استخوان یکی ازبافتهای پیوندی اصلی است که در ساختار آن کلاژن وجود دارد.کلاژن نوع بیش از 90 درصد ماتریکس استخوان را تشکیل می دهد. ایجاد اتصالات عرضی بین کلاژن به صورت pyridinium cross link در ناحیه تلوپپتید غیر هلیکال از یک زنجیره،با ناحیه هلیکال از زنجیر کناری،منجر به استحکام استخوان در طول بلوغ کلاژن می شود.ترکیبات پیریدینیوم کراس لینک،با تجزیه شدن استخوان،وارد گردش خون شده و بدون تغییرات در ادرر ترشح می شود.میزان این ترکیبات، برای افرادی با سن و جنس مشخص،یک حد معینی دارد.در بیماری های متابولیکی استخوان،مثل بیماری پوکی استخوان،استخوان به صورت غیر نرمال شروع به تجزیه شدن میکندو بنابر این،میزان ترکیبات پیریدینیوم کراس لینک ، بیش از حد معمول در ادرار ترشح می شود.بنابر این استفاده کلینیکی از این قطعات،برای تشخیص این بیماری قابل انجام می باشد.در بیماری پوکی استخوان که به آن بیماری خاموش نیز گفته می شود،استخوانها بدون هیچ تظاهر بالینی ، شروع به تجزیه می کنند و هنگامی که علائم آن به صورت تظاهرات بالینی یعنی درد و یا شکستگی بروز می کند،بیماری در مرحله پیشرفته است. پوکی استخوان درزنان به علت تغییرات هورمونی ، بخصوص در زمان بعد از یائسگی چهاربرابر مردان است.در کشور ما متوسط تراکم استخون در افراد سالمدر مقایسهبا کشور هایی مثل ژاپن، 9/3 درصد بالاتر ،و نسبت به آمریکا ،6/4 درصد کمتر است.این در حالی است که در کشور آمریکا ،55 درصد آنها در معرض پوکی استخوان قرار دارند.طبق آمار وزارت بهداشت،47 درصد زنان و 44 درصد مردان بالای 50 سال در ایران دچارکاهش تراکم استخوان هستند.بر طبق آمار در ایران در طول یک سال،شاهد ازدست رفتن 36761 سال از عمر کل جامعه به علت بیماری پوکی استخوان هستیم.تخمین زده می شود.در آمریکا سالانه فقط 10 بیلیون دلار، هزینه این بیماری میشود.در حال حاضر برای تشخیص این بیماری از سنجش تراکم استخوان (دانسیتو متری )استفاده می شود. سنجش تراکم استخوانی bmd ،برای یک سری افراد خاصی مثل زنان بالای 65 سال و زنان یائسه زیر 65 سال، در صورت داشتن سابقه شکستگی، درمان طولانی با کورتیکوئیدها، مردان 70 ساله و بالاتر انجام می گیرد و به علت هزینه های بالا ،در افراد عادی یا افراد مورد شک ، نمی تواند قابل اجرا باشد.از طرفی، اختلالات ساختاری استخوان ،(استنوارتریت شدید) تفسیر نتایج را مخدوش می کند. و نیز معمولاً در کنار این روش، تشخیص کمکی نیز مثل درخواست آزمایش cbc- esr- fbs- na- k- ca--ast-alt -tshآلکالین فسفاتاز و ... نیز انجام می گیرد که این روش خود زمان بر و هزینه بر می باشد. در مورد رادیوگرافی ساده، باید گفت که پرتونگاری x-ray تا زمانیکه تراکم استخوان بیش از30 % کاهش نیافته باشد، مشاهده نمی شود و به ظاهر دانسیته نرمال را نشان می دهد. از طرفی تفسیر تصاویر تا حدی وابسته به قضاوت رادیولوژیست است و نباید مبنای شروع درمان قرار گیرد. بنابراین وجود یک روشی که اولا در تمام موارد سنی و تمام افراد قابل اجرا باشد، به راحتی تست گیری انجام شود و برای بیمار مشکل ایجاد درد یا ناراحتی به