معتبرسازی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC ) جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان

سابقه و هدف: لیزینوآلانین طی تهیه و فرآوری شیر خشک  در اثر حرارت، pH قلیایی با واکنش حذفی بتا، تشکیل دهیدروآلانین و واکنش با ترکیبات آمین دار ایجاد می‌گردد. در این مطالعه طراحی و معتبر سازی روشی مناسب جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان  با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) مد نظر قرار گرفت. مواد و روش‌ها: در این پژوهش ابتدا شرایط بهینه HPLC  (ستون C18، آشکارساز فلورسانس، مشتق سازی توسط دنسیل کلراید، سرعت جریان فاز متحرک ml/min  9/0، شویش گرادیانت و فاز متحرک شامل بافر فسفات  7=pH  و استونیتریل) تعیین شد. بر اساس شرایط فوق روش معتبر سازی گردید و کارآمدی روش معتبر شده با آنالیز 10 نمونه شیر خشک بررسی شد. یافته‌ها‌: نمودار کالیبراسیون در محدوده غلظتی 80- 5  میلی‌گرم بر لیتر، خطی بود. ضریب همبستگی 9949/0= R2 به دست آمد. حد تشخیص (Limit of Detection) mg/L2 و حد تعیین مقدار (Limit of Quantification)mg/L 5 و درصد بازیافت (Recovery) 8/87 _ 7/83 درصد به دست آمد. در ارزیابی دقت روش، انحراف استاندارد نسبی (RSD%) سطح منحنی و غلظت به دست آمده محاسبه شد. برای Intra day به ترتیب کمتر از 87/3 و  7/2 درصد و برای Inter day  به ترتیب کمتر از 2/5 و 4/7 درصد به دست آمد. در 7 مورد از شیرهای آنالیز شده، لیزینوآلانین شناسایی نشد و در 3 نمونه مقدار آن بینLOD, LOQ  به دست آمد. نتیجه گیری: این روش در جهت تشخیص و شناسایی لیزینوآلانین در شیرخشک نوزادان از دقت، صحت و کارایی لازم برخوردار بوده و در دسترس و مقرون به صرفه می‌باشد. واژگان کلیدی: لیزینوآلانین، شیر خشک نوزادان، کروماتوگرافی مایع باکارایی بالا، آشکارساز فلورسانس، معتبرسازی