امروزه تقاضای زیادی برای تولید پروتئین های نوترکیب انسانی جهت درمان و تشخیص وجود دارد. اینترفرون گاما نیز به عنوان یکی از این پروتئین های ارزشمند، وسیله دفاعی بدن در مقابل ویروس ها می باشد و ارزش درمانی بالایی دارد، از این رو به عنوان دارو برای آلودگی های ویروسی، سرطان ها و بیماری های خودایمن مورد استفاده قرار می گیرد. در این پژوهش آغازگرهای مناسب با توجه به توالی های افزایش دهنده بیان گیاهی، توالی های دو طرف ژن اینترفرون گاما، محل های برش مناسب، توالی his tag جهت شناسایی و تخلیص پروتئین و فاکتور هگزا جهت حذف his tag طراحی و برای تکثیر ژن استفاده شد. ژن مورد نظر در ناقل بیانی گیاهی pcambia1304 تحت کنترل پیشبرنده camv35s و خاتمه دهنده nos همسانه سازی شد. سازه بدست آمده (pcamifn-?) با روش شوک حرارتی به باکتری اشریشیاکلی سویه dh5? منتقل شده و باکتری های تراریخته بر روی محیط حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین 50 میلی گرم در لیتر انتخاب شدند. با استفاده از تکنیک های مختلف colony pcr، هضم آنزیمی، توالی یابی و هم ردیف سازی آن در بانک اطلاعاتی حضور ژن اینترفرون گاما در ناقل بیانی تایید شد. سپس سازه مورد نظر با روش استاندارد انجماد و ذوب به باکتری اگروباکتریوم سویه lba4404 منتقل شده و برای تراریختی گیاه گوجه فرنگی(رقم cal j) از طریق ریزنمونه های کوتیلدونی و به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. به منظور تلقیح در ابتدا ریزنمونه ها به مدت 48 ساعت بر روی محیط پیش-کشت قرار گرفته، سپس مایه زنی با اگروباکتریوم انجام شده و ریزنمونه ها به مدت 48 ساعت در تاریکی و دمای 28 درجه بر روی محیط هم-کشت قرار گرفتند. در نهایت ریزنمونه های تلقیح شده به محیط کشت انتخابی که شامل محیط هم-کشت به همراه آنتی بیوتیک های سفوتاکسیم 250 میلی گرم در لیتر و هیگرومایسین 5/7 میلی گرم در لیتر منتقل شدند و در شرایط 16 ساعت نور و 8 ساعت تاریکی در اتاق رشد قرار گرفتند. بعد از باززایی، استخراج dna ژنومی گیاه تراریخت انجام شده و با استفاده از تکنیک pcr حضور ژن اینترفرون گاما در گیاه تراریخت تایید گردید.

اثراتی همچون سمیت، جهش زایی و سرطانزایی هیدروکربن های آروماتیک چند حلقه ای، و از سوی دیگر مقاومت محیطی و قابلیت ورود به چرخه غذایی اهمیت پاکسازی این ترکیبات را خاطر نشان می سازد. در میان سایر روش های پاکسازی، اصلاح زیستی با بهره گیری از توان میکروارگانیسم ها و به علت کارایی و هزینه اندک به عنوان راهکاری امید بخش در جهت حذف این آلاینده ها مطرح است. هدف از این مطالعه جداسازی، غربالگری و انتخاب باکتری های تجزیه کننده فنانترن، فلورانتن و پیرن به منظور جایگزینی روش تجزیه زیستی در رفع آلاینده های محیطی است. تجزیه آزمایشگاهی pahs توسط 9 سویه باکتریایی جداشده ازخاک های آلوده به نفت شرکت بهره-برداری نفت و گاز کارون مورد بررسی قرار گرفت. پس از مرحله غنی سازی، برای غربال این 9 جدایه، از محیط دو لایه ای با غلظت 400 میلی گرم بر لیتر ترکیبات آروماتیک و تکنیک رقت سازی متوالی استفاده شد. پس از 21 روز گرماگذاری در محیط bsm با غلظت 200 میلی گرم بر لیتر ترکیب آروماتیک، جدایه های ph12، ph11 و ph3 به ترتیب 87/72%، 66/82% و 93/23% تجزیه فنانترن را نشان دادند و نتایج آنالیز hplc برای جدایه های فلورانتنf1، f3 و f4 به ترتیب 26/85%، 64/48% و 93/23% و پیرن py1، py2 و py231 به ترتیب 07/90%، 19/71% و 67/29% بوده است. نتایج آنالیز hplc نشان داد کارایی کنسرسیوم متشکل از 3 سویه ph12، f4 و py2 نسبت به جدایه های منفرد در تجزیه هیدروکربن ها بیشتر است. بر اساس آزمون های بیوشیمیایی و آنالیز توالی ژن 16srrna، جدایه ph3، citrobacter freundii نامگذاری شد، و جدایه های ph11 وpy1 به bacillus mycoides،ph12 ،f1 ، و py2 به bacillus cereus و f3،f4 و py231 به bacillussubtilis بیشترین شباهت را نشان دادند. در پایان نیز منحنی رشد جدایه های برتر در محیط دارای pah رسم گردید.