وجود نیاید، نیازی به آزمایشات جانبی وجود نداشته باشدو مهم تر اینکه هزینه کم تر برای بیماران داشته و در مدت زمان کم تری نتیجه آزمایش معین شود،ضروری است. لازم به ذکر است که در سالهای اخیر از میزانpro ادرار برای تعیین پوکی استخوان استفاده می شد، ولی با توجه به اینکهpro در کبد متابولیز می شود و تحت تاثیر رژیم غذایی می باشد، پس مارکر دقیق در تعیین پوکی استخوان نیست. همان طوری که قبلا شرح داده شد، ترکیبات پیریدنیوم کراس لینک که در زمان تجزیه استخوان وارد ادرار می شوند، یک میزان مشخصی در افراد سالم با سنین معلوم دارند، بررسی تغییرات مارکر مربوطه در ادرار توسط متد الایزا ،می تواند: - به خوبی نماینده تجزیه استخوان بوده و به این ترتیب ما را قادر سازد تا بیماری را در مراحل بسیار اولیه و در افراد مختلف با هزینه بسیار اندک ، دقت بسیار بالاوزمان بسیار کوتاه شناسایی کنیم. در این تحقیق بعد از خالص و جدا کردن ترکیبات پریدیم کراس لینک از استخوان به روش hplc ترکیب آنتی ژن توسط ادجوانت مناسب به خرگوش در دفعات متعدد تزریق و پس از دو ماه خون گیری انجام شد پس از جدا شدن نمونه خونی و رسوب پروتین میزان تیتر اولیه ab1/3000 به دست آمد ،که این تیتر بالا نشان دهنده میزان تولید خوب و کافی ab بوده است. پس از جدا کردن ab با روش deae سفارز اقدام به سنجش میزان آنتی ژن به روش الایزای sandwich نمودیم. رسم منحنی استادارد به روش الایزا جهت تعیین میزان آنتی ژن مجهول انجام گرفت از آنجایی که هدف اصلی ما تولید کیت پایدار شده برای تشخیص مارکر مربوطه بود، در مرحله بعدی، تثبیت توسط بستر آمین و نیز نانوذرات طلا انجام گرفت. بستر حاوی عوامل دی آمین بوده و به خوبی با آنتی بادی واکنش می دهد. استفاده از سوربیتول جهت پایدار سازی ab موجب پایدار شدن بیشتر آن در دمای آزمایشگاه، حتی بعد از سپری شدن زمان بیست روز می باشد. در روش دیگر با استفاده از بستر آمینی و نانوذرات طلای متصل شده به آن ab، اکسید شده که بیشترین توانایی و استحکام را در اتصال به نانوذرات طلا دارد، متصل شد. پس از استفاده از سوربیتول ،تحت آزمون الایزا قرار گرفت. کیت مربوطه در دمای آزمایشگاه تا یک ماه پایدار بود. از آنجایی که هدف اصلی ما از تولید کیت ، عرضه آن در سطح تولید تجاری می باشد ،کیت پایدار در دمای آزمایشگاه توانایی ذخیره سازی به مدت چندین سال در دمای4? را دارد. و این مزیت جهت استفاده کلینیکی از آن بسیار مهم و مفید می باشد

فاسیولیازیس از مهم ترین بیماری های مشترک میان انسان ودام می باشد که در اثر ابتلا انسانها و دام ها به گونه های مختلف جنس فاسیولا (f. hepatica, f. gigantica) ایجاد می شود. این بیماری در حالی که در جهان از شیوع بالایی برخوردار است در ایران نیز دارای تاریخچه ای طولانی و قابل توجه است. سازمان بهداشت جهانی تعداد موارد انسانی بیماری را در بیش از پنجاه کشور جهان 4/2-7/1 میلیون و تعداد افراددر معرض خطر ابتلا را حدود 180 میلیون نفر بر آورد نموده است. و این در حالی است که وسیع ترین همه گیری های آن در جهان در سالهای 1368 با حدود