حضور پروتئین kda 33-35 توسط روش سدیم دو دسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل الکتروفورزیس یک بعدی مورد بررسی و پس از انتخاب سویه، پروتئین های غشاء خارجی آن توسط روش سدیم دو دسیل سولفات آگارزالکتروفورز جدا شده و پروتئین مورد نظراز آن بازیافت، و به حیوان تزریق گردید. در ادامه آنتی بادی حاصل از طریق الایزا تیتر، و با پروتئین مربوطه بلات گردید. تیترآنتی بادی حاصل حدود 3600/1 (035/0 میکرو گرم)تعیین و با پروفایل پروتئینی سویه های مزبور بلات گردید، که تنها یک باند با وزن مولکولی حدود kda34 مشاهده شد. برای تایید اینکه پروتئین شناسایی شده در این پژوهش oipa می باشد، واکنش آنتی بادی به دست آمده با پروتئین حاصل از بیان ژن oipa (به دست آمده توسط محدثه محبوبی) به روش وسترن بلات، آشکار گردید. بنابراین پروتئین مورد مطالعه ما همان oipa می باشد که که نقش و مشخصات مولکولی آن قبلا توسط یامائوکا درسال 2000 و با وزنی حدودkda 34 پیشنهاد گردیده است. کلمات کلیدی: helicobacter pylori، پروتئین التهابی غشای خارجی(oipa) a ، اینترلوکین- 8، الایزا، -بلات.

چکیده مقاومت سوش های h.pylori به آنتی بیوتیک های رایج در قسمت های مختلف جهان رو به افزایش است. یافتن داروهای جدید و موثرند h.pylori مهم است و در این میان گیاهان منابع مهمی هستند. در ایران مقدار زیادی از عصاره های گیاهی در طب سنتی برای درمان انواع بیماری های گوارشی مورد استفاده قرار می گیرد وچندین مطالعه بر روی خواص مفید گیاهان ایرانی در جلوگیری از زخم معدی انجام شده است. هدف این مطالعه بررسی اثرات ضدباکتریایی چند عصاره گیاهی شامل سنبل الطیب هندی (valeriana jatamaneia) ، سنبل الطیب بومی(valeriana officinalis)، آویشن دنائی (thy mus daenensis) و مرزه بختیاری (satureja bachtiarica) یا مرزه کوهی بر سوش های کلینیکی مقاوم به آنتی بیوتیک h.pylori بوسیله دیسک فیوژن و روش رقت در آگار بود. ترکیبات شیمیایی اسانس که بیشترین اثر را داشت ( مرزه بخیتاری) بوسیله gc-ma شناسایی شد. کارواکرون (%5/45)، تیمول (%9/27) ترکیبات اصلی اسانس به همراه پاراسیمن (%4/4) گاما-ترپینن (%4). اسانس مرزه بختیاری فعالیت ضد باکتریایی قوی بر روی سویه های کلینیکی h.pylori نشان داد (17.6±1.1 mm and 0.035±0.13 µl/ml) کارواکرون ترکیب اصلی یک نقش چشمگیری در این اثر داشت در حالی که در حضور تیمول اثر ضدباکتریایی کارواکرون کاهش یافت. بنابراین اسانس مرزه بختیاری می تواند برای درمان عفونت های h.pylori استفاده شود. مطالعات بیشتری به منظور مشخص کردن بهتر مکانیسم عمل آن برروی h.pylori لازم است. کلمات کلیدی: مرزه بختیاری، هلیکوباکتر پیلوری، کارواکرول، thymol; p-cymene; ?-terpinene?