قابلیت بالای آنزیم های لاکاز قارچی در اکسیداسیون طیف وسیعی از ترکیبات آروماتیک فنلی و غیر فنلی، لیگنین، برخی ترکیبات غیر آلی و غیره باعث توجه ویژه ای در بکارگیری این آنزیم ها در مصارف صنعتی مختلف از جمله صنایع خمیر و کاغذ سازی، منسوجات، صنایع غذایی، تیمار فاضلاب ها، پسماند های کشاورزی و صنعتی، زیست پالایی و... شده است. جهت بکارگیری این آنزیم ها به منظور استفاده تجاری، تولید مقادیر انبوه آنزیم با هزینه کم، ضروری است امروزه عدم دست یابی به این هدف عمدتا بدلیل تولید پایین آنزیم از منابع طبیعی تولیدکننده آن، تبدیل به یکی از محدودیت های بهره مندی از این آنزیم ها شده است. روش هایی جهت حل این مشکل، ارائه شده که از جمله می توان بیان نو ترکیب لاکاز از طریق میزبان های یوکاریوتی را نام برد. در این تحقیق cdna آنزیم لاکاز lap2 قارچ trametes pubescens بعد از بهینه سازی، توسط شرکت سازنده biomatik سنتز شد. پارامتر هایی که در این تحقیق بهینه شدند، عمدتا شامل همخوانی کدون قارچ و مخمر ((codon usage ،محتوایg و c، محتوای p-g-c، ساختار ثانویه mrna و غیره می باشند. ژن تهیه شده با استفاده از پرایمر-های طراحی شده، تکثیر یافت. پس از هضم ژن و وکتور پلاسمیدی ppicza? توسط آنزیم های محدود الاثر ecori وxbai عمل الحاق ژن هدف به وکتور توسط آنزیم dnaلیگاز t4 صورت گرفت. سازه نوترکیب حاصل، با انتقال به باکتری e.coli سویه dh?? تکثیر یافت. رشد ارگانیسم در محیط lba حاوی آنتی بیوتیک زئوسین، حضور و تکثیر این سازه را در ارگانیسم تایید نمود. تایید نهایی سازه حاوی ژن، با colonypcr، استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخت، هضم آنزیمی سازه و تعیین توالی اثبات شد. در مرحله بعد، جهت بیان ژن هدف در مخمر، ابتدا وکتور حاوی ژن از باکتری dh??استخراج شد، سپس حامل با آنزیم saci خطی شده و با روش الکتروپوریشن به مخمر pichia pastoris سویه km71 انتقال یافت. ورود سازه حاوی ژن به کروموزوم مخمر با استخراج ژنوم مخمر و pcr (با استفاده از پرایمر های aox) تایید شد. سرانجام مخمر نو ترکیب در محیط bmmy تحت القاء متانول که سبب بیان و تولید آنزیم می شود، قرار گرفت. حضور آنزیم در محیط با تکنیک بلات نقطه ای نشان داده شد. نتایج توالی یابی ژن و بررسی آن با نرم افزار vector ntiو clcbio صحت عدم تغییر توالی اسیدهای آمینه این پروتئین نوترکیب را نشان داد.

