کلونینگ و تعیین توالی ژن کد کننده لیپوپروتئین سطحی LipL41 در باکتری لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار گریپوتیفوزا

زمینه و هدف: لپتوسپیروزیس یک بیماری عفونی می‌باشد که توسط سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا ایجاد می‌شود. افزایش ارتقای کیفی روش‌های کاربردی و معتبر در تشخیص این بیماری و همچنین تولید واکسن نوترکیب ، نیاز به آنتی‌ژن‌های اختصاصی دارد که در بین سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا یکسان و مشابه است. پروتئین‌های غشای خارجی لپتوسپیرا (OMPs)، آنتی‌ژن‌های مؤثری می‌باشند که قادر به تحریک پاسخ ایمنی مشخص در دوره عفونت می‌باشند. در بین این آنتی‌ژن ها، LipL41 یک لیپو پروتئین ایمونوژنیک است که تنها در سرووار‌های بیماریزا وجود دارد بنابراین می‌توان آن را به عنوان کاندیدای مناسبی در تهیه واکسن مؤثر و کارآمد و همچنین در روش‌های تشخیصی در نظر گرفت. به منظور تعیین میزان حفاظت شدگی ژن lipL41، این ژن در لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار واکسینال و بومی گریپوتیفوزا کلون و تعیین توالی گردید. مواد و روش‌ها: لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار واکسینال و بومی گریپوتیفوزا جهت تلقیح در محیط کشت انتخابی(EMJH) مورد استفاده قرار گرفت و استخراج DNA ژنومی به روش استاندارد فنل کلروفرم انجام گردید. ژن lipL41 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور pTZ57R/T کلون گردید و به سلول‌های مستعد شده E. coli سویه Top10)) انتقال داده شد. سپس پلاسمید نوترکیب استخراج و تعیین توالی گردید. سکانس‌های مرتبط به منظور آنالیز همولوژی با سکانس‌های ثبت شده در بانک ژنی مقایسه شدند. یافته‌ها: محصول PCR ژن lipL41 یک قطعه 1065جفت بازی بود. که این قطعه در سرووار غیر بیماریزا L. biflexa مشاهده نگردید. بررسی توالی نوکلئوتیدی نشان داد که قرابت نوکلئوتیدی ژن lipL41 بین سرووار واکسینال RTCC2808)) و سرووار بومی بیماریزای RTCC2825)) گریپوتیفوزا 100% بود. نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که ژن lipL41 با 9/95% تشابه یک ژن حفاظت شده در سرووارهای مختلف بیماریزا می‌باشد. از این رو ژن کلون شده در تحقیق حاضر را می‌توان با هدف بیان پروتئین نو ترکیب در تهیه واکسن نوترکیب مؤثر و کارآمد و در روش‌های تشخیصی لپتوسپیروزیس مورد هدف قرار داد.