جداسازی و کلونینگ ژن اکسیدوردوکتاز از یک سویه باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس

سابقه و هدف: یکی از محدودیت‌های فرآیند پالایش و مصرف مواد نفتی مشکلات ناشی از وجود ترکیبات گوگردی در آن‌ها است. استفاده از سوخت‌های فسیلی منجر به آزادسازی SO2 و به‌دنبال آن آلودگی محیط‌زیست می‌شود. برای حل این مشکلات، حذف میکروبی گوگرد پیشنهاد شده است. از آن‌جا که کارایی باکتری‌های سولفورزدا محدود است، توجه محققین به افزایش کارایی آن‌ها از طریق دست‌کاری‌های ژنتیکی معطوف شده است. انجام چنین دست‌کاری‌هایی معطوف به بررسی ژنتیک فرایند حذف گوگرد باکتری‌های بومی و سپس کلون کردن ژن‌های مؤثر در این فرایند است. در این رابطه، چند سویه باکتری در ایران جداسازی شدند‌ و مورد بررسی قرار گرفتند. سه ژن C، B و A dsz، دارای توالی DNAی، ٤ کیلوبازی هستند که حامل ژن‌های سولفورزدا برای مسیر 4S می‌باشند، که این توالی، در باکتری تازه جدا شده رودوکوکوس FMF شناسایی و جداسازی شد و سپس در باکتری سودوموناس آئروجینوزا کلون گردید. ژن dszD تولید کننده آنزیم اکسیدوردکتاز در جهت مسیر سولفورزدایی 4S می‌باشد. در این طرح اقدام به شناسایی، جداسازی و کلونینگ dszD از یک سویه باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس نموده و سپس کلون مذکور را تأیید نمودیم. مواد و روش‌ها: یک سویه باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس را که دارای فعالیت سولفورزدایی است در داخل شیکر انکوباتور RPM ٢٠٠ و٣٧ درجه سانتی‌گراد رشد داده شد و DNA ژنومی آن استخراج گردید و سپس در شرایط بهینه، PCR انجام گرفت. ژن اکسیدوردوکتاز (ژن dszD) از روی ژل آگارز استخراج و در پلاسمید PTZ57R کلون و داخل میزبان α) E-coli (DH5 ترانسفورم شد. نقشه ژنی این پلاسمید نوترکیب با آنزیم‌های محدودکننده به‌دست آمد و سپس تعیین توالی و همولوژی‌های لازم انجام گرفت. یافته‌ها: با توجه به این‌که باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس IGTS8 استاندارد، دارای سویه‌های مختلف می‌باشد و همین‌طور از تشابه توالی نوکلئوتیدی بین ژن اکسیدوردوکتاز باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس IGTS8 استاندارد و ژن اکسیدوردوکتاز رودوکوکوس اریتروپولیس مورد آزمایش، این طور به نظر می‌رسد که سویه در دست بررسی می‌تواند شباهت‌ها و یا قرابت‌هایی با باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس IGTS8 استاندارد داشته باشد. نتیجه‌گیری: نتیجه سکانس ژن اکسیدوردوکتاز این سویه از باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس که تحت نام FRF.Seq است، نشان می‌دهد که تعداد نوکلئوتیدهای مربوط به ژن اکسیدوردوکتاز باکتری مورد آزمایش مساوی با تعداد نوکلئوتیدهای مربوط به باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس IGTS8 استاندارد یعنی bp۵٧٩ است.