مقدمه: با توجه به رشد روبه افزایش باکتری های تولید کننده esbl، در میان اعضای خانواده enterobacteriaceae، ردیابی و درمان عفونت های بیمارستانی ناشی از ایزوله های بالینی تولید کنندگان esblمتعلق به این خانواده، دارای اهمیت است. هدف از این پژوهش، ارزیابی یک روش سریع، با به کار گیری محیط کشت (کلریمتریک) جدید ساخته شده در دانشگاه الزهرا(تهران،ایران)، می باشد. برای تشخیص انتروباکتریاسه های تولید کننده esbl، این محیط، قادر به ردیابی این نوع از باکتری ها بوده و به دلیل فعالیت متابولیکی ناشی از رشد باکتری، محیط کشت در مدت زمان 6- 5 ساعت تغییر رنگ می دهد. روش استفاده شده برای ردیابی esbls، مبتنی بر روش انتشار دیسک بر اساس استاندارد clsi ، بر روی محیط کلریمتریک بوده و نتایج حاصل از آن، با روش انتشار در مولر- هینتون آگار، مقایسه می گردد. مواد وروش ها: صد وسه ایزوله کلینیکی جدا شده از بیماران که متعلق به خانواده انتروباکتریاسه می باشند، مورد ارزیابی قرار گرفت؛ این ایزوله های بالینی از دانشگاه علوم پزشکی ایران و انستیتو پاستور ایران تهیه گردیده اند. از تعداد 103 ایزوله بالینی استفاده شده در پژوهش،56 عدد متعلق به klebsiella pneumoniae، 45 عدد متعلق به e.coli و 2 عدد متعلق به خانواده enterobacter spp می باشند. دیسک های مورد استفاده نیز عبارت بودند از: ceftazidim (caz), ceftazidime + clavulanate (cza), cefotaxime (ctx), cefotaxime +clavulanate (ctc). دو محیط مولر- هینتون آگار و محیط کلریمتریک در این پژوهش مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج: در روش انتشار در محیط کلریمتریک، یک تغییر رنگی در محیط کشت رخ داده و محیط از رنگ زرد به رنگ قرمز تغییر می کند ودر اطراف دیسک ها هاله های مهاری قرمز رنگ ایجاد می گردد. این امر در مدت زمان 6-5 ساعت رخ می دهد. با استفاده از استاندارد روش انتشار دیسک مشخص شده توسط clsi، 55 ایزوله به عنوان esbl مثبت، و 48 ایزوله به عنوان esblمنفی، تشخیص داده شد. نتایج به دست آمده با روش کلریمتریک در توافق کامل با نتایج به دست آمده از روش استاندارد انتشار ویک شبانه روز انکوباسیون درمحیط مولر- هینتون آگار، می باشد. بحث: این محیط کشت جدید می تواند برای تشخیص آسان وسریع ایزوله های بالینی اعضای خانواده enterobacteriaceae، که تولید esbls می نمایند، درمدت زمان 6-5 ساعت، مورد استفاده قرارگیرد. کلمات کلیدی: محیط کشت کلریمتریک، esbls، تشخیص سریع وآسان، آزمون انتشار دیسکclsi

پروتئین oipa (outer inflammatory protein a) یکی از مهمترین ادهزین‏های h. pylori و کاندید مناسبی برای ساخت واکسن است. ژن آن تحت تنظیم وضعیت on-off در ارتباط با بیان پروتئین oipa است. هدف از این مطالعه به دست آوردن یک کلون نوترکیب (با وضعیت on) از یک ایزوله بالینی h. pylori با میزان بیان بالا برای پروتئین غشای بیرونی (omp) با وزن مولکولی kda 35-33 است. برای تکثیر ژن oipa از سویه ایرانی، پرایمر اختصاصی این ژن بر اساس توالی oipa سویه استاندارد b8 h. pylori طراحی شد و با استفاده از این پرایمر ژن تکثیر و محصول pcr جهت تعیین توالی به genebank ارسال شد. پلاسمید pet28a و e. coli dh5α برای همسانه سازی و ترانسفورماسیون انتخاب شد. به منظور بیان پروتئین پلاسمید نوترکیب حاوی ژن oipa (pet28a-oipa) در e. coli bl21(de3) ترانسفورم شد. پروتئین‏ oipa از باکتری جداسازی و تخلیص شد و حضور پروتئین oipa با استفاده از آنتی‏بادی مونوکلونال آنتی his-tag و آنتی بادی اختصاصی بر علیه پروتئین 35-33 کیلودالتون تأیید گردید. کارایی محافظتی پروتئین oipa و بره‏موم به عنوان ادجوان در محافظت از موش c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori تعیین شد. چهار گروه از موش‏ها به صورت مخاطی پروتئین oipa (واکسن)، پروتئین oipa و بره‏موم (واکسن- آدجوان)، بره‏موم (آدجوان) و pbs (کنترل) را دریافت کردند. سویه h. pylori b19 (caga+/vacas1m2) که از نمونه بیوپسی با علائم بالینی التهاب شدید گرفته شده بود، به طریق داخل معده‏ای برای آزمایشات ارزیابی ایمنی در موش استفاده شد. کولونیزاسیون h. pylori، شاخص التهاب در معده و میزان تیتر iga در سرم خون موش‏ها با روش شمارش باکتری (cfu)، پروتوکل‏های هیستوپاتولوژیکی استاندارد و الایزا تعیین گردید. توالی ژن oipa حضور قطعه 924 جفت بازی مرتبط با پروتئینی با وزن مولکولی 34 کیلودالتون را نشان داد (kj816695). میزان مشابهت ژن oipa با سایر ژنهای oipa منتشر شده در ncbi برابر 96-92% تعیین گردید. بیشترین مشابهت با کلون oipa مکزیکی مشاهده شد. میزان بار باکتریایی و شاخص التهاب به طور مشخصی در گروه موش‏های کنترل در مقایسه با گروه واکسن (oipa) بالاتر بود. تیتر iga آنتی oipa به طور مشخصی در گروه واکسن در مقایسه با سایر گروه‏ها بالاتر بود. در گروه بره‏موم، کاهش کمتری در بار میکروبی و شاخص التهاب در مقایسه با گروه واکسن مشاهده شد، اما به طور مشخصی از گروه کنترل پایین‏تر بود. بنابراین بره‏موم به تنهایی ممکن است به طور جزئی از موش‏های c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori محافظت ‏کند. تجویز خوراکی بره موم به عنوان آدجوان همراه با واکسن oipa نسبت به واکسن به تنهایی اثر آدجوانی یا افزایشی نشان نداد. در واقع بره‏موم در مقابل از اثرات مؤثر واکسیناسیون پروتئین oipa جلوگیری کرد. یک توضیح حضور ترکیبات فنولیک، فلاونوئیدی یا سایر ترکیبات موجود در بره‏موم است که می‏تواند روی ساختار آنتی‏ژنیک پروتئین oipa اثر بگذارد و از فعال شدن ایمنی مخاطی توسط oipa جلوگیری کند. نتایج حاصل از این پژوهش بر نقش مهم oipa در بیماریزایی h. pylori تأکید دارد و oipa را به عنوان یک کاندیدای خوراکی در مقابل عفونت h. pylori معرفی می‏کند.

