کشت سلول‌های اندوتلیال قرنیه انسانی در محیط آزمایشگاه با استفاده از مایع آمنیوتیک انسانی

Authors

باقری, ابوذر دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی

بالاقلی, سحر دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی

سهیلی, زهراسهیلا موسسه ملی مهندسی ژنتیک و فن‌آوری زیستی

فیضی, سپهر دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی

کریمی اول, سایه دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی

Abstract:

هدف: ارزیابی اثر مایع آمنیوتیک انسانی (Human Amniotic Fluid; HAF) بر روی رشد سلول‌های اندوتلیال قرنیه انسانی (Human Corneal Endothelial Cells; HCECS) و هم‌چنین تعریف محیط کشت برای رشد این سلول‌ها. روش پژوهش: سلول‌های آندوتلیوم در محیط 12DMEM-F که با سرم جنین گاوی 20 درصد غنی شده بود کشت داده شدند. پس از اشباع محیط کشت، سلول‌ها مورد درمان با تریپسین قرار گرفته و به محیط کشت حاوی سرم جنین گاوی 20 درصد و مایع آمنیوتیک انسانی 10، 20 و 30 درصد منتقل شدند. HAF از زنان باردار در سه ماهه اول بارداری گرفته شد. جهت ارزیابی اثر HAF بر روی رشد و توانایی زیستی سلول، از روش ELISA برای بررسی تکثیر و مرگ سلولی استفاده شد. ماهیت سلول‌های کشت داده شده در محیط حاوی مایع آمنیوتیک 20 درصد با استفاده از روش‌های ایمونوسیتوشیمی و Real time PCR جهت نشانگرهای ویژه HCECs شامل 67Ki-، Vimentin، Na/K-ATPase، و 1ZO- بررسی شد. یافته‌ها: کشت‌های اولیه در محیط حاوی مایع آمنیوتیک منجر به رشد و تکثیر سلول‌های آندوتلیوم در 8/95 درصد موارد گردید. Real time PCR و ایمونوسیتوشیمی نشان داد که نشانگرهای Na/K-ATPase و 1ZO- که ویژه HCECs می‌باشند در سلول‌های کشت شده در محیط حاوی مایع آمنیوتیک 20 درصد، بیش‌تر از محیط شاهد (حاوی سرم جنین گاوی) بیان می‌شود. آزمایش ایمونوسیتوشیمی روی سلول‌‌های اندوتلیال کشت داده شده با HAF 20 درصد، افزایش بیش‌تری را در بیان نشانگرهای مذکور در مقایسه با محیط‌های حاوی غلظت‌های 10 درصد و 30 درصد HAF نشان داد. تعداد سلول‌های اندوتلیال کشت داده شده در HAF 20 درصد که نشانگرها را بروز می‌دادند برای شاخص‌های Vimentin ،1-ZO ، Na/K-ATPase به ترتیب 98 درصد، 95 درصد، و 100 درصد بود. بیش از 80 درصد سلول‌ها، 67-Ki را بروز می‌دادند که نشان می‌دهد سلول‌ها ظرفیت تکثیر خود را حفظ کرده‌اند. میزان افزایش شاخص‌های Vimentin ،1-ZO ،Na/K-ATPase به ترتیب 5 برابر (003/0P=)، 5/3 برابر (001/0P=) و 3 برابر (03/0P=) در محیط حاوی HAF 20 درصد در مقایسه با محیط شاهد بود. Real time PCR افزایش 400 برابری (008/0P=) در بیان ژن Na/K-ATPase و افزایش 500 برابری (01/0P=) در بیان ژن 1-ZO در محیط حاوی HAF 20 درصد در مقایسه با محیط شاهد نشان داد. نتیجه‌گیری: محیط حاوی HAF 20 درصد به طور مشخصی باعث افزایش توانایی تکثیر سلول‌های آندوتلیال قرنیه انسان می‌شود ولی مشخصات مورفولوژی و آنتی‌ژنیک آن‌ها را حفظ می‌نماید. بنابراین HAF می‌تواند به عنوان یک مکمل غنی در مطالعات تکثیر HCECs در نظر گرفته شود. · مجله چشم‌پزشکی بینا 1393؛ دوره 19، شماره 3: 233-222.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

