بررسی ایمنی‌زایی آنتی‌ژن‌های STxB و STxB-IpaD به‌صورت نازال در رت‌های آزمایشگاهی

  سابقه و هدف: باکتری‌های شیگلا و ایشرشیا‌کلی شایع‌ترین عامل اسهال است و واکسن موثری علیه آن‌ها تولید نشده است. پروتئین IpaD نقش مهمی در تهاجم، بیماری‌زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلاها دارد. یکی دیگر از فاکتورهای بیماری‌زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1 و E. coli O157:H7 انتروتوکسین شیگلا یا (STxB) می‌باشد. با ممزوج پروتئین IpaD با STxB می‌توان کاندیدای واکسن مناسب تهیه نمود. در این مطالعه تیتر آنتی‌بادی پروتئین‌های نوترکیب STxB-IpaD ممزوجی و STxB نازالی و ایمنی‌زایی آن‌ها در رت با یک‌دیگر مقایسه شده است. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، وکتورهای (pET28-stxB) ,(pET28-ipaD-stxB) از مرکز زیست‌شناسی دانشگاه امام حسین (ع)تهیه گردید. با ترانسفورم این وکتورها به درون باکتریcoli BL21 DE3.E، به‌وسیله PCR و برش آنزیمی تایید شدند. پروتئین‌های نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفتند. بیان ژن‌های STxB-IpaD ممزوجی و STxB تحت القای IPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی‌ژن‌های حاصل در چهار نوبت متوالی به‌صورت نازال به رت‌ها در گروه پنج تایی تجویز شدند. آنتی‌بادی پلی‌کلونال تولید شده در سرم رت‌ها اندازه‌گیری گردید. یافته‌ها: نتایج الایزا نشان داد که آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن‌ STxB در رت‌ها تولید شده و با ممزوج شدن IpaD به STxB میزان تیتر آنتی‌بادی نسبت به تیتر آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن‌ STxB افزایش یافته است. رت‌های ایمن‌شده با آنتی‌ژن‌ STxB توانستند تا 6 برابر LD50 و رت‌های ایمن‌شده با آنتی‌ژن STxB-IpaD تا 10 برابر LD50 شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند.  نتیجه‌گیری: پروتئین حاصل از امتزاج ژن‌های IpaD و STxB، می‌تواند اثر ایمنی‌زایی آنتی‌ژن STxB را افزایش دهد. پروتئین‌های ممزوجی با پروتئین نوترکیب STxB را به‌صورت نازالی و بدون ادجوانت شیمیایی به‌عنوان کاندید مناسب برای تولید واکسن نوترکیب علیه انواع شیگلا و ایشرشیا‌کلی می‌توان توصیه نمود.