نام پژوهشگر: فرحنوش دوستدار

بررسی فاکتورهای ویرولانس درژنوتیپ های مختلف سودوموناس آئروژینوزای جدا شده از نمونه های چشمی بیماران بیمارستان فارابی
thesis دانشگاه تربیت معلم - تبریز - دانشکده علوم پایه 1389
  فاطمه کریمی   فرامرز مهرنژاد

سودوموناس آئروژینوزا یکی از شایع ترین میکروارگانیسم های بیماری زا در عفونت های قرنیه ای ، به ویژه در کراتیت های مرتبط با لنز تماسی می باشد. کراتیت سودوموناسی یک عفونت چشمی خطرناک است که اگر فورأ درمان ‏مناسب در آن انجام نشود, می تواند منجر به ناتوانی شدید در دید ‏و زخم قرنیه شود‎. بیماری زایی سودوموناس آئروژینوزا به علت تولید چندین فاکتور ویرولانس ‏همراه با سلول و فاکتورهای خارج سلولی می باشد. فاکتورهای ویرولانس ‏که بیشتر با آسیب چشمی همراه هستند عبارتند از: اگزوتوکسینs، اگزوتوکسینu, الاستاز, آلکالین پروتئاز و پروتئاز‏iv‏. برای کنترل بهتر عفونتهای چشمی ناشی از سودوموناس آئروژینوزا در این تحقیق ژنوتیپ(exou وexos ) و فنوتیپ (تشکیل بیوفیلم,پروفایل پروتئازی,الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی) سویه های چشمی سودوموناس آئروژینوزا ‏در نمونه های ایرانی بررسی شد و مقایسه بین ژنوتیپهای مختلف صورت گرفت. در این مطالعه همه نمونه ها حداقل به 4 آنتی بیوتیک مقاومت نشان دادند ولی به همه ی فلوروکینولونها حساس بودند. مقاومت چند دارویی در دو نمونه (%3.7) مشاهده شد. از54 نمونه 51 نمونه ژن ‏exou‏ و 34 نمونه ژن ‏exos‏ را در ‏pcr‏ نشان دادند. تشکیل بیوفیلم قوی با حضور ژنexou مرتبط بود . همه 54 نمونه قادر به تولید پروتئاز‏iv‏ بودند و بیشتر آنها الاستاز را تولید می کردند، اما فقط در دو نمونه فعالیت آلکالین پروتئاز توسط ژلاتین زیموگرافی مشاهده گردید. بررسی ژنتیکی نمونه های سودوموناس آئروژینوزا 50 الگوی باندی مختلف را نمایان ساخت. .در دندوگرام حاصل از الگوی pcr-eric، فقط 8 نمونه در 4 کلون حقیقی دسته بندی شدند و25 نمونه در 8 کلون با تشابه %85 دسته بندی شدند. نتایج حاکی از تنوع ژنتیکی نمونه های چشمی می باشد. یافته های ما تصدیق می کند که نمونه های سودوموناس آئروژینوزا با منشأ عفونی مختلف ممکن است خصوصیات متفاوتی داشته باشند. در نمونه های چشمی ما فنوتیپ سیتوتوکسیک متداولتر از فنوتیپ مهاجم می باشد که اهمیت این توکسین ها را در بیماری زایی تأیید می کند. هم چنین ما نشان دادیم eric-pcr یک ابزار کارآمد برای تعیین گونه نمونه های کلینیکی سودوموناس آئروژینوزا می باشد.

مطالعه ارتباط عملکرد- ساختار آنزیم پیرازین آمیداز با استفاده از روش های بیوشیمی و بیو فیزیکی
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید مدنی آذربایجان - دانشکده علوم پایه 1391
  محمد حسینی   محمد پاژنگ

بیماری سل نوعی بیماری است که اغلب ریه ها را درگیر می کند اما این بیماری قسمت های دیگر بدن را نیز تحت تاثیر قرار می دهد این بیماری عفونی توسط سویه های مختلفی از مایکوباکتریاها از جمله مایکو بکتریوم توبرکلوزیس ایجاد می شود. پیرازین آمید یک داروی رده اول و مهم برای کوتاه سازی درمان عفونت سل به همراه ایزونیازید و ریفامپین است. از لحاظ ساختاری پیرازین آمید آنالوگ نیکوتین آمید است که یک پیش دارو محسوب می شود و برای فعالیت دارویی باید به پیرازینوئیک اسید تبدیل شود که این کار از طریق عملکرد آنزیم پیرازین آمیداز باکتریایی و فعالیت هیدرولازی آن انجام می گیرد. مهم ترین عامل بروز مقاومت به داروی پیرازین آمید بروز جهش در ژن رمز دهی کننده پروتئین پیرازین آمیداز است. ژن رمزدهی کننده پیرازین آمیدار دارای 561 جفت باز می باشد. این ژن پلی پپتید 186 آمینواسیدی را رمزدهی می نماید که دارای وزن مولکولی 5/20 کیلو دالتون می باشد. در این مطالعه ژن رمزدهی کننده آنزیم پیرازین آمیداز از مایکو بکتریوم توبرکلوزیس در وکتور بیانی pet 21a(+) کلون شد. جهت بیان آنزیم وکتور ساخته شده به باکتری escherichia coli bl21 منتقل شد. نتایج نشان داد که آنزیم بیان شده به لحاظ عملکردی فعال می باشد. از این آنزیم فعال می توان در تحقیقات بعدی همچون مطالعه مکانیسم مقاومت به دارو در آنزیم های جهش یافته استفاده کرد.

مطالعه ارتباط عملکرد – ساختار آنزیم پیرازین آمیداز طبیعی و مقایسه آن با انواع جهش یافته با استفاده از روش های بیوشیمی و محاسباتی
thesis وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید مدنی آذربایجان - دانشکده علوم 1391
  داوود ربیعی   فرامرز مهرنژاد

پیرازین آمید یک داروی رده اوّل در درمان بیماری سل است که به صورت پیش دارو مصرف شده وتوسط آنزیم پیرازین آمیداز باکتری مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، هیدرولیز شده به داروی فعال تبدیل می شود و نهایتاٌ باعث مرگ این باکتریها می شود.در این مطالعه با توجه به اهمیّت ایجاد مقاومت در باکتری مایکربکتریرم توبرکلوسیس نسبت به داروی pza ، سعی شده تا با بیان پروتیین پیرازین آمیداز نوع وحشی و انواع جهش یافته کلینیکی مقاوم در سوش مناسب و استصحال آنزیم مذکور ، ارتباط ساختار- عملکرد این آنزیم و همچنین مکانیسمهای ایجاد مقاومت در این آنزیم،مورد مطالعه قرار گیرد.در جریان این مطالعه ژن مربوط به پیرازین آمیداز نوع وحشی و دو جهش یافته ی کلینیکی مقاوم ) d63g/w119c و a143t ( کلون و بیان شده و از لحاظ پارامتر های سینتیکی با هم مقایسه شدند. علاوه بر تکنیک های بیوشیمیایی ذکر شده تکنیک های محاسباتی داکینگ و شبیه سازی دینامیک ملکولی) برای مطالعه جهش یافته های مذکور ومقایسه آنها با نوع وحشی استفاده شد.