ترانسفکت سلول حشره Sf9 توسط باکولوویروس نوترکیب واجد ژن Core+1 ویروس هپاتیت سی سویهJFH1 ژنوتایپ 2a به منظور بیان این پروتئین

Authors

فریده سادات سجادیان فرد کارشناس ارشد، گروه میکروب شناسی، دانشکده علوم و فناوری های نوین، واحد علوم دارویی دانشگاه آزاد اسلامی-تهران

پونه رحیمی دانشیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، گروه ویروس شناسی پزشکی، تهران

Abstract:

سابقه و هدف: در سال های اخیر پروتئین جدیدی بنام Core+1 گزارش شده است که به وسیله یک تغییر ریبوزومی 1+ در ناحیه کد کننده پروتئین Core ویروس هپاتیت سی تولید می شود. این مطالعه با هدف طراحی و ساخت وکتور باکولوویروس واجد توالی Core+1 HCV-2a (JFH1) تولید باکولوویروس نوترکیب و تایید ترانسفکت آن در سلول های حشره انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه، از ژن Core+1 HCV-2a (JFH1) که در پلاسمید pUC57 به صورت تجاری سنتز شده بود استفاده گردید. ژن مورد نظر در پلاسمید pFastBac-HTA همسانه سازی مجدد شد و توسط این وکتور انتقالی در میزبان اشریشیا کلی DH10Bac با عمل ترانسپوزیشن، بکمید باکولوویروس نوترکیب به دست آمد. سازه نوترکیب پس از تایید با واکنش زنجیره ای پلی مراز، برای ساخت با کولوویروس نوترکیب در سلول حشره Sf9 ترانسفکت گردید. وجود پروتئین نوترکیب Core+1 در سلول حشره با روش SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. یافته ها: همسانه سازی صحیح ژن 1+Core در وکتور انتقالی pFastBac با استفاده از برش آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. واکنش زنجیره ای پلی مراز نشان دهنده صحت طول نواحی تکثیر یافته هدف روی بکمید، ایجاد ترانسپوزیشن و نوترکیبی بکمید نوترکیب بود. اثرات سایتوپاتیک سلول Sf9 نشان دهنده ایجاد باکولوویروس نوترکیب بود. پروتئینCore+1 HCV-2a (JFH1) به طور موفقیت آمیز بیان گردید. نتیجه گیری: با طراحی و ساخت وکتور باکولوویروس و تولید باکولوویروس نوترکیب می توان پروتئین Core+1 مشابه با پروتئین ساخته شده ویروسی را بیان نمود. این عمل پایه انجام مطالعات آینده خواهد بود.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

ترانسفکت سلول حشره sf۹ توسط باکولوویروس نوترکیب واجد ژن core+۱ ویروس هپاتیت سی سویهjfh۱ ژنوتایپ ۲a به منظور بیان این پروتئین

سابقه و هدف: در سال های اخیر پروتئین جدیدی بنام core+1 گزارش شده است که به وسیله یک تغییر ریبوزومی 1+ در ناحیه کد کننده پروتئین core ویروس هپاتیت سی تولید می شود. این مطالعه با هدف طراحی و ساخت وکتور باکولوویروس واجد توالی core+1 hcv-2a (jfh1) تولید باکولوویروس نوترکیب و تایید ترانسفکت آن در سلول های حشره انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه، از ژن core+1 hcv-2a (jfh1) که در پلاسمید puc57 به ...

full text

همسانه سازی تمام طول ژن E2 از ژنوتیپ 2a استرین JFH1 ویروس هپاتیت سی درون وکتور pET28a(+) و انتقال آن به باکتری اشریشیاکلی سویه DH5α

سابقه و هدف: پوشش گلیکوپروتئینی E2 ویروس هپاتیت سی برای ورود ویروس به سلول های میزبان مورد نیاز است، همچنین به دلیل اختلاف توالی نوکلئوتیدی در ناحیه C ترمینال ژن E2 تنوع ویروسی به وجود می آید که موجب پایداری عفونت می گردد، در نتیجه این ژن هدف اصلی برای تولید آنتی بادی های خنثی کننده و ساخت واکسن می باشد. در این تحقیق نیز جهت مطالعات مقدماتی، تمام طول ژن E2 از ژنوتیپ 2a استرین JFH1 ویروس هپاتیت ...

full text

بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت C در مخمر پیکیا پاستوریس

سابقه و هدف: عفونت ویروس هپاتیت C با اتصال پروتئینE2 ویروس به گیرنده سطح سلول کبد انسان آغاز می شود. بنابراین به عنوان یکی از اهداف تحقیقات دارو و واکسن بر علیه این عفونت مطرح می باشد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف انتقال تمام طول ژن HCV-2a (JFH1) E2 توسط وکتور نوترکیب E2-pPICZAa به مخمر پیکیاپاستوریس سویه KM71H و بیان ژن یاد شده در این سیستم بیانی انجام شد. <stro...

full text

بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت C در مخمر پیکیا پاستوریس

full text

تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی‌ژنی از فاکتور 9 انعقادی در سلول‎های پستاندار

زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش‌ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور IX انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (CMV) که بیان یک مینی ژن فاکتور IX را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سا...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}

Journal title

دنیای میکروب ها

volume 9 issue شماره 2 (پیاپی 27)

pages 85- 95

publication date 2016-08-01

unfollow

{@ msg @}

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

ویروس هپاتیت سی پروتئین Core+1 سویه JFH1 سلول حشره Sf9 سیستم بیانی باکولوویروس

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com