ده هزار نفر مبتلا و در سال 1378 با آلودگی بیش از پنج هزار نفر در گیلان رخ داده است. ثبت صدها مورد بیماری انسانی در فواصل این دو اپیدمی و پس از آن نشان می دهد که این استان به یک کانون مهم آندمیک بیماری تبدیل شده است. برای نفوذ به بافت، استقرار، تغذیه، فرار و تعدیل سیستم ایمنی، این انگل آنزیم ترشحی به نام کاتپسین l1 را ترشح می کند که به دلیل اینکه در تمام مراحل آلودگی در میز بان ترشح می شود و ایمونوژن قوی نیز می با شد از طرف سازمان بهداشت جهانی به عنوان مهم ترین آنتی ژن در اهداف تشخیصی معرفی شده است. تشخیص روتین بیماری روئیت میکروسکوپیک تخم انگل در مدفوع می باشد که 3 تا 4 ماه پس از ورود انگل اتفاق می افتد در حالی که دوره کمون بیماری بسیار کوتاهتر است و علائم کلینیکی چند هفته پس از ابتلا ظهور پیدا می کند. بنابراین در دوره حاد بیماری هیچگونه تخمی در بیماران وجود ندارد. از این رو مشاهده آنتی ژنها در گردش خون و کوپروآنتی ژن ها با استفاده از تکنیک الایزا وجود بیماری حاد در انسان را به اثبات می رساند و عدم وجود این آنتی ژن پس از درمان دارویی نشان دهنده موفقیت درمان است. لذا در این تحقیق ژن کاتپسین l1که برای اولین بار در ایران شناسایی و تعیین توالی شده است، پس از سنتزcdna از total rnaاستخراج شده از محلول خام هموژنایز شده انگل در pcrتکثیر یافت. پس از آنالیز های فیلوژنیک و بررسی ساختار مولکولی، بیان پروتئین نوترکیب به منظور تهیه مولکول های آنتی ژنیک جهت تزریق به خرگوش و با استفاده از وکتور بیانی pet21aدر میزبان باکتریایی e. coliسویه bl21a انجام گرفت و بعد از آن پروتئین از محلول خام هموژنایز باکتری استخراج شد. سپس آنتی ژن طی چهار هفته با فاصله چهارده روز به خرگوش تزریق شد. پس از تایید حضور آنتی بادی با روش های دات بلا تینگ و ژل دیفیوژن و تیتراسیون نهایی در الایزای مستقیم، خون گیری نهایی انجام شده و آنتی بادی با روش های peg precipitation و کرو ماتو گرافی استخراج شد. در نهایت بعد از تیتر سنجی و بهینه سازی آزمون الایزای ساندویچی، پایدار سازی آن در بستر آمینی کیتو سان و نانوذرات طلا انجام شد.

آلفا 1-آنتی تریپسین (?1at) گلیکوپروتئین 394 اسیدآمینه ای و دارای 3 جایگاه گلیکوزیلاسیون است که متعلق به خانواده سرین پروتئاز می باشد و می تواند رنج وسیعی از پروتئازها را مهار کند. ?1at ریه را از نوتروفیل الاستاز در حالت التهابی و عفونی محافظت می کند بنابراین مهارکننده نوتروفیل الاستاز نامیده می شود. عدم حضور یا عملکرد ناکارآمد ?1at در ریه منجر به عملکرد کنترل نشده الاستاز و شکست الاستین می شود که مشکلات تنفسی را به همراه دارد. ?1at نقش های بیولوژیک مختلفی شامل کنترل ترشح انسولین، فعالیت آنتی پروتئازی، محافظت از سلول های ? علیه آپپتوز القاء شده توسط سیتوکین، فعالیت به عنوان ترکیب ضد التهاب دارد اما اندام اصلی هدف این پروتئین ریه می باشد. یکی از استراتژی های درمانی برای فعالیت بهینه ?1at در حالت التهابی درمان جایگزین با استفاده از تزریق درون وریدی می باشد. در این حالت تنها 10% تا 