در این مطالعه، محیط کلریمتریک آنتی بیوگرام که در دانشگاه الزهرا طراحی گردیده است با محیط quicolor شرکت سالوبریس آمریکا و محیط مولر هینتون آگار مقایسه گردید. الگوی حساسیت صد جدایه انترو باکتریاسه با شش آنتی بیوتیک مختلف مشخص گردید. توافق هر سه روش با آنالیزکاپا بررسی گردید. با ده بار تکرار تست حساسیت آنتی بیو تیکی دو سوش استاندارد و دو جدایه بالینی از خانواده انتروباکتریاسه، در هر سه محیط مقادیر coefficient of variation (cv) (ضریب تغییرات) محاسبه گردید. مقادیر کاپا در همه موارد بالای نیم و نشان دهنده توافق خوب و یا عالی هر سه روش بودند. مقادیرcv در اغلب موارد زیر 05/0 و نشان دهنده تکرارپذیری مناسب آزمایش ها بودند. بر اساس یافته های این مطالعه محیط کلریمتریک آنتی بیوگرام برای تعیین سریع الگوی حساسیت انتروباکتریاسه کاربردی می باشد.

lactococcus lactis یک باکتری پروبیوتیک بی خطر است که پتانسیل بالایی برای کلونینگ آنتی ژن های مختلف از جمله پروتئین های h. pylori را داراست. در بین آنتی ژن های مختلف برای تولید واکسن علیه عفونت h. pylori ، پروتئین شوک حرارتی a (hspa) یکی از کاندیداهای ارزشمند است که به وسیله همه سویه های h. pylori بیان می شود و زمانی که به صورت خوراکی به موش تلقیح می شود، واکنش های نامساعد را ایجاد نمی کند. هدف از پژوهش حاضر ساخت و آزمایش یک شاتل وکتور برای کلونینگ ژن hspa h. pylori به منظور بیان در میزبان lactococcus lactis با استفاده از سیستم القایی nice می باشد. توالی ژن hspa ( برپایه توالی باکتری h. pylori 26695 ) حاوی ترادف های بهینه شده و his-tag ساخته شد وآنالیزهای مختلف بیوانفورماتیکی پس از بهینه سازی بر روی آن صورت گرفت. این قطعه به داخل شاتل وکتور e. coli-l. lactis ، pnz8148 اضافه شد و سپس به باکتری e. coli mc1061 انتقال یافت. ترنسفورمانت ها پس از تعیین هویت و تخلیص پلاسمید نوترکیب با استفاده از الکتروپوریشن واردl. lactis nz9000 گردیدند. بیان hspa به وسیله نایسین القا شد و پروتئین به وسیله sds-page آنالیز گردید همچنین شرایط برای بیان پروتئین نوترکیب مورد نظر بهینه سازی شد. نتایج آنالیزهای بیوانفورماتیکی مبین عدم تأثیر گذاری بهینه سازی کدونی و افزودن دنباله هیستیدینی بر جایگاه فعال و ساختار سه بعدی پروتئین بهینه شده بود. همچنین بررسی های آنتی ژنیسیته نشان دهنده حضور اپی توپ سطحی با قابلیت شناسایی توسط mhc-iiدر پروتئین بهینه شده بود. برش آنزیمی، pcr و تعیین توالی محصول کلونینگ، حضور ژن hspa را در شاتل وکتور pnz8148 و در باکتری ترنسفورم شده l. lactis nz9000 تأیید کرد. نتایج sds-page نشان داد که پروتئینhspa به وسیله l. lactis nz9000 بیان گردیده است و همچنین میزان بیان نقش نایسین را به عنوان یک القاگر تأیید نمود. از آنجایی که l. lactis علاوه بر ویـژگی های پروبیوتیـکی بیان کننده پروتئین نسبت به e. coli مزیت دارد و نیز واجد سیستم کنترل کننده میزان بیان است بنابراین می تواند کاندیدای امید بخشی برای ساخت واکسن خوراکی علیه h. pylori باشد. انتقال موفقیت آمیز ژن hspa بهینه شده یh. pylori در l. lactis nz9000 از طریق ساخت شاتل وکتور و بیان آن به وسیله سیستم nice دارای اهمیت است.

