مقایسه خاموش کننده های فلورسنت و غیرفلورسنت روش Real-time PCRدر پلات های آمپلیفیکیشن استاندارد ژن دلتا-6 دساتوراز در کشت سلولی رده PANC-1

  زمینه: استفاده از خاموش­کننده­های غیرفلورسنت در روش Real-time PCR برای بررسی بیان ژن مناسب است.   هدف: مطالعه به منظور مقایسه توانایی دو نوع خاموش کننده فلورسنت و غیرفلورسنت با توجه به نتایج Real-time PCR انجام شد.   مواد و روش­ها: این مطالعه تحلیلی در سال 1391 در آزمایشگاه رفرانس دانشگاه علوم پزشکی قزوین انجام شد. سلول­های سرطانی پانکراس انسان ( (PANC-1 در فلاسک­های 75 سانتی­متری کشت و تکثیر شدند. سپس 106×3 سلول در پلیت­های 6 خانه­ای تحت تأثیر داروهای مؤثر بر سیگنال­های خاص درون سلولی قرار گرفتند و میزان تغییر بیان ژن دلتا-6 دساتوراز در شرایط یکسان، یک بار با خاموش­کننده فلورسنت و بار دیگر با خاموش­کننده غیرفلورسنت با روش Real-time PCR بررسی شد. داده­ها با آزمون آماری تی و براساس روش ΔΔCT با فرض کارآیی 100 درصد تحلیل شدند.   یافته­ها: خاموش کننده­های فوق، با جذب متفاوت نشر گزارش­گر (Reporter) ، باعث تفاوت در نتایج حاصل از Real-time PCR شدند. پلات آمپلیفیکیشن هنگام استفاده از خاموش­کننده غیرفلورسنت، دقیق­تر و میزان خط پایه ( Base line ) پایین­تر بود و به این ترتیب نسبت سیگنال به noise کاهش یافت. با استفاده از خاموش­کننده غیرفلورسنت، به دلیل افزایش دمای ذوب (Tm) و کاهش اتصالات غیراختصاصی، میزان عددی دوره آستانه ( CT ) نیز کاهش یافت.   نتیجه­گیری: با توجه به یافته­ها، استفاده از خاموش­کننده غیرفلورسنت نسبت به فلورسنت مناسب­تر و جای­گزین بهتری برای خاموش کننده­های متداول، به خصوص در مطالعه­های تشخیصی آلل­ها و SNP (single nucleotide polymorphism) بود .