ایجاد پلاک توسط سویه V4ویروس عامل بیماری نیوکاسل بر روی کشت سلولی و بررسی مولکولی با روش واکنش زنجیره پلیمراز نسخه‌برداری معکوس RT-PCR))

author

  • ساناز سبحانی، محمدجواد مهربانپور . .
Abstract:

امروزه در بسیاری از کشورهای دنیا واکسن کلون شده مورد استفاده قرار می‌گیرد. جهت کلون کردن یک ویروس، یکی از راه‌ها رشد ویروس بر روی کشت سلول و جدا کردن پلاک‌های مجزا و متفاوت و بررسی آنها از لحاظ مورفولوژی و ژنتیکی است. دراین تحقیق، ابتدا سلول‌های ) Madin-Darby Canine Kidney  MDCK) بصورت  تک لایه و بطور استاندارد کشت داده شد. رقت های مختلف ویروس به سلول‌های تک لایه MDCK همراه با تریپسین، آگار و سولفات منبزیوم اضافه شد. ویروس توانست بر روی سلول‌های فوق تکثیر و ایجاد اثر سایتوپاتیک (CPE) و  پلاک نماید. در رقت  6-10 تعداد 6 پلاک که از لحاظ شکل و اندازه تفاوت داشتند برداشته شدند و جهت تکثیر به تخم‌مرغ جنین دار 11-9 روزه تلقیح گردید. بعد از 48 ساعت مایع آلانتوئیک هر تخم‌مرغ حاوی پلاک برداشت ونسبت به جداسازی RNA هر پلاک اقدام گردید. منطقه شکست  (Cleavage site)پروتئین ادغامی(Fusion)  با تست RT-PCR  انجام شد و محصول PCR خالص‌سازی وسکانس گردید. سکانس نوکلئوتیدها و آمینواسیدها برای هر پلاک با سوش های ثبت شده در بانک ژنی مقایسه شد. سکانس نوکلئوتیدهای تمامی پلاک‌های بدست آمده، 97 تا 99% همخوانی با ویروس  V4در بانک ژنی را تایید نمود. هدف از این پژوهش ایجاد پلاک از سوش V4 ویروس نیوکاسل بر روی سلول‌های MDCK   جهت ایجاد پلاک‌های مجزا و در نهایت بررسی مولکولی پلاک‌های ایجاد شده می‌باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

مقایسه تشخیص عفونت سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی به روش کشت سلولی و روش مولکولی واکنش زنجیره ای پلمیراز (PCR)

مقدمه: عفونت سیتومگالوویروس، رایج ترین عفونت ویروسی در دوران بارداری می باشد. روش های متداول شناسایی این عفونت شامل: روش کشت ویروس، آزمون PCR و الایزا می باشد. مطالعه حاضر با هدف ارزیابی و مقایسه روش کشت سلولی و روش مولکولی PCR در تشخیص عفونت های سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی انجام شد. روش‌کار: این مطالعه مقطعی در سال 91-1390 بر روی 110 زن با سابقه سقط غیر عمد در بیمارستان های آموزشی دانش...

full text

شناسایی کلستریدیوم سپتیکوم به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)

li . a3"9rl aiL,;.61'l,.lo95g9s,r";lo.r;'l,q,Jtaer{J*-;*J5O+.t1r (PCR) al:9, .,rat5':.1"ri+.ltL" : g rb .a991la.iL;.5$.ir 95 2g;,r, A 9; *a llo'r,il.spyl.;-*l5ar-9ulA :ba!9al u9fe,rrl.lhrl ol..id4jlpbd I . 6.r^ir95o;U g9s'tn 31 6 tl ty. * y; : t;' 9 t l, PCR pt+l .bte-;IDNA 6l.g*l ,LJ:.1;"-J5d;t h+i5lt.#t^i .A.J'-6Jij j4'f.i 1l o'& u>lp uet a3l.5b.rol;;l osl'i;rl {f fupt{tl*J5 t;*Sl 9a:-...

full text

مقایسه حساسیت دو روش RT-PCR و RRT-PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. روش کار: استخراج RNA با استفاده از کیت RNease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. RNA استخراج شده ...

full text

شناسایی مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا به روش واکنش زنجیره پلیمراز بر مبنای ژن ligb

زمینه: لپتوسپیروز بیماری عفونی می باشد که به عنوان مهم ترین بیماری زئونوز شایع در جهان مطرح شده است. ligbیکی از مهم ترین پروتئین های غشاء خارجی لپتوسپیرا می باشد، ایمونوژن می باشد و تنها در لپتوسپیراهای بیماری زا وجود دارد. هدف این پژوهش تشخیص مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا به روش pcr بر مبنای ژن ligb می باشد. مواد و روش ها: در این بررسی از پنج سرووار بیماری زای لپتوسپیرا و یک سرووار غیر بیماری...

full text

مقایسه تشخیص عفونت سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی به روش کشت سلولی و روش مولکولی واکنش زنجیره ای پلمیراز (pcr)

مقدمه: عفونت سیتومگالوویروس، رایج ترین عفونت ویروسی در دوران بارداری می باشد. روش های متداول شناسایی این عفونت شامل: روش کشت ویروس، آزمون pcr و الایزا می باشد. مطالعه حاضر با هدف ارزیابی و مقایسه روش کشت سلولی و روش مولکولی pcr در تشخیص عفونت های سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی انجام شد. روش­کار: این مطالعه مقطعی در سال 91-1390 بر روی 110 زن با سابقه سقط غیر عمد در بیمارستان های آموزشی دانشگ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 13  issue شماره 1(پیاپی 52)

pages  1841- 1848

publication date 2016-03-20

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023