چکیده ندارد.

چکیده ندارد.

بروسلوزیس یکی از بیماری های مهم مشترک بین انسان وحیوان است که عامل آن گونه های مختلف جنس بروسلا می باشند. بروسلاها باکتری های گرم منفی اختیاری درون سلولی هستند که طیف وسیعی از حیوانات و هم چنین انسان را آلوده می کنند، لذا این بیماری، ضررهای اقتصادی و بهداشتی زیادی به بار می آورد. از آن جا که واکسن های قبلی بروسلا، بازدهی ایده آل نداشته اند، ساخت نسل جدیدی از واکسن ها که فاقد معایب پیشین بوده و در عین حال موثر وایمن باشند، اهمیتی ویژه می یابد. واکسن های dna یا واکسن های نسل سوم به دلیل مزیت های فراوانی که نسبت به واکسن های سنتی نشان داده اند، به نحوی گسترده مورد مطالعه قرار گرفته اند. از جمله ویژگی های منحصر به فرد این واکسن ها که آنها را بسیار مورد توجه قرار داده است ایمن و بی خطر بودن آنها، کوتاه بودن روند طراحی و هزینه های پایین تولید وهم چنین توانایی ایجاد پاسخ های ایمنی سلولی و هومورال توسط این نوع واکسن ها می باشد. در این بررسی، ژن omp31 بروسلا ملی تنسیس که به دلیل توانایی اثبات شده آن در القای پاسخ ایمنی، به عنوان کاندیدایی مناسب جهت ساخت واکسن dna شناخته شده است، در وکتور بیانی مناسب pcdna3.1 قرار گرفته و باکتری های e .coli سویه top10 با این وکتور ترانس فورم شدند. سپس باکتری های ترانس فورم شده که بر روی پلیت آگار محتوی آمپی سیلین رشد کرده بودند انتخاب شده و خالص سازی پلاسمید جهت بررسی کارایی بیان آن صورت گرفت. بررسی استخراج rna بافتی پس ازتزریق این پلاسمید نوترکیب به موش، نشان دادکه بیان ژن omp31 با موفقیت انجام شده است. از آن جا که هدف نهایی این طرح، ساخت واکسن اسیدنوکلئیکی می باشد در مطالعات بعدی باید بیان پروتئین و هم چنین توانایی این واکسن در القای پاسخ های ایمنی مصونیت زا مورد بررسی قرار بگیرد.

هلیکوباکترپیلوری عمده ترین سبب گاستریت مزمن ، زخم اثنی عشر و معده، و یکی از عوامل مولد سرطان معده می باشد. شروع عفونت مزبور غالبا در کودکی است. در حال حاضر ، بهترین طریقه تشخیص عفونت فعال ، انجام تست گوناگون بر روی بیوپسی است ولی انجام آندوسکوپی در کودکان مشکل می باشد لذا ابداع روشی غیرتهاجمی راهکاری برای این مشکل است.نتیجه بررسی فوق نشان از موثر و دقیق بودن روش غیرتهاجمی جستجوی آنتی ژن هلیکوباکترپیلوری در مدفوع بویژه الیزا برای جستجوی عفونت است.