15% از ?1at به اندام هدف یعنی ریه می رسد و احتمال آلودگی های ویروسی و باکتریایی به دلیل آنکه این ترکیب از پلاسما تهیه می شود، بالاست. استراتژی درمانی دیگر انتقال از طریق مجاری تنفسی می باشد. در این حالت نه تنها ?1at ائروسل مستقیماً به اندام هدف می رسد، بلکه از تجمع دارو اضافه در خون جلوگیری کرده و بنابراین میزان دارو بسیار کمتری مورد نیاز است. انواع نوترکیب ?1at حاصل از میزبان های یوکاریوتی مانند مخمر به عنوان میزبانی کارآمد تحت مطالعه می باشد. علاوه بر پیدایش و بهینه سازی انواع نوترکیب ?1at، تلاش در بسته بندی ?1at در میکرو و نانوذرات جهت انتقال ریوی نیز تحت بررسی است. پلی (d، l لاکتید-کو-گلیکولید) (plga) پلی مر قابل تجزیه و قابل دسترسی زیستی است که توسط سازمان دارو و غذا آمریکا (fda) برای آزادسازی مرحله ای و انتقال کنترل شده دارویی ماکروملکول هایی مانند پپتیدها و پروتئین ها تایید شده است. از آنجایی که داروهای با سایز کوچکتر در سیستم های انتقال دارو ارجح می باشند، در این مطالعه 5 ساختار کوچک شده و مهندسی شده بر اساس مطالعات تئوریک طراحی و ساخته شد. هر کدام از این توالی ها در وکتور بیانی pgapz? درج و در مخمر p. pastoris ترانس فورم شد. پس از بهینه سازی شرایط بیان در فرمانتور، پروتئین ها توسط کروماتوگرافی تعویض یونی تخلیص و فعالیت هر کدام با استفاده از تست مهار الاستاز اندازه گیری شد. دو پروتئین از پنج پروتئین بیان شده با بیشترین فعالیت انتخاب و مطالعات پلی مریزاسیون روی آن ها انجام گرفت. مشخص شد که ساختارها دارای فعالیت بیشتری از نمونه کنترل که نوع تجاری ?1at است دارند و میزان پلی مریزاسیون آنها تفاوتی با نوع تجاری ندارد. از طرف دیگر از دو تکنیک امولسیون دوگانه و امولسیون غیرآبی برای سنتز نانوذرات plga با نسبت های 50:50 و 75:25 حاوی ?1at استفاده شد. نانوذرات از لحاظ مرفولوژی سطح، توزیع سایز، تفرق اشعه x (xrd)، کارآیی انکپسوله شدن، آزادسازی in vitro دارو، اسپکتروسکوپی ftir، و کالریمتری dsc تعیین خصوصیت شدند. برای بررسی سیتوتوکسیسیتی نانوذرات، تست سیتوتوکسیسیتی سلولی بر روی رده سلولی سرطانی اپی تلیالی ریه cor l105 انجام گرفت. نانوذرات کروی با اندازه ای بین 100 نانومتر تا 1 میکرون بودند. کارآیی انکپسوله شدن با استفاده از تکنیک امولسیون دوگانه بالاتر بود. مطالعات xrd و dsc نشان داد که ?1at در حالت آمورف یا کریستال نامنظم در ماتریکس پلیمری وجود دارد. نسبت اسید لاکتیک به اسید گلیکولیک روی پروفیل آزادسازی ?1at تاثیر می گذارد. نسبت 50:50 از plga توانایی آزادسازی 60% از دارو را در 8 ساعت دارد اما نسبت 75:25 پروفیل طولانی تر و متداوم تری را نشان می دهد. مطالعات سیتوتوکسیسیتی نشان داد که نانوذرات آزاد و حاوی ?1at بر روی رشد سلولی بی تاثیر است و بنابراین سمیتی برای سلول به همراه ندارد. سپس توانایی نئوبولیزاسیون نانوذرات بررسی شد و 80% بازیافت گردید. مطالعات ریه ایزوله تهویه شده و پرفیوز شده نیز حاکی از ته نشست دارو در ریه و بازیافت 13% از ?1at بود.

چکیده ندارد.