کشت کراتینوسایت‌های انسانی در محیط کشت عاری از سرم

چکیده زمینه و هدف: سلول‌های کراتینوسایت انسانی ابزار مفیدی جهت انجام مطالعات سلول درمانی به منظور بهبود سوختگی‌ها و زخم‌های مزمن محسوب می‌شوند. همچنین کراتینوسایت‌ها با کارائی بالا به سلول‌های پرتوان القائی تبدیل می‌شوند. در این مطالعه جزئیات مربوط به روش‌های جداسازی، کشت و تکثیر سلول‌های کراتینوسایت از نمونه پوستی ختنه‌گاه انسان، توصیف شده است. روش بررسی: در این مطالعه که از نوع آزمایشگاهی، ...

full text

کشت سلولهای پوششی رنگدانه دار شبکیه جدا شده از کره های چشم انسانی و مطالعه اثر مایع آمنیوتیک انسانی بر پدیده های رشد و دگرتمایز در این سلولها

هدف: ارزیابی اثر القایی مایع آمنیوتیک انسانی بر رشد و دگرتمایز سلولهای پوششی رنگدانه دار شبکیه به سلولهای گانگلیونی شبکیه و گیرنده های نوری استوانه ای شکل روشها: سلولهای پوششی رنگدانه دار شبکیه از کره چشم اجساد انسانی جنینی و نوزاد زیر یک سال جدا شده و در محیط کشت غنی شده با ده درصد سرم جنینی گوساله کشت داده شدند. پس از پر شدن ظرف کشت، سلولهای کشت داده شده تریپسینه شده مرتبا پاساژ داده شدن...

15 صفحه اول

مقایسه کشت جنین های انسانی به همراه سلولهای گرانولوزا در مایع فولیکولی و Ham s F10 با محیط سرم ساختنی جایگزین

full text

شناسایی، کشت و تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی انسانی

سلول های بنیادی اسپرماتوگونی (Spermatogonial Stem Cells) یا SSC ها جمعیتی از سلول های بنیادی هستند که با ایجاد اسپرم در تمام طول زندگی مردان قادر به حفظ تولید مثل می باشند. در پستانداران غیر پریمات، این سلول های بنیادی به ترتیب A-single(As)، A-paired(Apr) و A-aligloed(Aal) نامیده می شوند که پیش ساز های سلول های اسپرماتوگونیهستند. در انسان به علت محدودیت مطالعات روی سلول های (SSC)یافته های اندکی...

full text

بررسی مورفولوژی و ایمونوفنوتیپ سلولهای بنیادی مزانشیمی بعد از تعویض سرم گاوی محیط کشت به سرم انسانی

Background: Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are used for cell therapy purposes. Fetal Bovine Serum (FBS) in culture media is essential for growth. As FBS may induce an immunological reaction and transfer pathogenic agents to MSC recipients, this study was designed to evaluate Adipose Tissue Stem Cells (ASCs) in FBS, human serum, switching of FBS to human serum and vice versa by cytology and flow ...

full text

کشت کراتینوسایت های انسانی در محیط کشت عاری از سرم

چکیده زمینه و هدف: سلول های کراتینوسایت انسانی ابزار مفیدی جهت انجام مطالعات سلول درمانی به منظور بهبود سوختگی ها و زخم های مزمن محسوب می شوند. همچنین کراتینوسایت ها با کارائی بالا به سلول های پرتوان القائی تبدیل می شوند. در این مطالعه جزئیات مربوط به روش های جداسازی، کشت و تکثیر سلول های کراتینوسایت از نمونه پوستی ختنه گاه انسان، توصیف شده است. روش بررسی: در این مطالعه که از نوع آزمایشگاهی، و ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}

Journal title

بینا

volume 19 issue 3

pages 222- 233

publication date 2014-04

unfollow

{@ msg @}

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com