اسهال به عنوان یک اختلال گوارشی و از عوامل رایج در مرگ و میر کودکان کشورهای در حال توسعه می باشد. در میان پاتوژن های باکتریایی اشرشیا کلی مولد اسهال (dec) یکی از مهم ترین عوامل اسهال اندمیک و اپیدمیک در سطح جهان است. هدف از تحقیق حاضر، تشخیص مولکولی گروه های اشرشیا کلی مولد اسهال در کودکان به روش multiplex pcr و ارزیابی حضور اشرشیا کلی o157:h7 در نمونه ها است. روش کار: در سال 1393 (اردیبهشت تا آذر)، برای مطالعه مقطعی به منظور جداسازی اشرشیا کلی-های مولد اسهال، نتایج کشت مدفوع 578 کودک زیر 10 سال مراجعه کننده (311 پسر، 267 دختر) به بیمارستان شهید مدنی خرم آباد، بررسی شد. ابتدا نمونه ها در محیط کشت مک کانکی آگار کشت داده شدند و سپس کلنی های صورتی رنگ (لاکتوز مثبت) در محیط کشت emb آگار کشت داده شدند، به منظور ارزیابی حضور اشرشیا کلی o157:h7 ، نمونه ها در محیط سوربیتول مک-کانکی حاوی سفکسیم و تلوریت پتاسیم نیز کشت داده شدند. تایید هویت جدایه های اشرشیا کلی با انجام تست های بیوشیمیایی افتراقی انجام گردید. نتایج: از 578 نمونه مدفوع جدا شده از کودکان مبتلا به اسهال، 186 جدایه اشرشیا کلی مولد اسهال تشخیص داده شد، سپس سروگروه اشرشیا کلی های انتروپاتوژن بررسی شد که در 23 نمونه epec جدا شد و بیشترین سروگروه مربوط به سروگروه iv بود. در نهایت 186 جدایه توسط روش multiplex pcr جهت تعیین گروه جدایه های اشرشیا کلی های مولد اسهال ( 4 پاتوتایپ etec ( enterotoxigenic escherichia coli)، epec ( enteropathogenic escherichia coli)، eiec( enteroinvasive escherichia coli) و stec( shiga toxin-producing escherichia coli) ) برای تشخیص ژن های lt ، st ، bfpa ، eaea، stx1، stx2 و ial مورد بررسی قرار گرفتند. بیشترین گروه جدا شده در بین 4 پاتوتایپ etec، epec ، eiec و stec مورد بررسی به ترتیب، etec با 15درصد، epecبا 14 درصد، stec با 7/9 درصد و eiecبا 83/4 درصد بودند. در هیچکدام از جدایه ها سروتیپ اشرشیا کلی o157:h7یافت نشد. بر اساس نتایج بدست آمده می-توان بیان کرد که 4 پاتوتایپ مورد بررسی از عوامل مهم ابتلا به اسهال در کودکان می باشند و بایستی برای شناسایی آن ها از روش-های نوینی بهره گرفت.

کلامیدیا تراکوماتیس یک باکتری درون سلولی اجباری وشایع ترین عفونت منتقل شونده ی جنسی دردنیامی باشد که باعث بیماریهای تناسلی می شود.مهمترین فاکتورخطردر ارتباط با عفونت های تناسلی این باکتری،رفتارهای جنسی می باشد. این باکتری اصلی ترین علت بیماری التهابی لگنی و عقیمی حاصل ازآن می باشد . pcrیک روش حساس واختصاصی برای شناسایی مقادیرکمی ازdna این باکتری در نمونه کلینیکی است. هدف ازاین مطالعه تعیین فراوانی باکتری کلامیدیا تراکوماتیس با استفاده از pcrپلاسمیدی وتعیین واریته سرمی با استفاده از تکنیک pcr-rflp مبتنی بر ژنomp1وآنزیمهای alu i ,hinf i ,ecor i ,hpa ii در 620 نمونه اندوسرویکسی زنان دارای عفونت تناسلی درشهر اهواز بود. فراوانی این باکتری در نمونه های اندوسرویکسی 18درصد بدست آمد،گروه سنی 26تا 35 سال شیوع بیشتری رانشان دادند ولی این یافته به لحاظ آماری معنی دار نبود. علامت خونریزی القاء شد ه توسط سوآب به طور معنی داری در جمعیت کلامیدیاتراکوماتیس مثبت فراوان تر دیده شد. آنالیز الگوی rfl pژن omp-1 جهت تعیین واریته سرمی ،واریته های سرمیd،eو fرا فراوانتر ازبقیه نشان داد و همچنین ارتباط معنی داری بین علامت درد پایین شکمی وسروگروه f/gدیده شد